三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因及其编码蛋白和应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体的说是一种三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因及其编码蛋白和应用。三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因为序列表SEQ ID No.1中的碱基序列所示。利用cDNA文库和RACE技术从三疣梭子蟹中扩增得到PtgC1qR基因cDNA，重组PtgC1qR蛋白具有显著的酚氧化酶抑制活性、抑菌及微生物结合活力。本发明专利技术为三疣梭子蟹的病害防治、基因辅助选择育种奠定了基础，且在水产药物开发和饲料添加剂生产等方面具有潜在的应用价值。

C1q receptor PtgC1qR gene of three Portunus Portunus and its encoded protein and Application

The invention belongs to the technical field of molecular biology, in particular to the C1q receptor PtgC1qR gene of Portunus trituberculatus and its coding protein and application. The C1q receptor PtgC1qR base of Portunus three is shown by the nucleotide sequence of the sequence table SEQ ID No.1. PtgC1qR gene cDNA was amplified from Portunus trituberculatus by using cDNA library and RACE technique. The recombinant PtgC1qR protein had significant phenoloxidase inhibitory activity, bacteriostatic activity and microbial binding activity. The invention lays a foundation for Disease Control and gene-assisted selection breeding of Portunus trituberculatus, and has potential application value in aquatic drug development and feed additive production.

