使用靶向IL4Rα、TRPA1或F2RL1的RNA复合物治疗特应性皮炎和哮喘制造技术

在某些方面，本文提供RNA复合物(例如，不对称RNA复合物，如asiRNA或细胞穿透asiRNA)，所述RNA复合物抑制IL4Rα、TRPA1和/或F2RL1表达，并且因此对于治疗特应性皮炎或哮喘是有用的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用靶向IL4Rα、TRPA1或F2RL1的RNA复合物治疗特应性皮炎和哮喘相关申请本申请要求于2016年2月2日提交的美国临时专利申请序列号62/290,298的优先权权益，其通过引用被整体并入本文。背景免疫系统的调节异常可以造成自身免疫疾病，如特应性皮炎和哮喘。特应性皮炎(也称为湿疹)是一种炎性疾病，其特征在于存在发痒的且敏感的皮肤、水肿和红斑。尽管特应性皮炎可以在任何年龄发生，但该疾病常见于儿童和婴儿中。约70％的特应性皮炎患者通过“特应性进程(atopicmarch)”发展哮喘，其特征在于特应性皮炎至哮喘和过敏性鼻炎的进展。哮喘是一种呼吸障碍，其也与免疫系统的调节异常有关。更具体地，它是一种慢性呼吸疾病，其特点是因支气管的过敏性炎症而产生的呼吸痉挛和呼吸阻塞，引起反复性呼吸短促、喘气和咳嗽。全世界哮喘患病率被估计为高达3亿个体，并且约8％的主要发达国家的人口患有哮喘。IL4Rα、F2RL1和TRPA1基因在特应性皮炎和/或哮喘的症状的发作和进展中发挥关键作用。当暴露于外来抗原时，特应性皮炎患者中的树突细胞激活Th2细胞，导致激活的Th2细胞分泌细胞因子(例如，IL-4、IL-5、IL-10和IL-13)。在细胞因子中，已知IL-4和IL-13在特应性皮炎的发作中发挥重要作用，而IL-4和IL-13已经被报道通过抑制人β防卫素-3和丝聚蛋白(两者都维持皮肤屏障)使特应性皮炎症状恶化。IL-4和IL-13的受体是异二聚体，并且含有IL4Rα(白介素4受体，α，也称为IL4Rα)。因此，IL4Rα的下调可以阻断IL-4和IL-13的信号。特应性皮炎患者所经历的瘙痒症状的主要原因是角质形成细胞中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的过度表达，其提高了TRP离子通道(包含TRPV1和TRPA1)的瞬时受体电位(TRP)。因此，特应性皮炎的症状可以通过抑制TRPA1被治疗。凝血因子II(凝血酶)受体样1(F2RL1，也称为蛋白酶激活受体2，PAR2)由皮肤中的角质形成细胞、激活的内皮细胞和感觉神经表达，并且参与各种各样的炎症反应、色素沉着产生和皮肤屏障功能。F2RL1在蛋白酶的激活中发挥关键性作用，其诱导特应性皮炎患者中可见的炎症反应和加重的皮肤病况。因此，存在对于用于治疗特应性皮炎或哮喘的靶向IL4Rα、TRPA1和F2RL1的新的和改进的治疗剂的需要。概述在某些方面，本文提供RNA复合物，所述RNA复合物靶向IL4Rα、TRPA1或F2RL1，并且对于治疗和/或预防特应性皮炎和/或哮喘是有用的。在某些方面，本文提供包括这样的RNA复合物的药物组合物和使用这样的RNA复合物和药物组合物的方法。在某些方面，本文提供RNA复合物，所述RNA复合物包括反义链和有义链，所述反义链具有与IL4Rα、TRPA1或F2RL1mRNA序列的序列互补性，所述有义链具有与反义链的序列互补性。在一些实施方案中，RNA复合物能够抑制细胞(例如，角质形成细胞)IL4Rα、TRPA1或F2RL1表达。在一些实施方案中，RNA复合物是不对称较短双链体小干扰RNA(asymmetricshorter-duplexsmallinterferingRNA)(asiRNA)。在一些实施方案中，RNA复合物是表1、表2、表3、表4、表5、表6、表7、表8、表9或表10中列出的RNA复合物。在一些实施方案中，RNA复合物包括IL4RA#5的反义链和有义链。在一些实施方案中，RNA复合物包括TRPA1#81的反义链和有义链。在一些实施方案中，RNA复合物包括F2RL1#22的反义链和有义链。在一些实施方案中，本文提供的RNA复合物包括化学修饰，其中在不存在递送运载体的情况下，修饰便利穿透细胞膜。在一些实施方案中，修饰是2’-O-甲基化核苷、硫代磷酸酯键或疏水部分。在一些实施方案中，本文提供的RNA复合物包括疏水部分。