一种培养基中菌体浓度的测定方法技术

本发明专利技术属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种复合培养基中测定菌体浓度的改进方法。该方法包括发酵液保温、酶解、TCA萃取、吸光度测定、计算等步骤。本发明专利技术改进点主要体现在：该方法通过对发酵液的适当酶解处理，较好避免了从培养基中提取菌体核酸时固体成分中如黄豆粉、花生粉等物料中所含核酸或类似物的干扰，可以较为准确和充分的提取发酵液中菌体的核酸，从而更为真实地反映发酵液中菌体量，从而为更好为发酵生产提供参考和指导，表现出较好地实用价值和推广应用意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物发酵
，具体涉及一种测定复合培养基中菌体浓度的改进的方法。
技术介绍
菌体浓度的测定是反映微生物生长代谢情况的一项重要指标，需要较为准确的数据才能较好控制各项生产流程。现有工业化微生物发酵过程中，由于经常使用含有大量固休成分的发酵培养基，如黄豆饼粉、花生饼粉等，而这些固体成分与菌体混在一起，使发酵液中菌体浓度的测定成为一个复杂而又困难的问题，长期以来一直悬而未决。目前大多数抗生素工厂测定发酵液菌体浓度时，一般均是采用装量体积法（细胞堆积容积测量法，离心压缩细胞体积法，ThePacked-CellvolumeMethod）。但实际使用过程中，这种方法受发酵液中固体原料成分的影响较大，而且在菌体生长稳定期使用该方法时，所测菌体浓度值的增加主要是一些脂类及次级代谢产物合成的结果，并不能真正代表菌体浓度的变化。因而装量体积法测得的数值是菌体浓度及固体培养基成分两个变量互相加合的结果，并不能反应真正的菌体浓度。并且，使用该方法测定的数据在整个发酵过程中无明本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种培养基中菌体浓度的测定方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：（1）取待测发酵液，将发酵液在45℃~50℃下保温20~40min；然后加入纤维素酶和果胶酶，以对发酵液进行酶解；所述纤维素酶和果胶酶的总加入量为发酵液质量的2%~4%；以质量比计，纤维素酶︰果胶酶=1:1.5~2.0，其中纤维素酶酶活≥25万U/g，果胶酶酶活≥10万U/g；酶解温度控制在35℃~50℃，酶解时间≥1h，但不超过5h；（2）将步骤（1）中酶解完成后的发酵液离心，弃上清，保留沉淀物；（3）向步骤（2）的沉淀物中加入2℃~4℃的5% 体积分数的TCA 溶液，洗涤沉淀物，离心，弃上清；重复此步骤一次；TCA溶液与步...

【技术特征摘要】
1.一种培养基中菌体浓度的测定方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：
（1）取待测发酵液，将发酵液在45℃~50℃下保温20~40min；然后加入纤维素酶和果胶
酶，以对发酵液进行酶解；
所述纤维素酶和果胶酶的总加入量为发酵液质量的2%~4%；
以质量比计，纤维素酶︰果胶酶=1:1.5~2.0，其中纤维素酶酶活≥25万U/g，果胶酶酶活
≥10万U/g；
酶解温度控制在35℃~50℃，酶解时间≥1h，但不超过5h；
（2）将步骤（1）中酶解完成后的发酵液离心，弃上清，保留沉淀物；
（3）向步骤（2）的沉淀物中加入2℃~4℃的5%体积分数的TCA溶液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李大攀，李书至，常坤，郭双，李俊，陈浩然，李冰，
申请(专利权)人：驻马店华中正大有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41