一种伪狂犬病病毒抗血清及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种伪狂犬病病病毒抗血清及其制备方法。本发明专利技术旨在为伪狂犬病诊断技术、诊断试剂以及猪伪狂犬病疫苗质量监控提供满足要求的伪狂犬病病毒阳性血清。本发明专利技术所涉及的伪狂犬病病毒阳性血清特异性高，且中和效价高达1:2000倍以上，可满足伪狂犬病活疫苗的外源病毒检验和鉴别检验；另外，该发明专利技术中免疫动物采用不含有猪源常见病原体的健康山羊，在试验动物的纯净度上容易控制，免疫原为伪狂犬病灭活疫苗和活疫苗，容易获得且避免使用伪狂犬病病毒强毒进行免疫，降低了生物安全风险；仅经过五次免疫就能够获得高效价的抗血清，方法简便易行，适合大规模制备。

Pseudorabies virus antiserum and preparation method thereof

The invention relates to a pseudorabies virus antiserum and a preparation method thereof. The aim of the invention is to provide pseudorabies virus * positive sera for the quality control of pseudorabies diagnosis technology, diagnostic reagents and Pseudorabies Vaccine. The pseudorabies virus positive serum has high specificity, and the neutralization titer is as high as 1:2000 times, which can satisfy the external virus test and identification test of the live vaccine of pseudorabies. In addition, the immune animal adopts healthy goat * which does not contain common pathogens of swine origin, and is easy to be used in the purity test animals. Control, the immunogen for pseudorabies inactivated vaccine and live vaccine, easy to obtain and avoid the use of pseudorabies virus virulent immunization, reducing the risk of biosafety; only after five immunizations can be obtained high-titer antiserum, simple and feasible, suitable for large-scale preparation.

