一种作为农药表面活性剂的地衣芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种作为农药表面活性剂的地衣芽孢杆菌及其应用，属于植物保护学科中的生物防治和农药研究与应用领域。本发明专利技术的菌株是从植物根际土壤中分离筛选出来的一株高效生防菌——地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）W10菌株，该菌株在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CGMCC No.14859。本发明专利技术利用黄豆饼粉、玉米淀粉等为基质作为发酵培养基，制备的菌株发酵液菌剂能改善农药的表面张力，降低接触角，具有良好的表面活性剂功能，同时还具有防治植物病害的作用。因此本发明专利技术的发酵液菌剂不仅可作为表面活性剂应用于农药悬浮剂加工制备，而且可以防治病害，显示出广阔的应用前景。

Bacillus licheniformis as pesticide surfactant and its application

The present invention relates to a Bacillus licheniformis and its application, which belongs to the field of biological control and pesticide research and application in plant protection. The strain was isolated from the rhizosphere soil of the plant, which was isolated and selected from the rhizosphere soil of the plant. The strain of Bacillus licheniformis (Bacillus licheniformis) W10 strain was identified as CGMCC No.14859 in the management center of the Chinese common microorganism preservation management center. The invention uses soybean cake powder and corn starch as substrate as fermentation medium. The preparation of strain fermentation agent can improve the surface tension of pesticide, reduce contact angle, have good function of surface active agent, and also have the effect of preventing plant disease. Therefore, the fermentation liquid agent of the invention can not only be used as a surfactants in the preparation of pesticide suspension agent, but also can prevent and cure diseases, showing a broad application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种作为农药表面活性剂的地衣芽孢杆菌及其应用
本专利技术涉及生防细菌发酵培养物的表面活性作用，属于植物保护学科中的生物防治和农药研究与应用领域。具体涉及一种作为农药表面活性剂的地衣芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
芽孢杆菌(Bacillusspp.)作为一类重要的生防菌，可以产生多种抑菌抗菌物质，包括细菌素、细胞壁降解酶类、抗菌蛋白、脂肽类抗生素、聚酮类化合物和多肽类化合物等，具有防治植物病害的潜力，也是生物防治的主要来源菌。目前科研人员筛选生防菌的侧重点是各种抗菌活性物质，但是，生防菌发酵代谢产物种类繁多，除了产生抗菌物质外，还有其他种类物质，包括有功能活性的和无生物活性的。具有防治植物病害的地衣芽孢杆菌的菌株较多，具有生物表面活性功能的地衣芽孢杆菌也有报道，但是，未见作为表面活性剂用于农药加工生产的菌株，也未见采用黄豆饼粉、玉米淀粉等基质发酵培养地衣芽孢杆菌用于农药制剂研制的报道。
技术实现思路
本专利技术为了提高农药制剂的稳定性，便于药剂贮藏运输和使用，提供一种作为农药表面活性剂的地衣芽孢杆菌及其应用，其能使药剂在植物体表较好展布和黏着，充分发挥药效。本专利技术所述的具有表面活性作用的菌株是：一种作为农药表面活性剂的地衣芽孢杆菌，其特征在于，其保藏编号为CGMCCNo.14859，分类命名为地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis，菌株编号为W10。本专利技术公开了地衣芽孢杆菌的发酵液作为农药表面活性剂的应用。本专利技术进一步公开了解地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)W10发酵液作为表面活性剂在农药悬浮剂中的应用，应用方式为：W10发酵液添加到农药原药中，再结合其它添加剂制成农药悬浮剂。发酵液制备方法如下：采用分批发酵法，将W10菌种按2％接种于50mLNA培养基中，在30℃，180r/min条件下培养12h后，按2％将菌种转接于发酵培养基中，发酵培养基制备方法为：黄豆饼粉10.131g，蛋白胨1.126g，玉米淀粉16.894g，葡萄糖2.413g，硫酸铵7.965g，KH2PO40.45g，MgSO40.45g，NaCl4.5g，加蒸馏水定容至1000mL，调pH至7.0；在250r/min，pH7.0条件下培养60h，0-20h时将温度控制在30℃，20-60h时将温度控制为28℃，并分别于培养10h、18h时按10％加入补料，补料制备方法为：葡萄糖10g，蛋白胨5g，加蒸馏水定容至1000mL；发酵完成即获得地衣芽孢杆菌W10发酵液；获得地衣芽孢杆菌W10发酵液后，将其置入离心管中，8000g离心15min，取上清，通过细菌滤器，即得W10发酵滤液。