一株单孢属菌J3及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株单孢属菌J3及其应用，该菌株已于2017年11月27日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为中国武汉，武汉大学，保藏号为CCTCC M 2017739。本发明专利技术提供的单孢属菌(Brevundimonas naejangsanensis)J3在无机盐培养基中5d对菌核净(50.0mg/L)的降解率达到51.65％，7d菌核净降解60.27％。这表明该菌株能够高效降解菌核净，可有效修复菌核净污染的土壤和水体，解决农产品生产中农药残留超标问题及环境污染问题，保护生态环境和人类健康。

A strain of monospora J3 and its application

The invention discloses a strain of monospora J3 and its application. The strain has been preserved in the Chinese typical culture preservation Center (CCTCC) in November 27, 2017, and the address is Wuhan, China, Wuhan University, and the preservation number is CCTCC M 2017739. The biodegradation rate of 5D to sclerotium (50.0mg/L) in the inorganic salt medium was 51.65%, and the net degradation of 7D sclerotium was 60.27% in the inorganic salt medium provided by this invention in the inorganic salt medium. It shows that the strain can effectively degrade the net of Sclerotinia, and can effectively repair the net polluted soil and water of the sclerotium, solve the problem of excessive pesticide residues and environmental pollution in the production of agricultural products, and protect the ecological environment and human health.

