本发明专利技术公开了结合肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族蛋白的多肽和药剂，尤其是特异结合GITR、OX40或CD40的药剂。该多肽或药剂可包括融合多肽，尤其是包含GITRL、OX40L或CD40L的多肽及/或双特异性药剂。本发明专利技术亦公开使用该多肽或药剂以诱导及/或增强免疫反应的方法以及用于治疗疾病(诸如癌症)的方法。
【技术实现步骤摘要】
肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)结合剂类及其用途本申请是申请日为2016年2月3日、中国专利申请号为201680008684.7(国际申请号为PCT/US2016/016306)、专利技术名称为“肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)结合剂类及其用途”的专利技术专利申请的分案申请。相关申请案的交叉引用本申请案主张2015年2月3日提交申请的美国临时申请案第62/111,404号、2015年4月27日提交申请的美国临时申请案第62/153,272号、2015年4月28日提交申请的美国临时申请案第62/154,008号、2015年9月15日提交申请的美国临时申请案第62/218,956号及2015年11月24日提交申请的美国临时申请案第62/259,129号的优先权利益，各篇申请案的全部内容在此以引用方式并入本专利技术。
本专利技术大致上关于结合肿瘤坏死因子受体超家族成员的药剂，尤其是包含GITRL、OX40L或CD40L的胞外结构域的药剂。本专利技术亦关于使用该药剂来调节免疫反应及/或治疗疾病(诸如癌症)的方法。
技术介绍
免疫疗法的基础为操作及/或调节免疫系统，包括先天免疫反应及后天免疫反应。该免疫疗法的总体目标为藉由控制对“外来作用剂”(例如病原体或肿瘤细胞)的免疫反应来治疗疾病。然而，在某些情况下，免疫疗法是用于治疗可能由针对通常存在于体内的蛋白质、分子及/或组织的异常免疫反应产生的自体免疫疾病。免疫疗法可包括用于诱导或增强特定免疫反应或用于抑制或减少特定免疫反应的方法。免疫系统为由许多细胞类型组成的高度复杂的系统，这些细胞类型包括，但不限于T细胞、B细胞、天然杀手细胞、抗原呈递细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞。这些细胞具有控制其交互作用和反应的复杂且微妙的系统。该细胞同时利用活化和抑制机制及反馈回路(feedbackloop)以约束反应且不允许不受控制的免疫反应的负面后果(例如自体免疫疾病或细胞因子风暴)。癌症免疫监视的概念是基于免疫系统能够识别肿瘤细胞、启动免疫反应并抑制肿瘤发展及/或进展的理论。然而，很明显地，许多癌细胞已发展出逃避免疫系统的机制，该机制可允许肿瘤不受抑制地生长。癌症/肿瘤免疫疗法(免疫肿瘤学)聚焦于研发能够活化及/或增强免疫系统的新药剂及新型药剂，以达成更有效地攻击肿瘤细胞，导致增加肿瘤细胞灭杀及/或抑制肿瘤生长。
技术实现思路
属于肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)及其配体(TNFSF)的蛋白质密切参与免疫系统细胞的活化、分化和存活。TNFRSF成员包括，但不限于4-1BB、BAFF、BCMA、CD27、CD30、CD40、DcR3、DcTRAILRl、DcTRAILR2、DR3、DR6、EDA2R、EDAR、Fas(CD95)、GITR、HVEM、淋巴毒素βR、NGFR、骨保护素(osteoprotegerin)、OX40、RANK、RELT、TACI、TNFRH3、TNFRl、TNFR2、TRAILRl、TRAILR2、TRAILR3、TRAILR4、TROY及TWEAKR。TNF族配体的受体为含有数个富含半胱胺酸的胞外结构域的寡聚型、第I型或第Ⅲ型跨膜蛋白。这些受体中有数种亦含有胞内死亡结构域(DD)，该胞内死亡结构域在配体结合后募集凋亡蛋白酶(caspase)交互作用蛋白以起始凋亡蛋白酶活化的外部途径。其他缺乏死亡结构域的TNF超家族受体结合TNF受体相关因子并活化可导致增殖或分化的胞内信号传导途径。这些受体也可启动细胞凋亡，但其是经由间接机制如此做。除了调节凋亡外，若干TNF超家族受体参与调节免疫细胞功能，诸如B细胞稳态和活化、天然杀手细胞活化及T细胞共刺激。若干其他TNF超家族受体调节细胞类型特异性反应，诸如毛囊发育及破骨细胞发育。TNFSF成员包括，但可不限于4-1BB配体、APRIL、BAFF、CD27配体、CD30配体、CD40配体(CD40L)、EDA、EDA-A1、EDA-A2、Fas配体(CD95L)、GITR配体(GITRL)、LIGHT、淋巴毒素、淋巴毒素β、淋巴毒素α、OX40配体(OX40L)、TL1A、TNF-α、TRAIL、TRANCE和TWEAK。