农药剂型为悬浮剂等液体制剂；农药悬浮剂由25.2％嘧菌酯、5％润湿分散剂、10％增稠剂、5％乙二醇、0.2％消泡剂、1％硅酸镁铝、0.5％防腐剂、53.1％地衣芽孢杆菌W10发酵滤液组成，百分比为质量分数。本专利技术还进一步公开地衣芽孢杆菌的发酵液作为防治植物病害的药物的应用。该菌株的表面活性作用与常规表面活性剂作用相当。其能使农药制剂的理化性状非常稳定，有利于药剂贮藏运输和使用，能在植物体表较好展布和黏着，能充分发挥药效。还可弥补常规表面活性剂对人、畜环境产生负面影响、有激素作用且自身降解缓慢，会对环境中的土壤水体造成污染的弊端，该菌可部分替代常规表面活性剂或与常规表面活性剂交替使用，在不影响效果的情况下可以减少常规表面活性剂的使用，减少残留和对环境造成的污染，有助于保证农业生产的安全性，提升作物质量。因此可以用地衣芽孢杆菌W10研发新型绿色的表面活性剂，应用于农药制剂加工。因此，该专利技术及其应用，不仅能够提高农药的防治效用，而且还能推动农业的绿色可持续发展，减少由常规表面活性剂对环境造成的污染。与化学药剂相比，使用W10菌株发酵液作为农药生产中的表面活性剂对环境的刺激性小，自身易于降解。本专利技术的菌株代谢产生的脂肽类化合物，脂肽分子中氨基酸组成的肽链形成亲水基，脂肪烃链形成亲油基，这与化学表面活性剂在分子结构上类似，因此可具有表面活性剂的作用。地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)W10是本专利技术筛选的一株拮抗细菌，具有广谱抗菌性，对多种作物上重要病害，如番茄灰霉病、油菜菌核病、水稻纹枯病、苹果轮纹病、桃褐腐病和枝枯病等都有较好的防治效果，防效与化学农药多菌灵或腐霉利等相当。本专利技术发现W10发酵液具有改善农药药液表面张力的作用，降低接触角，具有良好的表面活性剂功能，因此在农药液剂(如悬浮剂)加工中可以将该菌株发酵液产物作为表面活性剂类助剂进行添加，替代或部分替代常规的有机化学表面活性剂，减少成本和对环境的污染，具有双重作用。且本专利技术的W10菌株防病谱广，也未见防病谱广的相关地衣芽孢杆菌菌株报道。附图说明图1是地衣芽孢杆菌对番茄灰霉病菌的拮抗效果示意图；图2是地衣芽孢杆菌对桃褐腐病菌的拮抗效果示意图；图3是地衣芽孢杆菌对桃枝枯病菌的拮抗效果示意图；图4是地衣芽孢杆菌对苹果轮纹病菌的拮抗效果示意图；图5是地衣芽孢杆菌对苹果炭疽病菌的拮抗效果示意图；图6是添加不同表面活性剂的W10发酵滤液静态接触角示意图，图6中每一行的各小图依序分别对应的表面活性剂；图7是以W10发酵液为表面活性剂的25％嘧菌酯悬浮剂静态接触角大小图；图8是25％嘧菌酯悬浮剂的静态接触角物理测定效果图，A：不含发酵液药剂稀释300倍；B：含发酵液药剂稀释300倍；C：不含发酵液药剂稀释1200倍；D：含发酵液药剂稀释1200倍；本专利技术所述菌株W10于2017年11月06日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，分类命名为地衣芽孢杆菌，拉丁名为：Bacilluslicheniformis，保藏编号为CGMCCNo.14859。具体实施方式以下通过具体实施例对本专利技术作进一步详细说明。(1)地衣芽孢杆菌W10的分离、筛选和鉴定从扬州郊区蔬菜田块采集番茄植株(根部带土)，带回实验室后将根部的浮土抖掉，将仍粘有细土的番茄根剪下，收集起来即为采集的根际土样。土壤微生物的分离采用平板稀释涂布法。将收集的番茄根系剪成4mm左右的小段，称取10g放入盛有90mL无菌水的三角瓶中，160r/min振荡30min，得10-1浓度的土壤稀释液，再依次稀释10-3-10-7浓度梯度的土壤悬液。吸取100μL在NA培养基(蛋白胨10g，牛肉浸膏3g，氯化钠5g，琼脂17-20g，蒸馏水定容至1000mL，调pH7.0-7.2)上涂布，每个梯度3个重复，28℃下培养，24h后开始观察并挑取单菌落纯化。将挑取的单菌落在NB培养液(上述NA培养基中不添加琼脂)中进行培养。在PDA平板中心接种直径为5mm的待测病原真菌菌饼，25℃培养2d。待菌落直径达2cm时，在菌落四周对称点接4个不同的细菌，25℃培养4-5d。选取对病菌具有拮抗作用的细菌进行复筛，在已培养2d的待测病菌菌落四周点接相同细菌，3个重复，设置不接细菌的对照。25℃下培养4-5d后，测量拮抗细菌的抑菌带宽度。挑取有拮抗作用的细菌进行纯化，在细菌的培养液中加15％甘油，于-20℃冷冻保存备用。对有拮抗效果的菌株连续转接多代后按上述方法再测量菌株的抗菌活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种作为农药表面活性剂的地衣芽孢杆菌，其特征在于，其保藏编号为CGMCC No.14859，分类命名为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，菌株编号为W10。

【技术特征摘要】
1.一种作为农药表面活性剂的地衣芽孢杆菌，其特征在于，其保藏编号为CGMCCNo.14859，分类命名为地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis，菌株编号为W10。2.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌的发酵液作为农药表面活性剂的应用。3.根据权利要求2所述的地衣芽孢杆菌的发酵液作为农药表面活性剂的应用，其特征在于，发酵液制备方法如下：采用分批发酵法，将W10菌种按2%接种于50mLNA培养基中，在30℃，180r/min条件下培养12h后，按2%将菌种转接于发酵培养基中，发酵培养基制备方法为：黄豆饼粉10.131g，蛋白胨1.126g，玉米淀粉16.894g，葡萄糖2.413g，硫酸铵7.965g，KH2PO40.45g，MgSO40.45g，NaCl4.5g，加蒸馏水定容至1000mL，调pH至7.0；在250r/min，pH7.0条件下培养60h，0-20h时将温度控制在30℃，20-60h时将温度控制为28℃，并分别于培养10h、18h时按10%加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪兆林，朱薇，李春骁，童蕴慧，金唯新，王友德，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32