使用II型活化素受体配体阱的用于β-地中海贫血的体外细胞培养方法技术

本文提供了治疗对象中β‑地中海贫血的方法，其包括向所述对象施用II型活化素受体(ActRII)信号转导抑制剂(例如，活化素配体阱)并且在以下情况下使用本文所提供的一种或多种体外细胞培养方法：(i)根据本文所提供的方法治疗的对象的选择；和/或(ii)根据本文所提供的方法治疗的对象的监控。

In vitro cell culture method for beta thalassemia using II activator receptor ligand trap

This article provides a method for the treatment of beta thalassemia, which includes using the II type activin receptor (ActRII) signal transduction inhibitor (such as the activin ligand trap) and in the following case the use of one or more in vitro cell culture methods provided in this article: (I) according to the method provided in this article. The selection of objects; and / or (II) monitoring of objects treated according to the methods provided herein.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用II型活化素受体配体阱的用于β-地中海贫血的体外细胞培养方法1.相关申请的交叉引用本专利技术申请主张2015年5月20日提交的美国临时专利申请No.62/164,367和2016年4月8日提交的美国临时专利申请No.62/320,032的优先权，以上每篇专利的全部内容作为参考并且出于所有目的并入本文。2.序列表本专利技术申请与2016年5月16日创建的大小为93千字节的以文件名“12827_965_228_SeqListing.txt”提交的序列表一起提交。该序列表以其全部内容并且出于所有目的作为参考并入本文。3.
本文提供了治疗对象中β-地中海贫血的方法，其包括向所述对象施用II型活化素受体(ActRII)信号转导抑制剂(例如，活化素配体阱)并且在以下情况下使用本文所提供的一种或多种体外细胞培养方法：(i)根据本文所提供的方法治疗的对象的选择；和/或(ii)根据本文所提供的方法治疗的对象的监控。4.专利技术背景β-地中海贫血是全世界最常见的遗传性血红蛋白病之一，它是由使β-球蛋白在红细胞生成细胞中不存在或引起其低水平合成的编码β-球蛋白的基因中的常染色体突变所造成的(WeatherallDJ,2001,NatureReviewsGenetics；2(4):245–255)。约8000至9000万人(全球人口的～1.5％)是β-地中海贫血的携带者，其中每年出生约60,000名有症状的个体(Modell等人,2007,ScandJClinLabInvest；67:39-69)。据估计全球每年有症状个体的发病率为1/100,000，而在欧盟(EU)国家为1/10,000(GalanelloRandOrigaR,2010,OrphanetJRareDis；5:11)。发病率在地中海地区、中东和东南亚(特别是印度、泰国和印度尼西亚；该地区占受影响新生儿的约50％)最高，并且由于移民发病率在全世界范围内逐渐升高(例如，欧洲、美洲和澳大利亚)(ColahR,Gorakshakar等人,2010；ExpertRevHematol；3(1):103-17；Modell等人,2008,BullWorldHealthOrgan；86(6):480-7)。β-地中海贫血的特征在于β-球蛋白链的减少以及血红蛋白(Hb)分子的球蛋白链中后续的不平衡(α：非-α的比值)，其导致红细胞生成受损及其它并发症。已在患有β-地中海贫血的患者中描述了近200种影响β-球蛋白基因的不同突变，对此患者可以是纯合的或者复合杂合的。因此，在患者中表型影响的范围广泛，从轻微损害到β-球蛋白链合成的完全抑制(TheinSL,2013,ColdSpringHarbPerspectMed；3(5):a011700)。除缺陷型β-球蛋白链之外，患者还可以表现为β-地中海贫血结合结构变体，如HbE，从而导致HbE/β-地中海贫血。考虑到目前缺少治疗β-地中海贫血，例如，输血依赖性和非输血依赖性β-地中海贫血的安全且有效的药物疗法，对于开发特异性针对β-地中海贫血综合征的潜在病理生理学，包括贫血症和无效性红细胞生成的并发症的新型疗法，诊断β-地中海贫血的方法和监控对β-地中海贫血的治疗的方法，仍存在明显未满足的医学需求。已将两种相关的II型受体ActRIIA和ActRIIB鉴别为II型活化素受体(MathewsandVale,1991,Cell65:973-982；Attisano等人,1992,Cell68:97-108)。