抗病原物质的浓度的测定方法技术

本发明专利技术提供了一种抗病原物质的浓度的测定方法，涉及生物技术领域，本发明专利技术提供的抗病原物质的浓度的测定方法，将抗病原物质的标准品和待测样品分别与靶向病原共培养后，检测靶向病原的存活率，根据待测样品中的靶向病原存活率对应标准品中的靶向病原存活率，得出抗病原物质的待测样品的浓度。具有不受样品中杂蛋白和核酸的影响，误差小，而且灵敏度高，最低检测限可低至10pg/mL的优点。同时，该测定方法实验操作简单，用时短，可以在数小时内完成。并且，实验过程只需要靶向病原培养步骤，不需要购买试剂盒或者其他生化试剂，安全性高，不会给实验操作人员带来安全隐患。

【技术实现步骤摘要】
抗病原物质的浓度的测定方法
本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种抗病原物质的浓度的测定方法。
技术介绍
1897年，PaulEhrlich首次提出靶向病原相关抗原的抗体可以用来治疗疾病。抗体药物在治疗疾病上具有广阔的应用前景，成功用于治疗肿瘤、自身免疫疾病和感染性疾病等。上世纪60年代，众多肿瘤组织/细胞特异性抗原被发现，肿瘤相关抗原成为肿瘤治疗的研究热点，也成为抗肿瘤抗体药物发开的重要靶点。抗体药物质量控制是研发和生产环节不可忽视的部分，而抗体浓度测定，是质量控制中最重要的环节之一。目前对于抗体药物而言，浓度的测定方法主要有以下几种：酶联免疫吸附法(ELASA)、紫外吸收法、蛋白A亲和高效液相色谱法(proteinA-HPLC)等。其中，ELISA指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。ELISA方法灵敏度高，对仪器要求低，可测定的样本广泛(包括血清、分泌物、排泄物等)，但是实验用时较长，操作复杂，方法误差大，线性范围窄，适合用于微量样品检测。紫外吸收法是指蛋白质分子中某些基团含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收峰在280nm处，而且其吸光度和蛋白质含量成正比。紫外吸收法检测样品快速、灵敏，但需要蛋白纯度较高，检测线性范围窄，且杂蛋白和核酸的存在会干扰检测结果，对样品纯度和样品种类有要求。蛋白A亲和液相色谱法使通过蛋白A结合抗体Fc段，在低pH值或者高pH值条件下洗脱，从而获得抗体浓度。蛋白A亲和液相色谱法可特异性检测抗体含量，结果准确，线性范围广，但检测用时长，对样品基质要求比较高，较适合用于抗体纯化样品和制剂样品的含量测定。因此，开发一种实验用时短、操作简单、误差小、对样品纯度和样品种类无要求的浓度检测方法，尤为重要。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗病原物质的浓度的测定方法，以缓解现有技术中存在的抗病原物质的浓度的测定方法实验用时长、操作复杂、易受干扰误差大、对样品纯度和样品种类要求较高的技术问题。本专利技术提供了一种抗病原物质的浓度的测定方法，所述测定方法包括：将抗病原物质的标准品和待测样品分别与靶向病原共培养1-12小时，检测所述靶向病原的存活率，根据所述待测样品中的靶向病原存活率对应所述标准品中的靶向病原存活率，得出所述抗病原物质的待测样品的浓度。进一步地，所述抗病原物质包括抗肿瘤物质或抗微生物物质，所述靶向病原包括肿瘤或微生物。进一步地，所述抗病原物质包括抗病原抗体或抗病原小分子药物。进一步地，所述抗病原抗体为双靶向抗病原抗体。进一步地，当所述抗病原物质为抗病原抗体时，所述共培养包括将所述抗病原抗体的标准品和T细胞、抗病原物质的待测样品和T细胞分别与靶向病原共培养。进一步地，所述靶向病原与所述T细胞的数量比为1:1-1:15。进一步地，所述靶向病原带有荧光标记，通过测定所述靶向病原的荧光值检测所述靶向病原的存活率。进一步地，所述荧光标记为荧光素酶标记；优选地，所述靶向病原稳定转染荧光素酶基因。进一步地，所述抗病原物质的标准品为经过梯度稀释的标准品。进一步地，根据所述梯度稀释的标准品的浓度对应的荧光值建立标准曲线。本专利技术提供的抗病原物质的浓度的测定方法，将抗病原物质的标准品和待测样品分别与靶向病原共培养后，检测靶向病原的存活率，根据待测样品中的靶向病原存活率对应标准品中的靶向病原存活率，得出抗病原物质的待测样品的浓度。该方法是基于抗病原物质对靶向病原的杀伤特性，通过靶向病原的存活率推算待测样品中抗体的浓度，具有不受样品中杂蛋白和核酸的影响，误差小，而且灵敏度高，最低检测限可低至10pg/mL的优点。同时，该测定方法实验操作简单，用时短，可以在数小时内完成。并且，实验过程只需要靶向病原培养步骤，不需要购买试剂盒或者其他生化试剂，安全性高，不会给实验操作人员带来安全隐患。