一株产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株及其筛选方法和应用技术

本发明专利技术公开了一株产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株及其筛选方法和应用，属于微生物技术领域。该菌株的名称为芽孢杆菌ND‑6(Bacillus sp.ND‑6)，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15227，保藏日期为2018年1月16日。本发明专利技术还公开了上述环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株的筛选方法、利用上述产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株生产环糊精葡萄糖基转移酶的方法，以及该环糊精葡萄糖基转移酶的应用。本发明专利技术的罗汉果内生菌菌株，可以产生环糊精葡萄糖基转移酶，且该环糊精葡萄糖基转移酶的酶活高(10660‑11200U/mL)。

A strain of cyclodextrin glucotransferase producing sirosa Grosvenor endophyte and its screening method and Application

The invention discloses an internal bacterial strain producing cyclodextrin glucotransferase and sieving method and application thereof, belonging to the field of microorganism technology. The name of the strain was Bacillus ND 6 (Bacillus sp.ND 6), and the preservation unit was the common microorganism center of the Chinese microbe preservation management committee, and the preservation number was CGMCC No.15227, and the preservation date was January 16, 2018. The invention also discloses a screening method for the endophytic strain of the cyclodextrin glucose based glucosyl transferase, and the method for the production of cyclodextrin glucotransferase by using the endophytic strain of the cyclodextrin glucosyl transferase, and the application of the cyclodextrin glucose based transferase. The endophytic strain of the present invention can produce cyclodextrin glucose based glucotransferase, and the cyclodextrin glucotransferase has high enzyme activity (10660 11200U/mL).

【技术实现步骤摘要】
一株产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株及其筛选方法和应用
本专利技术涉及一株产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株及其筛选方法和应用，属于微生物

技术介绍
罗汉果[Siraitiagrosvenorii(Swingle)C.Jeffrey]为葫芦科罗汉果属的多年生宿根茎性藤本植物罗汉果的果实，是我国特有植物，生长于广西、广东、江西、湖南及贵州等地，其中广西桂林市永福县是罗汉果发源地和主产地。罗汉果果实富含多种人体必需氨基酸、微量元素以及多种维生素等，此外含有黄酮、多糖、甜苷和多酚等活性成分。现代药理研究证实，罗汉果具有多种药理作用如镇咳平喘、润肠通便、降血糖、抗氧化和提高免疫力等，具有良好的保健价值。现代研究表明，罗汉果对各种疾病起主要效果的就是果实中含有比蔗糖甜300倍的强甜物质罗汉果甜苷V，但是它只占三萜总苷的30％-40％，含量低，致使甜苷V生产和使用成本高，应用范围受到严重制约。研究证实，罗汉果甜苷V是随着成熟度的增加由低苷类转化而来的，未成熟的嫩果中主要含有罗汉果苦苷A(mogrosideⅡE)，此外还有无味的罗汉果苷Ⅲ。而在化学结构上，罗汉果苦味皂苷与甜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株，其特征在于，该菌株的名称为芽孢杆菌ND‑6(Bacillus sp.ND‑6)，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15227，保藏日期为2018年1月16日。

【技术特征摘要】
1.一株产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株，其特征在于，该菌株的名称为芽孢杆菌ND-6(Bacillussp.ND-6)，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15227，保藏日期为2018年1月16日。2.一种如权利要求1所述的产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：从罗汉果的根、茎和果实中分离、纯化出罗汉果内生菌菌株，接种于斜面培养基上，4℃保藏，备用；步骤2：初筛从步骤1的斜面培养基中，挑取罗汉果内生菌菌种，稀释涂布接种于第一筛选培养基平板上，30℃培养2-5d后，挑出有黄色透明圈的菌落并接种到液体发酵培养基中，于30℃、160r/min摇瓶培养2-3d，离心，取上清液，得到发酵液；各取200μL发酵液，分别滴加至已打孔的新的第一筛选培养基平板上和第二筛选培养基平板上，40℃水浴反应30min，分别计算黄色透明圈的直径与洞孔直径的比值、白色透明圈的直径与洞孔直径的比值，分别选出比值最大的菌株、以及比值较大的3-5株菌株，作为初筛菌株；步骤3：复筛将步骤2得到的初筛菌株的发酵液进行酶活测定，选出酶活最高的菌株、以及酶活次高的菌株，作为复筛的菌株；步骤4：再复筛将步骤3得到的复筛菌株，接种到新的液体发酵培养基中，于37℃、160r/min摇瓶培养2-3d，4000r/min离心10min，取上清液，得到含有酶的发酵液，进行酶活测定，最后对比步骤3复筛的结果，选出酶活高且稳定的菌株，即得到产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株。3.根据权利要求2所述的一株产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株的筛选方法，其特征在于，步骤1中，所述斜面培养基为可溶性淀粉10g、蛋白胨5g、酵母浸膏5g、K2HPO40.2g、MgSO4·7H2O0.2g、Na2CO30.1g、琼脂20g和水1L，自然pH值。4.根据权利要求2所述的一株产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株的筛选方法，其特征在于，步骤2中，所述第一筛选培养基由可溶性淀粉10g、蛋白胨5g、酵母浸膏10g、K2HPO40.2g、MgSO4·7H2O0.2g、Na2CO30.1g、酚酞0.3g、甲基橙0.1g、琼脂20g和水1L组成，混合均匀后，自然pH值；步骤2和步骤4中，所述液体发酵培养基均由可溶性淀粉10g、蛋白胨5g、酵母浸膏12g、K2HPO40.2g、MgSO4·7H2O0.2g、Na2CO30.1g和水1L组成，混合均匀后，自然pH值；步骤2中，所述第二筛选培养基由如下方法制备得到：称取已去皮马铃薯200g,切块，煮沸30min，四层纱布过滤，加入蔗糖20g、琼脂20g和可溶性淀粉20g，水定容至1L，自然pH值。5.一种利用权利要求1所述的产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果内生菌菌株生产环糊精葡萄糖基转移酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：发酵产酶步骤1.1：斜面菌种活化斜面培养基由可溶性淀粉10g、蛋白胨5g、酵母浸膏5g、K2HPO40.2g、MgSO4·7H2O0.2g、Na2CO30.1g、琼脂20g和水1L组成，自然pH值；将上述产环糊精葡萄糖基转移酶的罗汉果...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丰丽，张昌志，范彩琴，龙楚媚，付强，陈静，
申请(专利权)人：广西师范大学，
类型：发明
国别省市：广西,45