The invention belongs to the technical field of gene extraction, discloses a mosquito foot sample DNA extraction method and system, method of mosquito foot sample DNA extraction method using Chelex 100 solution and protease K binding for the extraction of trace DNA single mosquito foot; including: reagent adding, sample processing, cracking. The results show that the method as compared to trace DNA extraction kit of the invention and trace organization in the past, this method is more simple, fast and cheap, and the method for mosquito specimens are kept low requirements, important method can be used as mosquito molecular biology invention to obtain DNA template, reducing dependence on mosquitoes; only enough to influence not for the rest of the DNA extraction to carry out morphological method, can be used as an important method for extraction of trace DNA sample analysis of mosquitoes in molecular biology, also for the extraction of other insects and provide a theoretical basis for trace DNA.
【技术实现步骤摘要】
一种蚊虫足样本DNA提取方法及系统
本专利技术属于基因提取
,尤其涉及一种蚊虫足样本DNA提取方法及系统。
技术介绍
蚊科(Culicidae)昆虫是最重要的医学昆虫类群,它能传播疟疾、登革热、流行性乙型脑炎等多种传染病。蚊媒病是人类健康的主要威胁,每年全球有7亿人受感染,其中有上百万人死亡。世界卫生组织(WHO)估计2015年有2.14亿人感染疟疾,43.8万人因疟疾死亡,每年约0.67~1.36亿人感染登革热。目前,疟疾仍是中国主要的公共健康问题。近些年来,尽管疟疾病例明显减少,但输入性恶性疟疾病例逐年增多。登革热正在成为中国人类健康新的威胁,例如:2014年7—10月在广东爆发登革热,病例达到44497例。蚊虫分子生物学专利技术是蚊虫控制措施专利技术的基础,而这些专利技术往往需要使用大量的蚊虫微量样本提取DNA。蚊虫存在大量隐存种,因此蚊虫分类学者不仅要做蚊虫形态学鉴定,还需要进一步的分子鉴定。传统的分子鉴定使用整只蚊虫提取DNA,不仅破坏稀少的样本,而且不利于后续的分子数据与形态特征对应。因此,急需探索一个高效的、微量组织样本的DNA提取技术。另外在功能基因组的专利技术方面,往往需要专利技术不同组织样本的基因表达,由于蚊虫个体小,组织样本不易获得,同样也急需微量组织样本的DNA提取技术。Chelex-100是一种螯合型离子交换树脂。它是由苯乙烯和苯乙二烯组成的聚合物,可以与二价金属离子螯合,高选择性地去除样品和缓冲液中的金属离子,从而避免样品中存在的金属离子在高温和低离子强度溶液中作为催化剂使DNA降解。Chelex-100悬液在碱性和100 ...
【技术保护点】
一种蚊虫足样本DNA提取方法,其特征在于,所述蚊虫足样本DNA提取方法采用Chelex‑100溶液和蛋白酶K结合的方法用于单只蚊虫足的微量DNA的提取;具体包括:试剂添加:将枪头用剪刀剪去尖部,取Chelex‑100溶液加入到EP管中,另取2μL蛋白酶K加入到所述EP管中;样品处理:取蚊虫的单个后足或中足置于混有Chelex‑100溶液和蛋白酶K的EP管中,并用枪头或研磨棒将整根蚊腿捣碎后,涡旋震荡,并离心混匀;裂解:将经过处理的样品置于恒温水浴锅中水浴,然后升温水浴,最后以离心,取上清液作为所提取的基因组DNA模板。
【技术特征摘要】
1.一种蚊虫足样本DNA提取方法,其特征在于,所述蚊虫足样本DNA提取方法采用Chelex-100溶液和蛋白酶K结合的方法用于单只蚊虫足的微量DNA的提取;具体包括:试剂添加:将枪头用剪刀剪去尖部,取Chelex-100溶液加入到EP管中,另取2μL蛋白酶K加入到所述EP管中;样品处理:取蚊虫的单个后足或中足置于混有Chelex-100溶液和蛋白酶K的EP管中,并用枪头或研磨棒将整根蚊腿捣碎后,涡旋震荡,并离心混匀;裂解:将经过处理的样品置于恒温水浴锅中水浴,然后升温水浴,最后以离心,取上清液作为所提取的基因组DNA模板。2.如权利要求1所述的蚊虫足样本DNA提取方法,其特征在于,试剂添加中,具体包括:将100μL的枪...
【专利技术属性】
技术研发人员:闫振天,陈斌,司风玲,何正波,付文博,鲜鹏杰,
申请(专利权)人:重庆师范大学,
类型:发明
国别省市:重庆,50
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