红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为CD8制造技术

本发明专利技术涉及红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为CD8

【技术实现步骤摘要】
红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为CD8+T细胞增殖促进剂的用途
本专利技术属于医药领域，具体涉及红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为CD8+T细胞增殖促进剂的用途。
技术介绍
诺卡氏菌为多形态，有诺卡氏菌属球状、杆状、丝状，菌体大小0.6×(3～4)微米，无运动性，有些菌种呈弱抗酸性，专性需氧，营养要求一般。在普通琼脂平板上培养3天后有可见菌落，7～10天后菌落凸起，气生菌丝形成后，表面呈绒毛状。不同种的菌落有黄、橙、红或这些色素的混合色。DNA中的G+C克分子含量为60～72％。大多为腐生菌，存在于土壤中。红色诺卡氏菌(Nocardiarubra)是其中的一种放线菌。红色诺卡氏菌菌体经发酵、细胞破碎、蛋白酶降解后可制得红色诺卡氏菌细胞壁骨架(以下简称Nr-CWS或N-CWS)。
技术实现思路
本专利技术发现红色诺卡氏菌细胞壁骨架能够促进CD8+T细胞增殖、促进CD8+T细胞表面功能分子CD25和CD69的表达、促进CD8+T细胞胞内颗粒酶B和穿孔素的表达、以及促进CD8+T细胞TNF-α的表达，进而完成了本专利技术。根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD8+T细胞增殖的药物中的用途。根据本专利技术，所述药物能够通过促进CD8+T细胞增殖治疗与CD8+T细胞相关的疾病，包括但不限于：例如病毒等的病原微生物感染引起的机体局部组织感染或病变，以及自身免疫性疾病。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD8+T细胞增殖促进剂的用途。根据本专利技术，所述“非治疗目的”例如在体外促进CD8+T细胞增殖。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供一种体外促进CD8+T细胞增殖的方法，其中，给予体外培养的CD8+T细胞红色诺卡氏菌细胞壁骨架。优选，红色诺卡氏菌细胞壁骨架的浓度为1-60μg/ml，进一步优选2-30μg/ml，更优选3-15μg/ml。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD8+T细胞表面功能分子CD25、CD8+T细胞表面功能分子CD69、CD8+T细胞胞内颗粒酶B或CD8+T细胞胞内穿孔素表达的药物中的用途。根据本专利技术，所述药物能够通过促进CD8+T细胞表面功能分子CD25、CD8+T细胞表面功能分子CD69、CD8+T细胞胞内颗粒酶B或CD8+T细胞胞内穿孔素表达治疗与CD8+T细胞相关的疾病，包括但不限于：例如病毒等的病原微生物感染引起的机体局部组织感染或病变，以及自身免疫性疾病。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD8+T细胞表面功能分子CD25、CD8+T细胞表面功能分子CD69、CD8+T细胞胞内颗粒酶B或CD8+T细胞胞内穿孔素表达促进剂的用途。根据本专利技术，所述“非治疗目的”例如在体外促进CD8+T细胞表面功能分子CD25、CD8+T细胞表面功能分子CD69、CD8+T细胞胞内颗粒酶B或CD8+T细胞胞内穿孔素表达。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供一种体外促进CD8+T细胞表面功能分子CD25、CD8+T细胞表面功能分子CD69、CD8+T细胞胞内颗粒酶B或CD8+T细胞胞内穿孔素表达的方法，其中，给予体外培养的CD8+T细胞红色诺卡氏菌细胞壁骨架。优选，红色诺卡氏菌细胞壁骨架的浓度为1-60μg/ml，进一步优选2-30μg/ml，更优选3-15μg/ml。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD8+T细胞TNF-α表达的药物中的用途。根据本专利技术，所述药物能够通过促进CD8+T细胞TNF-α表达治疗与CD8+T细胞相关的疾病，包括但不限于：例如病毒等的病原微生物感染引起的机体局部组织感染或病变，以及自身免疫性疾病。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD8+T细胞TNF-α表达促进剂的用途。根据本专利技术，所述“非治疗目的”例如在体外促进CD8+T细胞TNF-α表达。