具有修复氧化损伤功能的多肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种具有修复氧化损伤功能的多肽及其制备方法与应用。一种具有修复氧化损伤功能的多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术还公开了上述多肽作为药效成分在制备治疗氧化损伤引起的疾病的药物或者作为保健成分在制备抗氧化保健品中的应用。本发明专利技术首次公开了从香螺中提取的含有10个氨基酸残基的多肽化合物，通过检测发现，该多肽化合物可以通过清除体内ROS的产生，抑制血管中血管紧张素转化酶的生成，抑制血糖的升高，修复由过氧化物导致的氧化应激损伤，可以进行后续治疗氧化损伤引起的疾病的药物及抗氧化保健品的开发，具有广阔的市场前景。

【技术实现步骤摘要】
具有修复氧化损伤功能的多肽及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种具有修复氧化损伤功能的多肽及其制备方法与应用，属于功能多肽

技术介绍
目前发达国家和发展中国家死亡率和发病率排名前三位的慢性非传染性疾病(NCDs)是糖尿病、癌症、心血管和脑血管疾病。随着人口老龄化的发展以及社会经济和生活方式的不断变化，非传染性疾病的发病率将继续增加。预计到2030年，与非传染性疾病相关的死亡人数将增加到5200万。为了减轻非传染性疾病的负担，必须采取预防和治疗非传染性疾病有效措施。包括糖尿病、高血压、动脉粥样硬化等非传染性疾病的主要原因之一，是体内过量产生的活性氧(ROS)。因此，抑制ROS产生可用作NCDs的潜在预防和治疗措施。然而，许多合成抗氧化剂因其与健康有关的潜在风险而限制使用。因此，天然膳食抗氧化剂因其有益效果和更高的安全性而成为最佳选择。海洋动植物品种繁多，富含的生物活性物质丰富。由于与陆地来源的动植物相比，生活环境显着不同，因此海洋动植物被认为是新型生物活性化合物来源的宝库。大量研究表明，具有抗氧化，抗高血压，抗糖尿病，抗菌和抗肿瘤生物活性的海洋生物活性肽具有很高的潜在价值，可用于预防和治疗非传染性疾病。此外，随着消费者对营养和健康的认识不断提高，对功能性食品和营养保健品的需求也在增长。最近研究越来越多地关注从饮食衍生的海洋生物中分离的生物活性肽。软体动物是地球上第二大动物门。它不仅在维持生态平衡方面发挥着重要作用，而且作为一种可食性动物资源具有很大的商业价值。软体动物中有许多潜在的活性化合物，可用于膳食补充剂，功能性食品，营养品和药物。然而，目前公开的从具有应用价值的软体动物中分离潜在活性化合物的研究较少。香螺(Neptuneaarthriticacumingii)属软体动物门(Mollusca),腹足纲(Gastropoda),新腹足目(Neogastropoda),蛾螺科(Buccinida)，是一种大型捕食性腹足动物。它主要生活在中国，日本，朝鲜和韩国10至78米深的海域。在中国，香螺的主要分布于黄海和渤海区域，特别是辽宁大连和山东蓬莱。香螺的肉质肥厚紧致，味道鲜美，营养价值高，但孵化率低，因此具有较高的商业价值。到目前为止，大多数有关香螺的研究主要集中在其生物学上，如香螺的基因组，营养学，生殖特征等，或者是其营养成分，如粗蛋白，多糖，粗脂质，脂肪酸及氨基酸组成等。目前与香螺的活性成分相关的报道较少，只有早期研究发现香螺唾液中含有毒鼠强，组胺和胆碱衍生物具有神经活性。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种具有修复氧化损伤功能的多肽及其制备方法与应用。本专利技术技术方案如下：一种具有修复氧化损伤功能的多肽，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。SEQIDNO.1如下：Tyr-Ser-Gln-Leu-Glu-Asn-Glu-Phe-Asp-Arg(YSQLENEFDR)。上述具有修复氧化损伤功能的多肽的衍生物，对氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的多肽中的氨基酸残基进行修饰，修饰包括酰胺化修饰、羰基化修饰、磷酸化修饰和/环化修饰。根据本专利技术优选的，所述酰胺化修饰为在N端第1位氨基酸残基进行乙酰化修饰或者在在C端第1位氨基酸残基进行酰胺化修饰。根据本专利技术优选的，所述磷酸化修饰为在N端第2位和/或第6位氨基酸残基进行糖基化修饰和/或磷酸化修饰。根据本专利技术优选的，所述环化修饰为在C端和N端氨基酸残基相连的环化修饰、N端第2位和第6位氨基酸残基的侧链间相连的环化修饰、N端和N端第7位氨基酸残基侧链相连的环化修饰、C端和N端第6位氨基酸残基侧链相连的环化修饰或者N端第2位和N端第9位氨基酸残基的N-N相连的环化修饰。一种提取上述多肽的方法，步骤如下：(1)将香螺去壳后，取肉部分，磨碎，加入8～12倍重量的酸性乙醇，提取2.5～7h，过滤，取滤液，冰浴条件下静置10～60min，取上层清液，浓缩，脱色，离心，取上清液，去除低极性杂质，制得多肽混合原液；(2)将步骤(1)制得的多肽混合原液用葡聚糖凝胶G25进行分离，以0.018～0.022MHCl-水为洗脱剂，按照5mL/20min的速度收集样品，每20min收集一份，将第34～36份的活性段洗脱液合并，经浓缩，制得多肽活性段粗提物；(3)将步骤(2)制得的多肽活性段粗提物用浓度10mM、pH5.8～6.2的乙酸铵缓冲液溶解，经4.5μm微孔膜过滤，然后经WelchHILICAmide柱分离，二元流动相为ACN和浓度10mM、pH5.8～6.2的乙酸铵缓冲液，ACN与乙酸铵缓冲液的体积比为85:15，流速为1ml·min-1，收集210nm处具有吸收峰的洗脱液，筛选活性三功能多肽，经浓缩、干燥，制得具有修复氧化损伤功能的多肽。