大多数TNF配体为第Ⅱ型跨膜蛋白，其胞外结构域可被特定金属蛋白酶裂解以产生可溶性细胞因子。除了淋巴毒素β(其与TNF-β形成异质三聚体)和BAFF(其与APRIL形成异质三聚体)外，经裂解和未经裂解的配体作为非共价同型三聚体为活跃的。TNF族配体的特征为具有不同长度的茎来连接跨膜结构域与核心区，其含有TNF族配体的标志结构，TNF同源结构域(THD)或TNF结构域。该TNF结构域为具有“卷筒夹心”拓扑结构的反平行β-折叠片三明治形式。β链内的保守型残基提供特定的跨次单位接触，此可稳定该三聚体结构。在连接相邻的β链的环中的序列为家族成员特异性的且对于赋予受体特异性是重要的。有趣的是，与其他TNF族成员相比较，GITRL(糖皮质激素诱导的TNF相关配体；TNFSF18)似乎为联结相对松散的三聚体并显示出亦以二聚体状态存在。再者，有证据表明，GITRL三聚体本身可联结以形成“超团簇(supercluster)”(Zhouetal.,2008,PNAS,105:5465-5470)。GITRL相交联以稳定三聚体的形成，而导致活性增强(Wyzgoletal.,2009,J.Immunol.183:1851-1861)。这些结果表明GITRL可以二聚体至三聚体、至三聚体的超团簇的一系列寡聚体状态存在，而这些状态可能导致一系列分别从微弱至强劲的GITR活性。由于靶向TNFR超家族的成员的激动剂抗体通常为二聚体分子，该抗体的每个臂结合一个TNFR次单位，本专利技术者推测其可能无法完全再现该天然三聚体型TNF族成员的信号传导影响。鉴于该数据表明GITRL可透过改变GITRL的寡聚化状态来达到截然不同的信号传导水平，推测将该GITRL以稳定的三聚体形式呈现的治疗剂在引出信号传导时可能较激动剂GITR抗体更加活跃，因此该等三聚体型GITRL形式可能为优越的免疫治疗剂。此外，可提供二或多个GITRL三聚体的治疗剂被假设为可能影响GITRL“超团簇”且较激动剂GITR抗体更有效。相信，相较于TNFR激动剂抗体，对大多数(若非全部的话)TNFR配体而言此理论是正确的。由于GITRL为组织相对松散的三聚体，因此达成有效生产稳定的治疗性GITRL三聚体的方式并不清楚。一种稳定该GITRL三聚体的策略为将该三聚体的三个次单位以单一多肽的形式表现。先前已证明TNF族成员可以单链三聚体形式表现(美国申请案刊物第2007/0286843和2011/0162095号)。然而，先前的单链TNF族成员三聚体变体的主要缺点为引进交互连接该三聚体的三个次单位的外源性接头序列。该等接头可将可能的不稳定性和易变性引入该三聚体及/或提供可能的免疫原性来源，因为该接头为外来序列。本专利技术者检查人GITRL三聚体的晶体结构并观察到来自一个单体的N端氨基酸残基和来自第二单体的C端氨基酸残基彼此极为靠近。这表明非常短的氨基酸残基跨距(例如仅3-7个残基)可能足以桥接各单体之间的距离，因而不需要长的肽接头而能够生产单链GITRL三聚体。当进一步分析GITRL时本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多肽，其包含人肿瘤坏死因子受体配体超家族(TNFSF)蛋白的胞外结构域或其能够结合该TNFSF蛋白的受体的片段的第一、第二和第三拷贝，其中该胞外结构域或其片段的所述第一、第二或第三拷贝中至少一者包含该TNFSF蛋白的茎区，以及其中所述多肽在所述胞外结构域或其片段的第一拷贝和第二拷贝之间或者第二拷贝和第三拷贝之间不包含接头。
【技术特征摘要】
2015.02.03 US 62/111,404;2015.04.27 US 62/153,272;1.一种多肽，其包含人肿瘤坏死因子受体配体超家族(TNFSF)蛋白的胞外结构域或其能够结合该TNFSF蛋白的受体的片段的第一、第二和第三拷贝，其中该胞外结构域或其片段的所述第一、第二或第三拷贝中至少一者包含该TNFSF蛋白的茎区，以及其中所述多肽在所述胞外结构域或其片段的第一拷贝和第二拷贝之间或者第二拷贝和第三拷贝之间不包含接头。2.能结合人GITR的多肽，其包含SEQIDNO：5。3.一种多肽，其是由经ATCC保藏且被指定编号为PTA-122112的质粒编码的。4.一种同型二聚...
【专利技术属性】
技术研发人员：奥斯丁·L·格尼，
申请(专利权)人：昂科梅德制药有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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