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供一种体外促进CD8+T细胞TNF-α表达的方法，其中，给予体外培养的CD8+T细胞红色诺卡氏菌细胞壁骨架。优选，红色诺卡氏菌细胞壁骨架的浓度为1-60μg/ml，进一步优选2-30μg/ml，更优选3-15μg/ml。本领域技术人员可以理解，红色诺卡氏菌细胞壁骨架可以商购或者按照本领域已知的各种方法制备得到。优选，红色诺卡氏菌为Nr-8206(其于2002年2月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.0712)。例如，可以通过将红色诺卡氏菌发酵后去除DNA、DNA、RNA、蛋白质、类脂，制备得到红色诺卡氏菌细胞壁骨架，其主要有效成分为胞壁酸、多聚糖和粘肽，分子量约为2-20KD。本专利技术通过实验首次证实了红色诺卡氏菌细胞壁骨架能够促进CD8+T细胞增殖、促进CD8+T细胞表面功能分子CD25、CD8+T细胞表面功能分子CD69、CD8+T细胞胞内颗粒酶B或CD8+T细胞胞内穿孔素的表达、以及促进CD8+T细胞TNF-α的表达，从而使得红色诺卡氏菌细胞壁骨架能够在体内用于治疗与CD8+T细胞有关的疾病，而且能够在体外用于促进CD8+T细胞增殖、促进CD8+T细胞表面功能分子CD25、CD8+T细胞表面功能分子CD69、CD8+T细胞胞内颗粒酶B或CD8+T细胞胞内穿孔素的表达、以及促进CD8+T细胞TNF-α的表达。附图说明图1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架促进CD8+T细胞增殖：图1A为24小时，图1B为48小时图2.红色诺卡氏菌细胞壁骨架促进CD8+T细胞表面功能分子CD25和CD69的表达：图2A1为24小时流式图；图2A2为24小时CD25和CD69表达对比；图2B1为48小时流式图；图2B2为48小时CD25和CD69表达对比；图2C为24小时TRAIL和FasL表达对比；图2D为48小时TRAIL和FasL表达对比图3.红色诺卡氏菌细胞壁骨架促进CD8+T细胞胞内颗粒酶B和穿孔素的表达：图3A1为24小时流式图；图3A2为24小时颗粒酶B和穿孔素表达对比；图3B1为48小时流式图；图3B2为48小时颗粒酶B和穿孔素表达对比图4.红色诺卡氏菌细胞壁骨架促进CD8+T细胞TNF-α的表达具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外，应理解，在阅读了本专利技术所记载的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本专利技术所限定的范围。实施例1.Nr-CWS促进CD8+T细胞增殖1.小鼠CD8+T细胞的分离纯化、培养(1)无菌分离小鼠(清洁级C57BL/6小鼠，6-8周龄，雌性，体重18-20克，购于上海斯莱克实验动物有限公司)脾脏，制备单细胞悬液；1000rpm/min离心10min后弃去上清得细胞沉淀；所得脾脏细胞沉淀用2ml红细胞裂解液悬浮，冰上裂解红细胞5min，加入10ml冷PBS缓冲液，1000rpm/min离心5min后弃去上清得细胞沉淀；重悬于2ml磁珠分选缓冲液中，调整细胞浓度为1×108/ml。(2)按照StemcellEasySepTMmouseCD8+Tcelliso本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD8+T细胞增殖的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD8+T细胞增殖的药物中的用途。2.红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD8+T细胞增殖促进剂的用途。3.一种体外促进CD8+T细胞增殖的方法，其中，给予体外培养的CD8+T细胞红色诺卡氏菌细胞壁骨架。优选，红色诺卡氏菌细胞壁骨架的浓度为1-60μg/ml，进一步优选2-30μg/ml，更优选3-15μg/ml。4.红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD8+T细胞表面功能分子CD25、CD8+T细胞表面功能分子CD69、CD8+T细胞胞内颗粒酶B或CD8+T细胞胞内穿孔素表达的药物中的用途。5.红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD8+T细胞表面功能分子CD25、CD8+T细胞表面功能分子CD69、CD8+T细胞胞内颗粒酶B或CD8+T细胞胞内穿孔素表达促进剂的用途。6.一种体外促进CD8+T细胞表面...

【专利技术属性】
技术研发人员：石明生，窦恒，南宁，盖波，徐勇猛，
申请(专利权)人：辽宁格瑞仕特生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21