根据本专利技术优选的，所述步骤(1)中，酸性乙醇为体积浓度45～55％的乙醇溶液，pH4.8～5.2；进一步优选的，所述步骤(1)中，酸性乙醇的pH调节剂为乙酸。根据本专利技术优选的，所述步骤(1)中，所述提取为在28～32℃的搅拌条件下提取3～6h。根据本专利技术优选的，所述步骤(1)中，浓缩为在38～40℃的条件下，旋转蒸发去除溶液中的乙醇。根据本专利技术优选的，所述步骤(1)中，脱色为向溶液中加入质量百分比0.5～1％的硅藻土-羧甲基淀粉钠复合物，其中硅藻土与羧甲基淀粉钠的质量比为3:2，室温静置1.5～3h。根据本专利技术优选的，所述步骤(1)中，去除低极性杂质为采用己烷萃取2～4，保留水相；进一步优选的，己烷的添加量为溶液体积的0.8～1.2倍。根据本专利技术优选的，所述步骤(2)中，真空减压浓缩条件为真空度为0.08～0.1MPa，水浴温度为40～45℃。根据本专利技术优选的，所述步骤(3)中，WelchHILICAmide柱规格为4.6mm×250mm，5μm。根据本专利技术优选的，所述步骤(3)中，筛选三功能多肽采用活性导向技术，具体步骤如下：采用体外抗氧化活性评价模型、ACE抑制活性评价模型及α-淀粉酶抑制活性评价模型，测定各馏分段的活性，筛选出在3种评价模型中抑制率均超过80％的馏分段。根据本专利技术优选的，所述步骤(3)中，干燥为在-20℃条件下冷冻干燥。上述具有修复氧化损伤功能的多肽及其衍生物作为药效成分在制备治疗氧化损伤疾病药物中的应用。上述具有修复氧化损伤功能的多肽作为保健成分在制备抗氧化保健品中的应用。有益效果本专利技术首次公开了从香螺中提取的含有10个氨基酸残基的多肽化合物，通过检测发现，该多肽化合物可以通过清除体内ROS的产生，抑制血管中血管紧张素转化酶的生成，抑制血糖的升高，修复由过氧化物导致的氧化应激损伤，可以进行后续治疗氧化损伤引起的疾病的药物及抗氧化保健品的开发，具有广阔的市场前景。附图说明图1实施例中所用香螺原料照片；图中：A、香螺整体外观；B香螺软组织；C香螺肉部；D香螺内脏；图2香螺肉活性段粗提物分子量分布检测结果图；图3活性段提取物氨基酸组成结果图；图4活性肽氨基酸序列MS/MS质谱结果图；图5香螺肉G25洗脱各馏分段活性检测结果图；图中：A各馏分段280nm波长下吸光度值及DPPH自由基抑制率曲线图；B各馏分段280nm波长下吸光度值及ACE抑制率曲线图；C各馏分段280nm波长下吸光度值及α-淀粉酶抑制率曲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有修复氧化损伤功能的多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种具有修复氧化损伤功能的多肽，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述具有修复氧化损伤功能的多肽的衍生物，对氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的多肽中的氨基酸残基进行修饰，修饰包括酰胺化修饰、羰基化修饰、磷酸化修饰和/环化修饰。3.如权利要求2所述的衍生物，其特征在于，所述酰胺化修饰为在N端第1位氨基酸残基进行乙酰化修饰或者在在C端第1位氨基酸残基进行酰胺化修饰。4.如权利要求2所述的衍生物，其特征在于，所述磷酸化修饰为在N端第2位和/或第6位氨基酸残基进行糖基化修饰和/或磷酸化修饰。5.如权利要求3或4所述的衍生物，其特征在于，所述环化修饰为在C端和N端氨基酸残基相连的环化修饰、N端第2位和第6位氨基酸残基的侧链间相连的环化修饰、N端和N端第7位氨基酸残基侧链相连的环化修饰、C端和N端第6位氨基酸残基侧链相连的环化修饰或者N端第2位和N端第9位氨基酸残基的N-N相连的环化修饰。6.一种提取上述多肽的方法，其特征在于，步骤如下：(1)将香螺去壳后，取内脏部分，磨碎，加入8～12倍重量的酸性乙醇，提取2.5～7h，过滤，取滤液，冰浴条件下静置10～60min，取上层清液，浓缩，脱色，离心，取上清液，去除低极性杂质，制得多肽混合原液；(2)将步骤(1)制得的多肽混合原液用葡聚糖凝胶G25进行分离，以0.018～0.022MHCl-水为洗脱剂，按照5mL/20min的速度收集样品，每20min收集一份，将第34～36份的活性段洗脱液合并，经浓缩，制得多肽活性段粗提物；(3)将步骤(2)制得的多肽活性段粗提物用浓度10mM、pH5.8～6.2的乙酸铵缓冲液溶解，经4.5μm微孔膜过滤，然后经WelchHILICAmide柱分离，二元流动相为ACN和浓度10mM、pH5.8～6.2的乙酸铵缓冲液，ACN与乙酸铵缓...

【专利技术属性】
技术研发人员：张姗姗，刘可春，韩利文，张轩铭，李晓彬，张云，
申请(专利权)人：山东省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37