降低TAU表达的组合物和方法技术

本文提供降低Tau(τ)mRNA和蛋白质表达的组合物和方法。这些组合物和方法可用于治疗Tau相关疾病和失调。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】降低TAU表达的组合物和方法相关申请的交叉参考本专利技术要求2015年12月21日提交的美国临时专利申请第62/270165号的优先权，其通过引用全文纳入本文。
本专利技术提供降低Tau(τ)mRNA和蛋白质表达的组合物和方法。这些组合物和方法可用于治疗Tau相关疾病。
技术介绍
Tau是一种微管相关蛋白，其稳定微管并促进轴突运输。Tau蛋白与微管蛋白相互作用以稳定微管并促进微管蛋白组装成微管。微管网络参与许多重要的细胞过程，包括形成细胞骨架和维持细胞的结构和形态，以及为囊泡、细胞器和大分子的胞内转运提供平台。由于Tau与微管的结合稳定了微管，Tau是这些细胞过程的关键介质。人脑中至少存在六种Tau同种型，长度范围在352-441个氨基酸残基。Tau同种型来源于17号染色体上的单基因MAPT(微管相关蛋白Tau)。MAPT转录物经历复杂的、受调节的可变剪接，产生多种mRNA种类。MAPT的外显子2和3分别编码29或58个氨基酸的序列，因此外显子2和/或3的可变剪接导致包含N-末端29个氨基酸的酸性结构域的0、1或2个拷贝，分别称为0N、1N或2NTau。MAPT的外显子10编码微管结合结构域，因此包含外显子10导致存在另外的微管结合结构域。由于在Tau的其他地方存在三个微管结合结构域，包括外显子10的Tau同种型被称为“4RTau”，这意味着具有微管结合结构域四体重复的Tau蛋白。没有外显子10的Tau同种型被称为“3RTau”，这意味着具有微管结合结构域三体重复的Tau蛋白。4RTau同种型可能比3RTau同种型更好地结合微管，因为它们多出一个微管结合结构域。3RTau与4RTau的比率受发育调节，胎儿组织仅表达3RTau，成人组织表达大致相等水平的3RTau和4RTau。Tau是一种磷蛋白，在最长的Tau同种型上具有大约85个潜在磷酸化位点(Ser，Thr或Tyr)(Pedersen和Sigurdsson，TrendsinMolecularMedicine2015,21(6):394)。据报道，正常Tau蛋白中约有一半位点发生磷酸化。Tau在细胞周期中被动态磷酸化和去磷酸化。Tau只能以其去磷酸化形式与微管结合，因此Tau的磷酸化作为神经元内微管结合-解离的直接开关。在病理条件下，Tau蛋白质变得过度磷酸化，导致微管蛋白结合的丧失和微管失稳，随后在病原性神经原纤维缠结中聚集和沉积Tau。在神经原纤维缠结中也已鉴定出Tau的蛋白酶切割片段(Asp13，Glu391和Asp421)。
技术实现思路
本文提供了靶向人微管相关蛋白Tau(MAPT)的反义寡核苷酸，包含反义寡核苷酸的组合物，以及使用这些反义寡核苷酸降低TaumRNA和蛋白表达的方法。本文提供的组合物和方法可用于治疗Tau相关疾病。一个方面，本文提供寡核苷酸，其包含与表2-17中提供的任意核碱基序列有至少70％(例如，70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的核碱基序列，其中任意核碱基序列中的C是胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，并且其中该寡核苷酸的至少一个核苷酸具有2'-修饰。这些寡核苷酸是靶向人MAPT的反义寡核苷酸。2'-修饰可选自2'-氟代，2'-脱氧-2'-氟代，2'-O-甲基，2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)，2'-O-氨基丙基(2'-O-AP)，2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)，2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)，2'-O-二甲基氨基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)。在一些实施方案中，2'-修饰是2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)。在一些实施方案中，任意核碱基序列中的每个C是5-甲基胞嘧啶。在一些实施方案中，本文提供的反义寡核苷酸的长度为12至30个核碱基。例如，靶向MAPT的反义寡核苷酸可包含12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核碱基。在一些实施方案中，靶向MAPT的反义寡核苷酸长度为12至25个核碱基。例如，靶向MAPT的反义寡核苷酸可以包括12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个核碱基。在一些实施方案中，靶向MAPT的反义寡核苷酸长度为15至20个核碱基。例如，靶向MAPT的反义寡核苷酸可以包括15、16、17、18、19或20个核碱基。在一些实施方案中，本文提供的靶向MAPT的反义寡核苷酸是空间阻断剂。这种反义寡核苷酸减少Tau蛋白mRNA和/或蛋白质表达,独立于RNA酶H。空间阻断剂的核苷间键可以是磷酸二酯或硫代磷酸酯键。一个方面，在一些实施方案中，本文所提供靶向MAPT的反义寡核苷酸是空间阻断剂，其包含与表2-8中提供的任意序列有至少70％(例如，70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的核碱基序列，其中任意核碱基序列中的C是胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，并且其中该寡核苷酸的每个核苷酸具有2'-修饰。在一些实施方案中，靶向MAPT的反义寡核苷酸包括与表2-8中提供的任意序列有至少80％序列同一性的核碱基序列。在一些实施方案中，靶向MAPT的反义寡核苷酸包括与表2-8中提供的任意核碱基序列有至少90％序列同一性的核碱基序列。在一些实施方案中，靶向MAPT的反义寡核苷酸包括表2-8中提供的任意核碱基序列。在一些实施方案中，靶向MAPT的反义寡核苷酸由表2-8中提供的任意核碱基序列组成。在一些实施方案中，任意核碱基序列中的每个C是5-甲基胞嘧啶。在一些实施方案中，靶向MAPT的反义寡核苷酸在每个核苷酸亚基具有2'-O-MOE修饰。在一些实施方案中，靶向MAPT的反义寡核苷酸包括通过磷酸桥连接到所述寡核苷酸的3'末端的接头，并且所述寡核苷酸具有任何下列结构：在一些实施方案中，本文提供的靶向MAPT的反义寡核苷酸是间隔体，其具有连续2'-脱氧核糖核苷酸的中央间隔区段，位于5'和3'端的两个翼区段(也分别称为5'翼和3'翼)之间。这种反义寡核苷酸通过激活RNA酶H来减少TaumRNA和/或蛋白质的表达。间隔体的核苷间键可以是硫代磷酸酯或磷酸二酯键。在一些实施例中，间隔体包括至少五个(例如，5、6、7、8、9、10、11、12)个连续2'-脱氧核糖核苷酸的延伸且5'和3'翼区段包含一个或多个2'-修饰的核苷酸。在一些实施方案中，这样的寡核苷酸包含至少七个(例如，7、8、9、10、11、12个)连续的2'-脱氧核糖核苷。