一株促梭罗草生长的莫海威芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开一株促梭罗草生长的莫海威芽孢杆菌及其应用，该菌株KKDD属于莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)，于2018年4月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.15579，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。分离自青海省可可西里盐碱地植被根围芽孢杆菌KKDD兼具固氮、拮抗病原菌、产IAA、催芽促生及耐盐碱特性，在高原草地植被恢复、生态农牧业中具有一定的研究及应用潜力。该KKDD菌株除了明显提高梭罗草生长的作用外，还具有降解秸秆木质纤维素、拮抗梭罗草产生真菌病害的作用。

【技术实现步骤摘要】
一株促梭罗草生长的莫海威芽孢杆菌及其应用
本专利技术属于生物农药
，特别涉及一株莫海威芽孢杆菌菌株及其在防治梭罗草真菌病害、促梭罗草生长中的应用。
技术介绍
梭罗草为禾本科小麦族以礼草属多年生草本植物，在我国，梭罗草集中分布在青海、西藏等地，是青藏高原的特有种，青海省梭罗草主要分布在三江源区冷凉高海拔地。梭罗草固土能力强，抗寒耐旱、抗风沙、耐盐碱，适应于气候条件恶劣的高寒草原生境，是高寒草原植物群落的主要组成成分之一，可用于生态恢复。由于梭罗草富有营养而又易于动物消化，可作为饲料，从而缓解秋冬季节青藏高原草场枯黄后，饲料不足的现象。青藏高原海拔高、温度低、紫外强，特殊生境使高寒牧草普遍生长缓慢。近年来，由于鼠虫危害、过度放牧、对草场缺乏科学管理等因素，致使优良牧草退化，毒杂草滋生，加剧了高寒草甸草皮剥落，土壤裸露，生态环境恶化。退化草地的形成直接威胁着该地区牧民和家畜的生存发展，也威胁着三江源中下游地区的生态平衡。因此，加速牧草生长、恢复生态植被、提高生物含量，在高原草地生态环境恢复及治理中尤为重要。目前能够在青藏高原高寒草甸极端环境下发挥稳定功效，且针对于促梭罗草生长的生防菌株尚未有报道。其次，人工合成农药、化肥的大量使用在提高作物产量的同时对人类健康及生态环境带来了负面影响。化肥的长期使用会给高寒草甸带来残留及污染，毒杂草大量滋生，有害生物产生抗逆性，伤害非靶标生物甚至破坏高原生态平衡等一系列严重的问题。芽孢杆菌能产生耐热抗逆的芽孢，有利于生防菌剂的生产和加工，施用方便，储存期长，成为化肥、农药和其他微生态制剂的最佳竞争者。最为重要的为，现有的生防菌株的菌属过于单一，主要集中在枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌，是否存在其他耐极端环境且高效促进梭罗草生长的生防菌株，是本研究的主要内容。莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)是一种噬温性的好氧产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，能够抑制影响梭罗草生长的病原菌,若合理运用，将减少化学农药造成的环境污染、提高草场生态系统的生物多样性，保持高寒草甸生态平衡。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能适应青藏高原特殊生境，促进牧草如梭罗草生长、提高高寒草甸生物量的莫海威芽孢杆菌KKDD。本专利技术的另一目的在于提供一种包含上述菌株的菌剂和微生物肥料。本专利技术的有一目的在于提供上述的莫海威芽孢杆菌KKDD在促进牧草生长中的应用。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一株促牧草生长的莫海威芽孢杆菌，该菌株KKDD属于莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)，于2018年4月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNO.15579，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该KKDD菌株除了明显提高梭罗草生长的作用外，还具有降解秸秆木质纤维素、拮抗梭罗草产生真菌病害的作用。一种促牧草生长的菌剂，该菌剂中包含有上述的莫海威芽孢杆菌。一种促牧草生长的微生物菌肥，该微生物菌肥中包含有上述的莫海威芽孢杆菌。上述的莫海威芽孢杆菌在制备用于促牧草生长的微生物菌肥中的应用。上述的莫海威芽孢杆菌、菌剂或微生物菌肥在促牧草生长、降解木质纤维素或拮抗牧草真菌病害中的应用。一种促牧草生长的方法，为以下(1)～(3)中的至少一种：(1)采用上述菌株的发酵液对牧草种子进行浸种处理；(2)采用上述菌株的发酵液对牧草幼苗进行灌根处理；(3)采用上述的微生物菌肥对牧草进行施肥。上述的牧草优选为梭罗草。本专利技术的有益效果采用16S-rDNA及gyrB基因扩增分析对分离筛选自青海省可可西里盐碱地点地梅根围细菌KKDD进行分子鉴定，菌株KKDD鉴定为莫海威芽孢杆菌Bacillusmojavensis，该菌株耐盐碱能力较强，在含盐量为11％，pH＝11的条件下仍能正常生长。