【技术实现步骤摘要】
一种伪狂犬病病毒抗血清及其制备方法
本专利技术涉及一种伪狂犬病病毒抗血清及其制备方法，属于兽用生物制品

技术介绍
伪狂犬病(Aujeszkysdisease)是由疱疹病毒科中α疱疹病毒亚科猪疱疹病毒Ⅰ型引起的一种急性传染病，是目前世界上最严重传染病之一，并在我国广泛流行，已经造成严重经济损失。伪狂犬诊断技术、诊断试剂以及疫苗等是该病防制的关键。该病的诊断技术和疫苗质量监控都需要伪狂犬病病毒阳性血清，但目前尚未报道能满足使用的伪狂犬病病毒高免血清的制备方法。本专利技术首次以伪狂犬病活疫苗和灭活疫苗对山羊进行免疫，获得具有高中和效价的特异性阳性血清，并使得血清的纯净性更易控制和可靠，满足了伪狂犬病活疫苗的外源病毒检验和鉴别检验。
技术实现思路
本专利技术的目的：提供一种用于伪狂犬病活疫苗外源病毒检验和鉴别检验所需的具有高中和效价的特异性伪狂犬病病毒抗血清。本专利技术的技术方案1.一种伪狂犬病病毒抗血清，其特征在于该伪狂犬病病毒抗血清是利用无猪病常见病原体的山羊制备而成，且该抗血清中和效价高达1:2000倍以上，可用于伪狂犬病活疫苗的外源病毒检验和鉴别检验。2.一种伪狂犬病病毒抗血清的制备方法，其特征在于该抗血清的制备方法为：(1)试验动物：为不含猪病常见病原体的山羊；(2)免疫原：采用商品化的伪狂犬病灭活疫苗和活疫苗；(3)高免血清的制备：检验合格的试验用山羊以伪狂犬病灭活疫苗和活疫苗共进行多次免疫，每次免疫前检测伪狂犬抗体效价，最后一次免疫后一周血清中和抗体效价达到峰值对免疫羊采用颈动脉采血致死，分离血清；(4)高免血清的检验：1)物理性状、无菌检验、支原体检验：均符合要求；2)效价测定：以中和试验和ELISA方法测定高免血清的中和效价，达1:2000以上；3)特异性检验：检测口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪细小病毒病、猪圆环病毒病、伪狂犬病和牛病毒性腹泻/粘膜病抗体，均为阴性；4)外源病毒检验：无外源病毒污染。本专利技术的具体实施方式1.伪狂犬病病毒特异性抗血清的制备(1)试验动物：6个月龄左右、未得并未免疫口蹄疫的山羊，BVDV、伪狂犬病、布鲁氏菌病、蓝舌病、小反刍兽疫和羊痘抗体均为阴性。(2)免疫原：伪狂犬病灭活疫苗和伪狂犬病活疫苗(3)免疫程序：对试验用山羊以伪狂犬病灭活疫苗和伪狂犬病活疫苗进行多次免疫。(4)血清制备：每次免疫后一周采血监测免疫后抗体水平的变化情况。最后一次免疫后一周抗体水平达到最高，颈动脉采血致死，分离血清。-20℃冷冻保存，备用。2.伪狂犬病病毒抗血清的检验1.无菌检验：按照中华人民共和国兽药典(中国兽药典委员会，中华人民共和国兽药典，二〇一五年版三部，中国农业出版社，2016，以下称《中国兽药典》)规定的方法进行无菌检验或纯粹检验，应无菌生长。2.支原体检验：按照《中国兽药典》规定的方法进行支原体检验，应无支原体生长。3.中和效价测定按照《中国兽药典》规定的方法进行中和试验测定血清中和200TCID50伪狂犬病病毒Bartha株的中和效价，4.特异性检验：检测口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪细小病毒病、猪圆环病毒病和牛病毒性腹泻/粘膜病抗体，均应为阴性，伪狂犬病病毒抗体为阳性；5.外源病毒检验：应无外源病毒污染。本专利技术的积极意义本专利技术涉及一种伪狂犬病病病毒抗血清及其制备方法。本专利技术旨在为伪狂犬病诊断技术、诊断试剂以及猪伪狂犬病疫苗质量监控提供满足要求的伪狂犬病病毒阳性血清。本专利技术所涉及的伪狂犬病病毒阳性血清特异性高，且中和效价高达1:2000倍以上，可满足伪狂犬病活疫苗的外源病毒检验和鉴别检验；另外，该专利技术中免疫动物采用不含有猪源常见病原体的健康山羊，在试验动物的纯净度上容易控制，免疫原为伪狂犬病灭活疫苗和活疫苗，容易获得且避免使用伪狂犬病病毒强毒进行免疫，降低了生物安全风险；仅经过五次免疫就能够获得高效价的抗血清，方法简便易行，适合大规模制备。伪狂犬病病毒伪狂犬病活疫苗本专利技术用以解决伪狂犬病诊断技术、诊断试剂以及疫苗质量监控中的问题，完善本行业的检验工作，同时为本行业产品质量的提升和养殖业的安全保驾护航。伪狂犬病病毒伪狂犬病病毒实施例以下实施例为更好的说明本专利技术，不对本专利技术构成限制。实施例1——伪狂犬病病毒特异性抗血清的制备1.试验动物：6个月龄左右、未患过并未免疫口蹄疫的山羊，且经检测BVDV、伪狂犬病、布鲁氏菌病、蓝舌病、小反刍兽疫和羊痘抗体均为阴性。2.免疫原：伪狂犬病灭活疫苗和伪狂犬病活疫苗3.免疫程序：检验合格的试验用山羊以伪狂犬病灭活疫苗和伪狂犬病活疫苗进行多次免疫。4.血清制备每次免疫后一周采血监测免疫后抗体水平的变化情况。最后一次免疫后一周抗体水平达到最高，颈动脉采血致死，分离血清。-20℃冷冻保存，备用。实施例2——伪狂犬病病毒抗血清的检验1.无菌检验：按照中华人民共和国兽药典(中国兽药典委员会，中华人民共和国兽药典，二〇一五年版(三部)，中国农业出版社，2016，以下称《中国兽药典》)规定的方法进行无菌检验或纯粹检验，无菌生长。2.支原体检验：按照《中国兽药典》规定的方法进行支原体检验，无支原体生长。3.中和效价测定按照《中国兽药典》规定的方法进行中和试验测定血清中和200TCID50伪狂犬病病毒Bartha株的中和效价，试验结果见表1。表1本专利技术制备的伪狂犬病病毒特异性血清抗体水平监测结果动物编号1234首免前0000第二次免疫前1:41:41:161:8第三次免疫前1:321:161:641:64第四次免疫前1:1281:641:2561:256第五次免疫前1:10241:2561:10241:1024第六次免疫前1:56231:25061:81921:2818试验结果表明，伪狂犬病病毒抗体在第5次免疫后中和效价达到峰值，适宜在此时间进行大量采血。4.特异性检验：检测口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪细小病毒病、猪圆环病毒病和牛病毒性腹泻/粘膜病抗体，均为阴性，伪狂犬病抗体为阳性；5.外源病毒检验：无外源病毒污染。实施例3——伪狂犬病病毒特异性血清用于伪狂犬病活疫苗鉴别检验和外源病毒检验1.伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)，病毒含量106.0TCID50/头份。2.试验方法：按照《中国兽药典》和《伪狂犬病活疫苗》质量标准(CVP3/2015/HYM/029)进行鉴别检验和外源病毒检验。3.鉴别检验：为确定该血清可用于伪狂犬病活疫苗的鉴别检验，将疫苗稀释为2.0×102.0TCID50/0.1mL的疫苗稀释液，再与该血清以PBS(1/15mol/L，pH7.2)4倍稀释后溶液进行等量混合，37℃下中和90min后，接种细胞置37℃培养。同时设不中和疫苗的对照组，置同条件下培养。观察7日，判定结果。对照组细胞应出现特征性的细胞病变，中和组细胞应无细胞病变。两次试验结果表明，该血清可用于伪狂犬病活疫苗的鉴别检验。4.外源病毒检验为确定该血清可用于伪狂犬病活疫苗的外源病毒检验，按照现行版《中国兽药典》三部进行外源病毒检验，将1ml血清与1头份伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)(病毒含量106.0TCID50/头份)混合后，37℃下中和1小时，分别采用Vero细胞、MDBK细胞和PK-15细胞传代3次培养。每代观察7日，判定结果。中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种伪狂犬病病毒抗血清，其特征在于该伪狂犬病病毒高免血清是利用山羊制备而成；且该高免血清的中和效价高达1:2000倍以上，可用于伪狂犬病病毒活疫苗的外源病毒检验和鉴别检验。

【技术特征摘要】
1.一种伪狂犬病病毒抗血清，其特征在于该伪狂犬病病毒高免血清是利用山羊制备而成；且该高免血清的中和效价高达1:2000倍以上，可用于伪狂犬病病毒活疫苗的外源病毒检验和鉴别检验。2.一种伪狂犬病毒抗血清的制备方法，其特征在于：(1)试验动物：为不含猪病常见病原体的健康山羊；(2)免疫原：猪伪狂犬病灭活疫苗和猪伪狂犬病活疫苗；(3)高免血清的制备：检验合格的试验用山羊以猪伪狂犬病灭活疫苗和猪伪狂犬病活疫苗进行免...

【专利技术属性】
技术研发人员：李翠，赵启祖，王在时，万建青，徐璐，徐嫄，朱元源，邹兴启，张乾义，王琴，郎洪武，夏应菊，蒋卉，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：北京,11