在一些实施方案中，这样的寡核苷酸包含至少十个连续的2'-脱氧核糖核苷。2'-修饰可选自2'-氟代，2'-脱氧-2'-氟代，2'-O-甲基，2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)，2'-O-氨基丙基(2'-O-AP)，2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)，2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含核碱基序列的寡核苷酸，所述核碱基序列与表2‑17中提供的任意核碱基序列具有至少90％序列同一性，其中任何所述核碱基序列中的C为胞嘧啶或5‑甲基胞嘧啶，且其中所述寡核苷酸的至少一个核苷酸具有2'‑修饰。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.21 US 62/270,1651.一种包含核碱基序列的寡核苷酸，所述核碱基序列与表2-17中提供的任意核碱基序列具有至少90％序列同一性，其中任何所述核碱基序列中的C为胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，且其中所述寡核苷酸的至少一个核苷酸具有2'-修饰。2.权利要求1所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括与表2-8中提供的任意序列具有至少90％序列同一性的核碱基序列，其中任何所述核碱基序列中的C为胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，且其中所述寡核苷酸的每个核苷酸具有2'-修饰。3.权利要求2所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括与表2-8中提供的任意序列具有至少90％序列同一性的核碱基序列。4.权利要求2所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括与表2-8中提供的任意核碱基序列具有至少95％序列同一性的核碱基序列。5.权利要求2所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括表2-8中提供的任意核碱基序列。6.权利要求2所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸由表2-8中提供的任意核碱基序列组成。7.权利要求2-6中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的核苷间键是磷酸二酯或硫代磷酸键。8.权利要求2-7中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括通过磷酸桥连接到所述寡核苷酸的3'末端的接头，并且所述寡核苷酸具有任何下列结构：9.权利要求2-8中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸独立于RNA酶H降低TaumRNA或蛋白表达。10.权利要求1所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含与表9-15和17中提供的任意序列具有至少90％序列同一性的核碱基序列，其中任何所述核碱基序列中的C为胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，且其中所述寡核苷酸的至少一个核苷酸具有2'-修饰。11.权利要求10所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含与表9-15和17中提供的任意序列具有至少90％序列同一性的核碱基序列。12.权利要求10所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含与表9-15和17中提供的任意核碱基序列具有至少95％序列同一性的核碱基序列。13.权利要求10所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括表9-15和17中提供的任意核碱基序列。14.权利要求10所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸由表9-15和17中提供的任意核碱基序列组成。15.权利要求10-14中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的核苷间键是硫代磷酸键。16.权利要求10-15中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少五个连续的2'-脱氧核苷。17.权利要求10-15中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少七个连续的2'-脱氧核苷。18.权利要求10-15中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含十个连续的2'-脱氧核苷。19.权利要求10-18中任一项的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸通过激活RNA酶H来降低TaumRNA或蛋白表达。20.权利要求1-19中任一项的寡核苷酸，其中任意所述核碱基序列中的每个C是5-甲基胞嘧啶。21.一种寡核苷酸，其包含与SEQIDNO：487-506中任一个的至少12个连续核碱基互补的核碱基序列，其中所述寡核苷酸的至少一个核苷酸具有2’-修饰。22.权利要求21所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含与SEQIDNO：487-506中任一个的至少12个连续核碱基100％互补的核碱基序列。23.如权利要求21所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含一或多个甲基胞嘧啶。24.如权利要求21所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的每个核苷酸具有2'-修饰。25.权利要求21所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少五个连续的2'-脱氧核苷。26.权利要求21所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少七个连续的2'-脱氧核苷。27.权利要求-21所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含十个连续的2'-脱氧核苷。...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·珀利多洛欧芬杰姆，J·威勒，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH