抑制ROR-β表达的用于诱导不对称RNAi的核酸分子制造技术

本申请涉及一种抑制ROR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抑制ROR
‑
β
表达的用于诱导不对称RNAi的核酸分子


[0001]本专利技术涉及一种抑制ROR
‑
β(Retinoid
‑
related orphan nuclear receptor)表达的用于诱导不对称RNAi的核酸分子及其用途，具体地，涉及一种用于诱导不对称RNAi的核酸分子以及用于改善或治疗视网膜疾病的药物组合物，所述用于诱导不对称RNAi的核酸分子包括包含与编码ROR
‑
β的mRNA互补的序列的反义链以及与所述反义链形成互补键的有义链，所述组合物包括所述用于诱导不对称RNAi的核酸分子。

技术介绍

[0002]视网膜色素变性是一种因赋予视杆细胞特征的基因发生突变而破坏视杆细胞，并进一步破坏视锥细胞而最终导致失明的疾病。ROR
‑
β(Retinoid
‑
related orphan nuclear receptor)是一种在视杆细胞和视锥细胞的分化中起重要作用的转录因子，其对调节向杆状细胞分化的Neural retina leucine zipper(NRL)表达进行调节，并参与其它多种视网膜功能。ROR
‑
β有RORβ1和RORβ2两种同源异构体，RORβ1在NRL的上游阶段(upstream)诱导NRL表达，而RORβ2是受NRL调节的因子，其使NRL的表达得到强化。即，ROR
‑
β和NRL两个基因之间发生正反馈作用，从而稳定视杆细胞分化。(Fu et al.，"Feedback Induction of a Photoreceptor
‑
specific Isoform of Retinoid
‑
related Orphan Nuclear Receptorβby the Rod Transcription Factor NRL"Journal of Biological Chemistry 2014Nov 21；289(47):32469
‑
80.)。特别是，以与ROR
‑
β密切相关的NRL为例，通过视网膜变性的小鼠模型观察到当用腺病毒相关病毒(AAV)传递的CRISPR/Cas9敲除时，视杆细胞获得部分视锥细胞的性质，使得视杆细胞在赋予视杆细胞特征的基因发生突变时不被破坏并得以保持，进而防止视锥细胞的损失(Yu，Wenhan，et al.，"Nrl knockdown by AAV
‑
delivered CRISPR/Cas9 prevents retinal degeneration in mice."Nature communications 8(2017)：14716)。这种现象类似于在缺损Ror
‑
β的小鼠中视杆细胞获得视锥细胞特性的研究类似(jia et al，"Retinoid
‑
related orphan nuclear receptor RORβis an early
‑
acting factor in rod photoreceptor development"Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America(2009)13；106(41):17534
‑
9.)，由此可见，NRL和ROR
‑
β在视网膜内视杆细胞和视锥细胞的分化过程中起到非常重要的作用。
[0003]另一方面，利用RNA干扰现象治疗疾病使用的是靶向mRNA并在翻译水平中调节基因表达的siRNA，因此可以更加安全地治疗疾病。小干扰RNA(small interfering RNA；siRNA)由具有与靶mRNA相同序列的有义链以及具有与其互补序列的反义链组成。常规siRNA具有19bp至21bp的短双链体，并且两个核苷酸从两条链的3'突出。siRNA进入细胞附着于靶mRNA后分解靶mRNA，从而抑制靶基因的表达。由于可以通过改变寡核苷酸序列来靶向所有的mRNA，因此可以抑制结构复杂的蛋白质的表达，从而使当前难以治疗的癌症、病毒感染以及遗传病等疾病得到治疗。然而，引入细胞内的siRNA可能引起免疫反应的诱导、脱靶基因的抑制等副作用，其中，将siRNA导入细胞内的传递系统在利用siRNA的治疗药物研发中成为最关键的问题。
[0004]siRNA因磷酸骨架而带有负电荷，其与带负电荷的细胞膜有排斥力，因此需要一个传递系统将siRNA导入细胞。作为传递系统的实例，广泛使用的是利用具有正电荷的脂质体或聚合物包裹siRNA来抵消负电荷，从而将其导入细胞的方法。然而，带正电荷的载体会引起各种副作用，例如附着在带负电荷的细胞膜上，表现出不需要的毒性，或者通过与细胞中各种类型的蛋白质相互作用形成不需要的复合物等。此外，由于siRNA会被血液中的核酸酶快速分解，因此到达靶细胞的siRNA量可能不足以显着降低靶基因的表达。因此，需要一种安全有效地将siRNA传递至靶细胞的方法。
[0005]为此，本专利技术人为选择可抑制ROR
‑
β表达的靶向ROR
‑
β的siRNA，并研发出无需传递物质也可传递至细胞且对核酸酶具有高抵抗力的siRNA而付出努力，最终设计出靶向ROR
‑
β的siRNA，通过筛选选择出最有效抑制ROR
‑
β的siRNA，并证实通过修饰可以解决细胞内传递问题，以此完成了本专利技术。
[0006]本
技术介绍
部分中描述的上述信息仅用于提高对本专利技术背景的理解，因此可以不包括构成本专利技术所属领域技术人员已知的现有技术的信息。