【技术实现步骤摘要】
三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因及其编码蛋白和应用
本专利技术属于分子生物学
，具体的说是一种三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因及其编码蛋白和应用。
技术介绍
三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)是我国重要的海产经济蟹类，由于其个体大、营养丰富、生长迅速等优点，已成为我国重要海水养殖品种。但随着养殖规模不断扩大及工厂化、集约化程度不断提高，由细菌、真菌和病毒等引起的多种疾病在三疣梭子蟹养殖群体中频繁爆发，给三疣梭子蟹养殖业造成巨大损失，严重制约了三疣梭子蟹养殖产业的健康可持续发展。因此，开展三疣梭子蟹免疫防疫基础研究，为蟹病的防治寻找更科学有效的途径，通过提高蟹自身免疫抵抗力来预防和减少蟹病的发生，是实现蟹类健康养殖的有力保障。补体系统是由近40种蛋白组成的复杂限制性蛋白水解系统，既是先天免疫系统的重要组成部分，也是联系先天免疫和获得性免疫的纽带，广泛参与机体抗病原微生物的免疫防御和免调节。高等动物补体系统通过三大途径激活：经典途径、凝集素途径和替代途径，最终形成溶膜复合物，导致靶细胞如病菌的溶解和破裂。C1q是补体经典途径的启动分子，曾被认为只在具有获得性免疫的有颌类脊椎动物中存在。但随后在七鳃鳗和文昌鱼中报道了C1q的同源分子，表明Clq在获得性免疫产生之前就已经在动物体内存在，它在功能上与凝集素相似，是一类模式识别受体。gC1qR是一种多功能蛋白，不仅可以特异性识别并结合补体Clq，且能识别高分子量激肽原，近而可调节补体和激肽原级联反应；gC1qR一方面可与肝炎病毒和腺病毒的核心蛋白结合，提升病毒侵染能力、增强病毒毒力，另一方面可粘附在WSSV病毒的包膜蛋白组织病毒复制；gC1qR还可直接识别并结合病原菌，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和真菌都具有一定的结合活性。另外，基于其分子量和功能，gC1qR也被命名为p33、透明质酸结合蛋白1、p32和剪接因子2，提示gC1qR确实属于一种多功能蛋白，且很多报道表明gC1qR在甲壳动物先天免疫中发挥了重要作用。到目前为止，尽管有一些研究集中在挖掘甲壳动物gC1qR的功能，然而尚未发现关于三疣梭子蟹C1q受体gC1qR的报道。因此，研究C1q受体gC1qR对理解三疣梭子蟹的免疫防御机制、进行病害防治具有重要的理论和实践意义，同时有助于开发天然药物用于人类疾病的治疗。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因及其编码蛋白和应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR，三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因为序列表SEQIDNo.1中的碱基序列所示。所述的三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因编码蛋白，所述PtgC1qR基因编码蛋白为序列表SEQIDNo.2中氨基酸序列所示。一种三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因编码蛋白的应用，所述三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因的重组表达产物可制备为蛋白酶抑制剂、抗菌药物、免疫增强剂、饲料添加剂、防腐剂或保鲜剂。所述三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因的重组表达产物可用于制备酚氧化酶抑制剂药物或抑菌药物。所述三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因的重组表达产物可用于制备革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌的抗菌药物。所述革兰氏阴性菌为溶藻弧菌、铜绿假单胞菌，革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌。本专利技术所具有的优点：本专利技术利用三疣梭子蟹PtgC1qR重组表达蛋白浓度为2.90、5.81、11.61μM时，在反应50min时，对三疣梭子蟹血细胞破碎裂解液酚氧化酶的抑制活性分别为3.45、85.52和98.62％。重组蛋白PtgC1qR对革兰氏阴性菌溶藻弧菌具有明显的清除活力。重组蛋白PtgC1qR对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌)、革兰氏阴性菌(溶藻弧菌、铜绿假单胞菌)和真菌(毕赤酵母菌)均具有结合活力。此外，重组蛋白PtgC1qR对溶藻弧菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌均有明显的抑制作用，最小抑菌浓度分别为1.45～2.90μM、2.90～5.81μM、5.81～11.61μM、2.90～5.81μM。本专利技术的PtgC1qR基因及其重组蛋白可作为酚氧化酶类抑制剂药物的生产，应用于人类相关疾病的治疗，或用于饲料添加剂、防腐剂或保鲜剂的生产等，另外还可以为进一步研究三疣梭子蟹免疫防御机制提供基础，并为三疣梭子蟹的病害防治和基因辅助选育提供参考。附图说明图1为本专利技术实例提供的纯化后三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR编码成熟肽的基因扩增产物(其中，M：DNAmarker，1：成熟肽的基因扩增产物)。图2为本专利技术实例提供的诱导和纯化后三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR重组蛋白(其中M：蛋白marker；1：IPTG诱导后pET-32a空质粒表达的蛋白2：未诱导菌体中表达的蛋白；3：IPTG诱导后表达的蛋白；4：纯化的重组蛋白)。图3为本专利技术实例不同浓度的三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR重组蛋白对三疣梭子蟹血细胞破碎上清液(HLS)酚氧化酶的抑制作用图(Tris-HCL为阴性对照)。图4为本专利技术实例三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR重组蛋白(终浓度7.96μM)对溶藻弧菌的清除作用图(注射溶藻弧菌组为阴性对照)。图5为本专利技术实例三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR重组蛋白对细菌、真菌结合活力作用图(其中M：蛋白marker；1：藤黄微球菌与PtgC1qR重组蛋白洗脱液；2：藤黄微球菌与重组蛋白孵育离心后上清液；3：藤黄微球菌与PtgC1qR重组蛋白孵育后洗涤液；4：金黄色葡萄球菌与PtgC1qR重组蛋白洗脱液；5：金黄色葡萄球菌与PtgC1qR重组蛋白孵育离心后上清液；6：金黄色葡萄球菌与PtgC1qR重组蛋白孵育后洗涤液；7：毕赤酵母菌与PtgC1qR重组蛋白洗脱液；8：毕赤酵母菌与PtgC1qR重组蛋白孵育离心后上清液；9：毕赤酵母菌与PtgC1qR重组蛋白孵育后洗涤液；10：铜绿假单胞菌与PtgC1qR重组蛋白洗脱液；11：铜绿假单胞菌与PtgC1qR重组蛋白孵育离心后上清液；12：铜绿假单胞菌与PtgC1qR重组蛋白孵育后洗涤液；13：溶藻弧菌与PtgC1qR重组蛋白洗脱液；14：溶藻弧菌与PtgC1qR重组蛋白孵育离心后上清液；15：溶藻弧菌与PtgC1qR重组蛋白孵育后洗涤液。具体实施方式下面的实施例中将本专利技术作进一步阐述，但本专利技术不限于此。本专利技术利用cDNA文库和RACE技术从三疣梭子蟹中扩增得到PtgC1qR基因cDNA，重组PtgC1qR蛋白具有显著的酚氧化酶抑制活性、抑菌及微生物结合活力。当重组蛋白PtgC1qR浓度为2.90、5.81、11.61μΜ，反应时间为50min时，对三疣梭子蟹血细胞裂解液酚氧化酶的抑制活性分别为3.45、85.52和98.62％，且该重组蛋白对溶藻弧菌有显著的抑制和清除效果。重组蛋白PtgC1qR对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌)、革兰氏阴性菌(溶藻弧菌、铜绿假单胞菌)和真菌(毕赤酵母菌)均具有结合活力。此外，重组蛋白PtgC1qR对溶藻弧菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌均有明显的抑制作用，最小抑菌浓度分别为1.45～2.90μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR，其特征在于：三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因为序列表SEQ ID No.1中的碱基序列所示。

【技术特征摘要】
1.一种三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR，其特征在于：三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因为序列表SEQIDNo.1中的碱基序列所示。2.一种权利要求1所述的三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因编码蛋白，其特征在于：所述PtgC1qR基因编码蛋白为序列表SEQIDNo.2中氨基酸序列所示。3.一种按权利要求2所述的三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因编码蛋白的应用，其特征在于：所述三疣梭子蟹C1q受体PtgC1qR基因的重组表达产物可制备为蛋白酶抑制剂、抗菌药物、免疫增强剂、饲料添加剂、防腐剂或保鲜剂。4.按权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘媛，宁军号，崔朝霞，宋呈文，刘厚荣，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37