在一些实施方案中，疏水部分可以是具有疏水特性的任何化学结构。例如，在一些实施方案中，疏水部分是脂类、亲脂性肽和/或亲脂性蛋白质。在一些实施方案中，疏水部分是脂类，如胆甾醇、生育酚、或具有10个或更多个碳原子的长链脂肪酸(例如，硬脂酸或棕榈酸)。在一些实施方案中，疏水部分是胆甾醇。在一些实施方案中，RNA复合物是表2、表3、表5、表6、表8、表9或表10中列出的经修饰的RNA复合物。在某些实施方案中，RNA复合物不是细胞毒性的。在某些方面，本文提供包括本文提供的RNA复合物和药学上可接受的载体的药物组合物。在某些实施方案中，药物组合物被配制用于局部递送。在一些实施方案中，药物组合物是乳膏或洗剂。在一些实施方案中，药物组合物被配制用于肠胃外递送、静脉内递送或口服递送。在其他实施方案中，药物组合物被配制用于吸入。在某些方面，本文提供抑制细胞IL4Rα、TRPA1或F2RL1表达的方法，所述方法包括使细胞与本文提供的RNA复合物接触。在某些方面，本文提供在人受试者中抑制基因表达IL4Rα、TRPA1或F2RL1的方法，所述方法包括向受试者施用本文提供的RNA复合物或药物组合物。在某些方面，本文提供治疗人受试者的特应性皮炎和/或哮喘的方法，所述方法包括向受试者施用本文提供的RNA复合物或药物组合物。附图的简要说明图1示出靶向IL4Rα的73种示例性asiRNA的基因沉默效率。图2示出靶向IL4Rα的15种示例性asiRNA的基因沉默效率。图3示出靶向IL4Rα的2种示例性asiRNA的基因沉默效应。图4示出示例性IL4Rα-靶向细胞穿透asiRNA(IL4Rαcp-asiRNA)的基因沉默效率，各种各样的化学修饰已经被应用于所述IL4Rα-靶向细胞穿透asiRNA。图5示出示例性cp-asiRNA的IL4Rα蛋白表达的抑制。图6示出不同反义链长度(19或21个核苷酸)的4种cp-asiRNA的基因沉默效率。图7示出4种示例性cp-asiRNA的IL4Rα蛋白表达的抑制。图8提供人IL4RαmRNA序列。图9示出靶向TRPA1的102种示例性asiRNA的基因沉默效率。图10示出靶向TRPA1的14种示例性asiRNA的基因沉默效应。图11示出靶向TRPA1的14种示例性asiRNA的TRPA1蛋白表达的抑制。图12示出示例性TRPA1-靶向细胞穿透asiRNA(TRPA1cp-asiRNA)的基因沉默效率，各种各样的化学修饰已经被应用于所述TRPA1-靶向细胞穿透asiRNA。图13示出示例性cp-asiRNA的TRPA1蛋白表达的抑制。图14示出不同反义链长度(19或21个核苷酸)和不同有义链化学修饰(3或4个硫代磷酸酯键)的8种cp-asiRNA的基因沉默效率。图15示出8种示例性cp-asiRNA的TRPA1蛋白表达的抑制。图16示出4种示例性cp-asiRNA的TRPA1蛋白表达的抑制。在不存在转染试剂的情况下，将A549细胞与1μM和3μM的cp-asiRNA孵育。图17提供人TRPA1mRNA序列。图18示出靶向F2RL1的100种示例性asiRNA的基因沉默效率。图19示出靶向F2RL1的29种示例性asiRNA的基因沉默效率。图20示出含有2’-O-甲基化修饰的32种示例性asiRNA的基因沉默效率。图21示出靶向本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RNA复合物，所述RNA复合物包括具有与IL4RαmRNA序列的序列互补性的长度为至少19个核苷酸(nt)的反义链和具有与所述反义链的序列互补性的长度为15至17nt的有义链，其中所述反义链和所述有义链形成复合物，其中所述反义链的5’端和所述有义链的3’端形成平端。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.02 US 62/290,2981.一种RNA复合物，所述RNA复合物包括具有与IL4RαmRNA序列的序列互补性的长度为至少19个核苷酸(nt)的反义链和具有与所述反义链的序列互补性的长度为15至17nt的有义链，其中所述反义链和所述有义链形成复合物，其中所述反义链的5’端和所述有义链的3’端形成平端。2.