技术实现思路

[0007]技术问题
[0008]本专利技术的目的在于提供一种特异性抑制ROR
‑
β表达的用于诱导不对称RNAi的核酸分子。
[0009]本专利技术的另一目的在于提供一种用于改善或治疗视网膜疾病的药物组合物或改善或治疗视网膜疾病的方法。
[0010]技术方案
[0011]为了实现上述目的，本专利技术提供一种用于诱导RNAi的核酸分子，其特征在于包括包含与编码ROR
‑
β(Retinoid
‑
related orphan nuclear receptor)的mRNA互补的序列的反义链以及与所述反义链形成互补键的有义链，并且所述反义链的5
’
末端和所述有义链的3
’
末端形成平端(blunt end)。
[0012]本专利技术另外提供一种用于改善或治疗视网膜疾病的药物组合物，其包括所述用于诱导RNAi的核酸分子。
[0013]本专利技术另外提供一种改善或治疗视网膜疾病的方法，其包括将所述用于诱导RNAi的核酸分子施用于个体。
[0014]有益效果
[0015]根据本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于诱导RNAi的核酸分子，其包括：反义链，其包含与编码ROR
‑
β的mRNA互补的序列；以及有义链，其与所述反义链形成互补键，其中，所述反义链的5
’
末端和所述有义链的3
’
末端形成平端。2.根据权利要求1所述的用于诱导RNAi的核酸分子，其中，所述有义链具有15nt至17nt的长度，所述反义链具有18nt至23nt的长度。3.根据权利要求1所述的用于诱导RNAi的核酸分子，其中，所述有义链选自由SEQ ID NO：27、29、51、83、85、91、95、97、103、105、107、109以及115所组成的组。4.根据权利要求3所述的用于诱导RNAi的核酸分子，其中，所述有义链选自由SEQ ID NO：27、29、51以及109所组成的组。5.根据权利要求1所述的用于诱导RNAi的核酸分子，其中，所述反义链选自由SEQ ID NO：28、30、52、84、86、92、96、98、104、106、108、110以及116所组成的组。6.根据权利要求5所述的用于诱导RNAi的核酸分子，其中，所述反义链选自由SEQ ID NO：28、30、52以及110所组成的组。7.根据权利要求1所述的用于诱导RNAi的核酸分子，其中，所述用于诱导RNA i的核酸分子的有义链或反义链包括选自由以下的至少一种化学修饰：在核苷酸内糖结构2
’
碳位中，
‑
OH基团被
‑
CH3(甲基)、
‑
OCH3(甲氧基)、
‑
NH 2
、
‑
F(氟)、
‑
O
‑2‑
甲氧基乙基
‑
O
‑
丙基、
‑
O
‑2‑
甲硫基乙基、
‑
O
‑3‑
氨基丙基或
‑
O
‑3‑
二甲基氨基丙基所取代；核苷酸内糖结构的氧被硫取代；核苷酸键修饰为硫代磷酸酯、硼磷酸酯或膦酸甲酯；修饰为PNA、LNA或UNA的形式；以及磷酸基团、亲脂性化合物或细胞穿透肽结合。8.根据权利要求7所述的用于诱导RNAi的核酸分子，其中，所述亲脂性化合物选自由胆固醇、生育酚、硬脂酸、视黄酸、DHA、棕榈酸、亚油酸、亚麻酸以及具有10个或更多个碳原子的长链脂肪酸所组成的组。9.根据权利要求7所述的用于诱导RNAi的核酸分子，其中，所述有义链包括选自以下的至少一种化学修饰：3
’
末端附近的两个至四个核苷酸键修饰为硫代磷酸酯、硼磷酸酯或膦酸甲酯；在两个或更多个核苷酸内糖结构2
’
碳位中，
‑
OH基团被
‑
CH3(甲基)、
‑
OCH3(甲氧基)、
‑
NH2、
‑
F(氟)、
‑
O
‑2‑
甲氧基乙基
‑
O
‑
丙基、
‑
O
‑2‑
甲硫基乙基、
‑
O
‑3‑
氨基丙基、
‑
O
‑3‑
二甲基氨基丙基所取代；亲脂性化合物或细胞穿透肽与3'末端结合。10.根据权利要求7...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑蕙媛，朴峻贤，梁承惹，
申请(专利权)人：奥利克斯医药有限公司，
类型：发明
国别省市：