除活化素外，ActRIIA和ActRIIB可以与一些其它TGF-β家族蛋白，包括BMP7、Nodal、GDF8和GDF11生物化学相互作用(Yamashita等人,1995,J.CellBiol.130:217-226；LeeandMcPherron,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.98:9306-9311；YeoandWhitman,2001,Mol.Cell7:949-957；Oh等人,2002,GenesDev.16:2749-54)。ALK4是活化素，具体地活化素A的主要I型受体，并且ALK-7也可以用作活化素，具体地活化素B的受体。已表明ActRII信号转导抑制剂提高红细胞水平并且治疗无效性红细胞生成(分别参见，例如，美国专利No.7,988,973和美国专利申请No.13/654,191，以上专利以其全部内容作为参考并入本文)。此外，目前已在临床II期试验中评价了由人源化融合-蛋白组成的活化素配体阱对β-地中海贫血对象的治疗，所述人源化融合-蛋白由IIA型活化素-受体胞外域(ActRIIA)和人IgG1Fc组成(ActRIIA-hFc)。目前已在临床II期试验中评价了由人源化融合-蛋白组成的活化素配体阱对β-地中海贫血对象的治疗，所述人源化融合-蛋白由IIB型活化素-受体胞外域(ActRIIB)和人IgG1Fc组成(ActRIIB-hFc)。5.专利技术概述本文提供了治疗对象中β-地中海贫血的方法，其包括向所述对象施用ActRII信号转导抑制剂并且在以下情况下使用本文所提供的一种或多种体外细胞培养方法：(i)根据本文所提供的方法治疗的对象的选择；和/或(ii)根据本文所提供的方法治疗的对象的监控。本文还提供了体外细胞培养方法，其包括(a)在存在II型活化素受体(ActRII)信号转导抑制剂的情况下，将红系祖细胞(EPC)和基质细胞共培养一段时间；和(b)确定EPC中GYPA、GATA1、GATA2或α-球蛋白的水平。本文还提供了体外细胞培养方法，其包括(a)在存在II型活化素受体(ActRII)信号转导抑制剂的情况下，将EPC和基质细胞共培养一段时间；和(b)确定所述EPC的扩增水平。本文还提供了体外细胞培养方法，其包括(a)在存在II型活化素受体(ActRII)信号转导抑制剂的情况下，将基质细胞培养一段时间；和(b)确定得自步骤(a)的培养物的上清液中ICAM-1、IL-1Ra、存活素、Bcl-2、Bcl-xL、MCP-1、丝氨酸蛋白酶抑制剂E1、GRO-a、IL-8、IL-10、IL-2、RANTES、IP-10、IL-1a、IL-1b、MIF、G-CSF、GMCSF、C5a、IL-6、HO-2、HIF-1a、TRAILR1、切割的半胱天冬氨酸酶-3、p27、p21、Bax、Bad、CIAP1或PON2的水平。本文还提供了体外细胞培养方法，其包括(a)在条件培养基中培养EPC一段时间，其中所述条件培养基得自在存在ActRII信号转导抑制剂的情况下培养的基质细胞；和(b)确定EPC中GYPA、GATA1、GATA2和/或α-球蛋白的水平和/或得自步骤(a)的培养物的上清液中ICAM-1、IL-1Ra、存活素、Bcl-2、Bcl-xL、MCP-1、丝氨酸蛋白酶抑制剂E1、GRO-a、IL-8、IL-10、IL-2、RANTES、IP-10、IL-1a、IL-1b、MIF、G-CSF、GMCSF、C5a、IL-6、HO-2、HIF-1a、TRAILR1、切割的半胱天冬氨酸酶-3、p27、p21、Bax、Bad、CIAP1或PON2的水平。本文还提供了体外细胞培养方法，其包括(a)在条件培养基中培养EPC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.体外细胞培养方法，其包括(a)在存在II型活化素受体(ActRII)信号转导抑制剂的情况下，将红系祖细胞(EPC)和基质细胞共培养一段时间；和(b)确定所述EPC中GYPA、GATA1、GATA2或α‑球蛋白的水平。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.20 US 62/164,367;2016.04.08 US 62/320,0321.体外细胞培养方法，其包括(a)在存在II型活化素受体(ActRII)信号转导抑制剂的情况下，将红系祖细胞(EPC)和基质细胞共培养一段时间；和(b)确定所述EPC中GYPA、GATA1、GATA2或α-球蛋白的水平。2.体外细胞培养方法，其包括(a)在存在II型活化素受体(ActRII)信号转导抑制剂的情况下，将EPC和基质细胞共培养一段时间；和(b)确定所述EPC的扩增水平。3.体外细胞培养方法，其包括(a)在存在II型活化素受体(ActRII)信号转导抑制剂的情况下，将基质细胞培养一段时间；和(b)确定得自步骤(a)的培养的上清液中ICAM-1、IL-1Ra、存活素、Bcl-2、Bcl-xL、MCP-1、丝氨酸蛋白酶抑制剂E1、GRO-a、IL-8、IL-10、IL-2、RANTES、IP-10、IL-1a、IL-1b、MIF、G-CSF、GMCSF、C5a、IL-6、HO-2、HIF-1a、TRAILR1、切割的半胱天冬氨酸酶-3、p27、p21、Bax、Bad、CIAP1或PON2的水平。4.体外细胞培养方法，其包括(a)在条件培养基中培养EPC一段时间，其中所述条件培养基得自在存在ActRII信号转导抑制剂的情况下培养的基质细胞；和(b)确定所述EPC中GYPA、GATA1、GATA2和/或α-球蛋白的水平和/或得自步骤(a)的培养的上清液中ICAM-1、IL-1Ra、存活素、Bcl-2、Bcl-xL、MCP-1、丝氨酸蛋白酶抑制剂E1、GRO-a、IL-8、IL-10、IL-2、RANTES、IP-10、IL-1a、IL-1b、MIF、G-CSF、GMCSF、C5a、IL-6、HO-2、HIF-1a、TRAILR1、切割的半胱天冬氨酸酶-3、p27、p21、Bax、Bad、CIAP1或PON2的水平。