【技术实现步骤摘要】
一株单孢属菌J3及其应用
本专利技术涉及微生物
，尤其是涉及一株单孢属菌J3及其应用。技术背景菌核净(Dimetachlone)，又称纹枯利，分子式C10H7Cl2NO2，其相对分子质量244.07，化学名为：N-(3,5-二氯苯基)丁二酰亚胺。菌核净纯品为白色鳞片状结晶，原药为浅黄色粉末状。菌核净的熔点在137.5-139℃范围内，易溶于四氢呋喃、丙酮、二甲基亚砜等有机溶剂，可溶于甲醇、乙醇，难溶于正己烷、石油醚，几乎不溶于水。因其在常温下贮藏时有效成分的含量变化很小，对酸、热较为稳定，但遇碱及光照条件下则相对不稳定，易分解，故应贮藏于遮光阴凉的地方，且避免与强碱性药物混用。菌核净为丁二酰亚胺有机杂环类强效杀菌剂，对烟草赤星病、油菜和芹菜菌核病等病害具有良好的防治效果，在我国应用范围广泛。由于菌核净对哺乳动物内分泌具有干扰作用，对人体肾脏也有毒害作用，该杀菌剂在环境中，尤其是农产品中的残留已引起人们的高度关注。因此，消除或减少菌核净在环境及农产品中的残留已引起科研工作者的高度重视，已成为一个重要的研究课题。最近几年来，生物修复(Bioremediation)理论渐渐成为大家关注的焦点，生物修复技术因其操作简便、经济实用、环境友好等优点已成为处理环境中有机污染物的有效措施。国际上已有利用生物技术成功治理石油污染的先例。近年来，研究利用生物修复技术治理农药残留污染已成为研究热点。目前许多发达国家和大公司都投入巨资以从事农药残留生物降解制剂的研究和开发，如美国BCI公司、美国工程服务生物修复公司已经成功将降解制剂产品规模化生产，国内的北京佳农新贸易发展有限公司已经成功生产“比亚”生物降解制剂可以用于去除有机磷类农药残留。但是，由于农药结构多样性，而微生物降解农药往往具有很强的针对性，导致现有降解菌资源库远不能满足农药残留污染生物修复的实际需求。目前还没有专门针对菌核净的降解微生物及其相关降解制剂产品。因此，有针对性的筛选有效降解菌株，研究微生物修复剂，通过人工接种加速环境中杀虫剂的降解，消除残留药害是一项十分必要的工作和切实可行的途径。
技术实现思路
本专利技术的目的：提供一株单孢属菌J3及含有该菌株的生物菌剂的应用。本专利技术的另一目的是提供该菌株在降解菌核净农药残留中的应用。本专利技术是这样实现的：单孢属菌J3，其保藏号为CCTCCM2017739。该菌株16SrDNA序列如SEQIDNO.1所示。含有该菌株单孢属菌J3生物菌剂，即将单孢属菌J3的菌株作为活体成分，制备获得的液体菌剂。含有该菌株单孢属菌J3生物菌剂，即将单孢属菌J3的菌株作为活体成分，制备获得的固体菌剂。单孢属菌J3在降解菌核净农药残留中的应用。采用单孢属菌J3生产降解菌液体制剂的方法，将单孢属菌J3的菌株作为活体成分，制备获得降解菌核净的液体菌剂。采用单孢属菌J3生产降解菌液体固体制剂的方法，将单孢属菌J3的菌株作为活体成分，制备获得降解菌核净的固体菌剂。本专利技术所提供的细菌是单孢属菌(Brevundimonasnaejangsanensis)J3，所述菌株已于2017年11月27日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为中国武汉，武汉大学，保藏号为CCTCCM2017739。本专利技术的这种菌株经形态学特征、生理生化特性、16SrDNA序列分析鉴定为单孢属菌(Brevundimonasnaejangsanensis)，该菌株在牛肉膏蛋白胨固体培养基中生长迅速，呈细密的圆形或椭圆形，质地软，稍有光泽的淡黄色菌落，不粘稠易挑取。通过生理生化特性测定，显示该菌株对常见的抗生素，如阿米卡星、亚胺培南、左氧氟沙星、美诺培南、哌拉西林、复方新诺明、头孢噻肟、头孢他啶表现为敏感；降解菌对头孢吡肟、环丙沙星及氯霉素表现为中度敏感；对氨曲南、头孢唑啉、庆大霉素则表现为不敏感。该菌株能直接利用L-谷氨酸、精氨酸、L-亮氨酸，对其它碳源则不能直接利用。本专利技术筛选获得一株单孢属菌(Brevundimonasnaejangsanensis)J3，该菌株可在短时间内有效降解菌核净残留，保护生态环境和人类健康，且使用方便，成本低，5d菌核净去除率为51.65％，7d菌核净去除率达60.27％，可用于修复菌核净污染的水体、土壤等自然环境，解决农业生产中杀虫剂残留超标问题及环境污染问题，保护生态环境和人类健康。使用单孢属菌J3生产制备得到的菌剂，具有生产成本低，使用方便，去除效果好等优点，适合治理水体和土壤等环境中菌核净造成的污染，具有非常重要的理论和应用价值。附图说明图1为单孢属菌J3的在平板培养基的形态图；图2为菌核净标准品色谱图；图3为单孢属菌J3对菌核净(50mg/L)的降解率；图4为单孢属菌J3固体制剂。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，但不作为对本专利技术的任何限制。实施例1：单孢属菌J3的分离与鉴定1)单孢属菌J3的分离与筛选称取长期受菌核净污染的土壤10.0g置于250mL三角瓶中，并加入100mL的灭菌无机盐培养基，添加农药标样至25mg/L，置于摇床，在30℃，150rpm的条件下震荡培养5d。从培养液中取0.5mL上清液于新的含25mg/L农药的无机盐培养液中，在同样条件下培养至培养液变浑浊，再取上清液按10％接种量接种于新的培养液，重复以上操作，并逐级提高农药的浓度至1000mg/L(农药浓度分别为25mg/L、50mg/L、75mg/L、100mg/L、1000mg/L)，得到富集降解菌液。富集培养结束后，取培养体积的20％，10000rpm离心5min收集菌体，然后分别转接到无机盐基础培养基(MSM)中，添加菌核净至浓度为100mg/L，相同培养条件下再分别驯化两周。在固体培养基中加入菌核净标准液，使其浓度达到100mg/L。将驯化后的培养液用无菌水逐级稀释，取稀释等级为10-2、10-3、10-4的培养液于含菌核净的固体平板中均匀涂布，25℃培养。待25℃条件下恒温倒置培养的无机盐培养基上的菌落长出，选择菌落疏密适当的平板进行观察，选取颜色不同、边缘不同、光滑程度不同的单菌落在固体培养基上划线反复纯化，得到传代稳定的单菌落后，观察其生长情况，选择生长良好的菌种分别编号，保存、备用。经过大量的富集培养，分离得到一株能够在含菌核净100mg/L的分离培养基上以菌核净为唯一碳源的无机盐培养基中能够生长的菌株，并使用气相色谱法验证其降解效果。将该菌株命名为降解菌J3，在试验时间范围内，该菌株能够在纯培养条件下，将初始浓度50mg/L的菌核净在5d降解率51.65％，7d菌核净被降解了60.27％。Agilent6890N气相色谱仪，检测器：带μECD；色谱柱：HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)；进样口温度：260℃；检测器温度：280℃；柱箱温度：程序升温方式，初始温度200℃，保持1min，以10℃/min升至270℃，载气为高纯氮气，流速1.2mL/min；分流比为10:1；进样量：1μL。在上述条件下，以菌核净标准溶液浓度(x)为横坐标，峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线。线性方程为y＝991.37x+11.136，相关系数为：R2＝0.9998，在此条件下菌核净的保留时间为7.018min(图2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株单孢属菌J3，其特征在于：其保藏号为CCTCC M 2017739。

【技术特征摘要】
1.一株单孢属菌J3，其特征在于：其保藏号为CCTCCM2017739。2.根据权利要求1所述的一株单孢属菌J3，其特征在于：该菌株16SrDNA序列如SEDIDNO.1所示。3.含有权利要求1所述的单孢属菌J3的生物液体菌剂。4.含有权利要求1所述的单孢属菌J3的生物固体菌剂。5.含有权利要求1所述的单...

【专利技术属性】
技术研发人员：代园凤，吴小毛，黄文源，张承，谢颖，陈雪，喻会平，李熙全，代飞，龙友华，李荣玉，尹显慧，杨再福，黎晓茜，刘阿丽，陈媞，
申请(专利权)人：贵州省烟草公司毕节市公司，贵州省烟草公司安顺市公司，贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52