一种RNA复合物，所述RNA复合物包括具有与TRPA1mRNA序列的序列互补性的长度为至少19个核苷酸(nt)的反义链和具有与所述反义链的序列互补性的长度为15至17nt的有义链，其中所述反义链和所述有义链形成复合物，其中所述反义链的5’端和所述有义链的3’端形成平端。3.一种RNA复合物，所述RNA复合物包括具有与F2RL1mRNA序列的序列互补性的长度为至少19个核苷酸(nt)的反义链和具有与所述反义链的序列互补性的长度为15至17nt的有义链，其中所述反义链和所述有义链形成复合物，其中所述反义链的5’端和所述有义链的3’端形成平端。4.如权利要求1至3中任一项所述的RNA复合物，其中所述反义链的长度为19至21nt。5.如权利要求1至3中任一项所述的RNA复合物，其中所述反义链的长度为19nt。6.如权利要求1至3中任一项所述的RNA复合物，其中所述反义链的长度为20nt。7.如权利要求1至3中任一项所述的RNA复合物，其中所述反义链的长度为21nt。8.如权利要求1至3中任一项所述的RNA复合物，其中所述反义链的长度为至少24nt。9.如权利要求1至8中任一项所述的RNA复合物，其中所述有义链的长度为15nt。10.如权利要求1至8中任一项所述的RNA复合物，其中所述有义链的长度为16nt。11.如权利要求1至8中任一项所述的RNA复合物，其中所述有义链的长度为17nt。12.如权利要求1至11中任一项所述的RNA复合物，其中所述有义链具有选自表1、表2、表3、表4、表5、表6、表7、表8、表9和表10中列出的有义链序列的序列。13.如权利要求1至11中任一项所述的RNA复合物，其中所述反义链具有选自表1、表2、表3、表4、表5、表6、表7、表8、表9和表10中列出的反义链序列的序列。14.如权利要求1和4至13中任一项所述的RNA复合物，其中所述RNA复合物能够抑制细胞IL4Rα表达。15.如权利要求2和4至13中任一项所述的RNA复合物，其中所述RNA复合物能够抑制细胞TRPA1表达。16.如权利要求3至13中任一项所述的RNA复合物，其中所述RNA复合物能够抑制细胞F2RL1表达。17.如权利要求14至16中任一项所述的RNA复合物，其中所述细胞是上皮细胞。18.如权利要求14至16中任一项所述的RNA复合物，其中所述细胞是角质形成细胞。19.如权利要求14至16中任一项所述的RNA复合物，其中所述细胞是肺泡细胞。20.如权利要求14至16中任一项所述的RNA复合物，其中所述细胞是A549细胞。21.如权利要求1所述的RNA复合物，其中所述RNA复合物包括IL4RA#5的反义链和有义链。22.如权利要求3所述的RNA复合物，其中所述RNA复合物包括TRPA1#81的反义链和有义链。23.如权利要求5所述的RNA复合物，其中所述RNA复合物包括F2RL1#22的反义链和有义链。24.如权利要求1至23中任一项所述的RNA复合物，其中所述RNA复合物包括化学修饰。25.如权利要求24所述的RNA复合物，其中所述化学修饰为2’-O-甲基化核苷、硫代磷酸酯键或疏水部分。26.如权利要求25所述的RNA复合物，其中所述RNA复合物包括疏水部分。27.如权利要求26所述的RNA复合物，其中所述疏水部分为胆甾醇部分。28.如权利要求27所述的RNA复合物，其中所述胆甾醇部分被附连至所述有义链的3’末端。29.如权利要求24或25所述的RNA复合物，其中所述RNA复合物包括2’-O-甲基化核苷。30.如权利要求29所述的RNA复合物，其中所述2’-O-甲基化核苷被定位于所述有义链的3’末端。31.如权利要求30所述的RNA复合物，其中所述有义链的3’末端区包括多个2’-O-甲基化核苷。32.如权利要求29所述的RNA复合物，其中所述2’-O-甲基化核苷被定位于所述反义链的3’末端。33.如权利要求32所述的RNA复合物，其中所述反义链的3’末端区包括多个2’-O-甲基化核苷。34.如权利要求29所述的RNA复合物，其中2’-O-甲基化核苷被定位于所述有义链的所述3’末端和所述反义链的3’末端。35.如权利要求34所述的RNA复合物，其中所述有义链的3...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·K·李，S·W·弘，H·李，D·于，J·严，
申请(专利权)人：奥利克斯医药有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国,KR