5.体外细胞培养方法，其包括(a)在条件培养基中培养EPC一段时间，其中所述条件培养基得自在存在ActRII信号转导抑制剂的情况下培养的基质细胞；和(b)确定所述EPC的扩增水平。6.体外细胞培养方法，其包括(a)在存在ActRII信号转导抑制剂的情况下培养EPC一段时间；和(b)确定所述EPC中GYPA、GATA1、GATA2或α-球蛋白的水平和/或得自步骤(a)的培养的上清液中ICAM-1、IL-1Ra、存活素、Bcl-2、Bcl-xL、MCP-1、丝氨酸蛋白酶抑制剂E1、GRO-a、IL-8、IL-10、IL-2、RANTES、IP-10、IL-1a、IL-1b、MIF、G-CSF、GMCSF、C5a、IL-6、HO-2、HIF-1a、TRAILR1、切割的半胱天冬氨酸酶-3、p27、p21、Bax、Bad、CIAP1或PON2的水平。7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述基质细胞得自β-地中海贫血对象的骨髓。8.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述红系祖细胞得自β-地中海贫血对象的周围血液。9.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是包含选自下列的氨基酸序列的多肽：(a)与SEQIDNO:2具有90％的同一性；(b)与SEQIDNO:2具有95％的同一性；(c)与SEQIDNO:2具有98％的同一性；(d)SEQIDNO:2；(e)与SEQIDNO:3具有90％的同一性；(f)与SEQIDNO:3具有95％的同一性；(g)与SEQIDNO:3具有98％的同一性；(h)SEQIDNO:3；(i)与SEQIDNO:6具有90％的同一性；(j)与SEQIDNO:6具有95％的同一性；(k)与SEQIDNO:6具有98％的同一性；(l)SEQIDNO:6；(m)与SEQIDNO:7具有90％的同一性；(n)与SEQIDNO:7具有95％的同一性；(o)与SEQIDNO:7具有98％的同一性；(p)SEQIDNO:7；(q)与SEQIDNO:12具有90％的同一性；(r)与SEQIDNO:12具有95％的同一性；(s)与SEQIDNO:12具有98％的同一性；(t)SEQIDNO:12；(u)与SEQIDNO:17具有90％的同一性；(v)与SEQIDNO:17具有95％的同一性；(w)与SEQIDNO:17具有98％的同一性；(x)SEQIDNO:17；(y)与SEQIDNO:20具有90％的同一性；(z)与SEQIDNO:20具有95％的同一性；(aa)与SEQIDNO:20具有98％的同一性；(bb)SEQIDNO:20；(cc)与SEQIDNO:21具有90％的同一性；(dd)与SEQIDNO:21具有95％的同一性；(ee)与SEQIDNO:21具有98％的同一性；(ff)SEQIDNO:21；(gg)与SEQIDNO:25具有90％的同一性；(hh)与SEQIDNO:25具有95％的同一性；(ii)与SEQIDNO:25具有98％的同一性；和(jj)SEQIDNO:25。10.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述ActRIIA信号转导抑制剂是包含选自下列的氨基酸序列的多肽：(a)与SEQIDNO:2具有90％的同一性；(b)与SEQIDNO:2具有95％的同一性；(c)与SEQIDNO:2具有98％的同一性；(d)SEQIDNO:2；(e)与SEQIDNO:3具有90％的同一性；(f)与SEQIDNO:3具有95％的同一性；(g)与SEQIDNO:3具有98％的同一性；(h)SEQIDNO:3；(i)与SEQIDNO:6具有90％的同一性；(j)与SEQIDNO:6具有95％的同一性；(k)与SEQIDNO:6具有98％的同一性；(l)SEQIDNO:6；(m)与SEQIDNO:7具有90％的同一性；(n)与SEQIDNO:7具有95％的同一性；(o)与SEQIDNO:7具有98％的同一性；和(p)SEQIDNO:7。12.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是包含SEQIDNO:7所示的氨基酸序列的多肽。13.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是人源化融合-蛋白，其由ActRIIA的胞外域和人IgG1Fc域组成。14.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB的信号转导抑制剂。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述ActRIIB信号转导抑制剂是包含选自下列的氨基酸序列的多肽：(a)与SEQIDNO:17具有90％的同一性；(b)与SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛丽亚·卡佩利尼，维多利亚·松，
申请(专利权)人：细胞基因公司，玛丽亚·卡佩利尼，
类型：发明
国别省市：美国,US