通过平板对峙试验检测该菌株拮抗病原真菌的活性，菌株对植物病原真菌小麦赤霉病菌(FusaHumgraminearum)、锐顶镰孢菌(Fusariumacuminatum)具有显著的拮抗活性，抑菌圈平均直径均≥15mm。通过Salkowski比色法检测菌株产生IAA能力，菌株表现出较强产IAA能力，分泌量为19.904μg/mL，同时，菌株表现出稳定的固氮能力。以菌株发酵液对牧草种子进行浸种，检测菌株对植物的催芽及促生效果，菌株菌悬液浸种处理对梭罗草草种具有较强催芽促生效果，与对照相比，发芽率增加8％，菌株发酵液浸种法处理对牧草促生率为7.62％；以菌株发酵液对长势均一的梭罗草幼苗进行灌根处理，促生率为24.60％。分离自青海省可可西里盐碱地植被根围芽孢杆菌KKDD兼具固氮、拮抗病原菌、产IAA、催芽促生及耐盐碱特性，在高原草地植被恢复、生态农牧业中具有一定的研究及应用潜力。附图说明图1菌株KKDD的菌落形态图2菌株KKDD抑梭罗草病原真菌的效果A小麦赤霉病菌(Fusariumgraminearum)，B锐顶镰孢菌(Fusariumacuminatum)图3菌株KKDD所产脂肽类化合物A菌株KKDD产生的脂肽化合物的AMALDI-TOF-MS质谱图B血平板透明圈法检测菌株KKDD产生的脂肽类抗生素活性的结果图图4菌株促梭罗草生长具体实施方式实施例1：1.1菌株的分离申请人从青海省海西州可可西里(海拔：5500m，年均温为-10.0℃～4.1℃，年均降水量为173～495mm)盐碱地点地梅(Androsaceumbellata)根围土壤中分离筛选得到一株菌株，将其命名为KKDD。本专利技术的菌株KKDD的分离纯化采用稀释涂布平板法、平板划线等方法。1.2菌株的鉴定1.2.1菌株的形态学鉴定通过观察菌落形态、颜色、边缘、透明度等，将菌株KKDD在LB(Luria-Bertan)培养基上平板划线培养。如图1所示，菌株KKDD的主要形态学特性为：在LB培养基上最佳的生长温度为25℃，培养1～2天后，形成直径2～3cm的菌落，菌落呈乳白色，不透明，菌落边缘不整齐，有皱褶；在LB液体培养基中，25℃过夜摇床培养，菌体生长旺盛，高度浑浊，产生絮状沉淀，有特殊气味。1.2.2菌株的分子鉴定提取细菌基因组DNA，根据细菌16SrDNA及gyrB两端的保守系列，设计细菌的通用引物，16S-27F(5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’)，16S-1492R(5’-GCYTACCTTGTTACGACTT-3’)；gyrB-For(5’-GAAGTCATCATGACCGTTCTGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA-3’)，gyrB-Rev(5’-AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT-3’)。PCR扩增条件为：95℃4min；98℃10sec，62℃1min，72℃2min，共30个循环；72℃8min。PCR反应产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，检测合格后，送往深圳华大测序。以菌株KKDD基因组DNA为模板扩增16SrDNA(如SEQIDNO.1所示)及gyrB基因(如SEQIDNO.2所示)，分别扩增到大小约1500bp、1300bp的PCR特征性条带，与芽孢杆菌16SrDNA、gyrB的理论值基本相符。将测序结果在NCBI中与GenB本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株促牧草生长的莫海威芽孢杆菌，该菌株分类命名为莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)，于2018年4月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.15579，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

【技术特征摘要】
1.一株促牧草生长的莫海威芽孢杆菌，该菌株分类命名为莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)，于2018年4月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNO.15579，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.一种促牧草生长的菌剂，其特征在于，该菌剂中包含有权利要求1所述的莫海威芽孢杆菌。3.一种促牧草生长的微生物菌肥，其特征在于，该微生物菌肥中包含有权利要求1所述的莫海威芽孢杆菌。4.权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢永丽，吴晓晖，陈兰，柴树芳，
申请(专利权)人：青海大学，
类型：发明
国别省市：青海,63