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例1提供的梯度稀释的抗CD3/CD20样品标准品的荧光检测结果图；图2为本专利技术实施例1提供的梯度稀释的抗CD3/CD20样品标准品的标准曲线；图3为本专利技术实施例1提供的作用不同时间的待测样品的荧光检测结果图；图4为本专利技术实施例1提供的不同时间的小鼠血清内抗CD3/CD20抗体浓度变化曲线；图5为本专利技术实施例2提供的梯度稀释的抗CD3/EpCAM样品标准品的荧光检测结果图；图6为本专利技术实施例2提供的梯度稀释的抗CD3/EpCAM样品标准品的标准曲线；图7为本专利技术实施例2提供的作用不同时间的待测样品的荧光检测结果图；图8为本专利技术实施例2提供的不同时间的小鼠血清内抗CD3/EpCAM抗体浓度变化曲线；图9为本专利技术实施例3提供的梯度稀释的抗HU多克隆抗体标准品的标准曲线；图10为本专利技术实施例3提供的不同时间的抗HU多克隆抗体浓度变化曲线；图11为本专利技术实施例4提供的梯度稀释的人免疫球蛋白甲肝抗体标准品的标准曲线；图12为本专利技术实施例4提供的不同时间的人免疫球蛋白甲肝抗体浓度变化曲线；图13为本专利技术实施例5提供的梯度稀释的四氢异喹啉标准品的标准曲线；图14为本专利技术实施例5提供的不同时间的四氢异喹啉浓度变化曲线。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。根据本专利技术的一个方面，提供了一种抗病原物质的浓度的测定方法，该方法包括：将抗病原物质的标准品和待测样品分别与靶向病原共培养1-12小时，检测靶向病原的存活率，根据待测样品中的靶向病原存活率对应标准品中的靶向病原存活率，得出抗病原物质的待测样品的浓度。本专利技术提供的抗病原物质的浓度的测定方法，是基于抗病原物质对靶向病原的杀伤特性，当待测样品中的靶向病原存活率与标准品中的靶向病原存活率相同时，说明待测样品的浓度与标准品的浓度相同，即通过已知的标准品的浓度对应得出待测样品的浓度。其中，靶向病原为抗病原物质能够特异性杀伤、杀灭的病原，或者为抗病原物质能够特异性抑制其生长繁殖的病原。该方法不受待测样品中其他成分的影响，检测范围广，待测样品例如可以为，但不限于抗病原物质的水溶液、盐溶液、细胞培养基、微生物培养基、体液、分泌物或排泄物。只要待测样品中不含有影响靶向病原存活率、能够特异性介导靶向病原凋亡的成分，都可以用此方法进行的抗体浓度测定。同时，该方法灵敏度高，检测限最低为10pg/mL，可根据样品浓度调节检测范围，对高浓度和低浓度样品均测定准确，误差小。并且，该测定方法实验操作简单，用时短，可以在数小时内完成。实验过程只需要病原培养步骤，不需要购买试剂盒或者其他生化试剂，安全性高，不会给实验操作人员带来安全隐患。其中，共培养的时间可根据抗病原物质的待测样品对靶向病原的杀伤强度进行调整，具有方法灵活，普适性广的优点。共培养的时间本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗病原物质的浓度的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括：将抗病原物质的标准品和待测样品分别与靶向病原共培养1‑12小时，检测所述靶向病原的存活率，根据所述待测样品中的靶向病原存活率对应所述标准品中的靶向病原存活率，得出所述抗病原物质的待测样品的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种抗病原物质的浓度的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括：将抗病原物质的标准品和待测样品分别与靶向病原共培养1-12小时，检测所述靶向病原的存活率，根据所述待测样品中的靶向病原存活率对应所述标准品中的靶向病原存活率，得出所述抗病原物质的待测样品的浓度。2.根据权利要求1所述的抗病原物质的浓度的测定方法，其特征在于，所述抗病原物质包括抗肿瘤物质或抗微生物物质，所述靶向病原包括肿瘤或微生物。3.根据权利要求1所述的抗病原物质的浓度的测定方法，其特征在于，所述抗病原物质包括抗病原抗体或抗病原小分子药物。4.根据权利要求3所述的抗病原物质的浓度的测定方法，其特征在于，所述抗病原抗体为双靶向抗病原抗体。5.根据权利要求1所述的抗病原物质的浓度的测定方法，其特征在于，当所述抗病原物质为抗病原抗体时，所述共培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵静，陈国创，庞小娟，何成宜，陈志英，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44