一种软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种软海绵酸毒素分子印迹‑量子点聚合物的制备方法及应用，特点制备方法包括以下步骤：以软海绵酸为模板分子，加入量子点荧光纳米材料，在交联剂正硅酸乙酯和功能单体存在条件下，引发聚合后，采用超声辅助萃取法除去所得聚合物中模板分子，即获得软海绵酸毒素分子印迹‑量子点聚合物；应用方法为将样品提取液上样至软海绵酸Spin固相萃取小柱，经离心后收集洗脱液，过0.22μm滤膜，即可采用LC‑MS/MS测定软海绵酸毒素的含量，优点是具有灵敏度高、稳定好、选择性高，方法简单、操作方便，达到简单、高效实现贝类样品中软海绵酸贝类毒素的选择性分离、纯化和富集的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的制备方法及应用
本专利技术涉及分析化学、材料科学
，尤其是涉及一种软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的制备方法及应用。
技术介绍
软海绵酸(OkadaicAcid，OA)是一类长链脂肪酸，属于聚醚类毒素。1976年日本发生因食用紫贻贝导致中毒，中毒主要以腹泻为主，故称为腹泻性贝类毒素（DSP），但大田软海绵酸毒性长效，并且有强烈的致癌性，应当引起足够重视。目前，美国、加拿大和大多数欧美国家对鲜贝中PSP的最高限量为80μg/100g，加拿大、日本英国等对DSP在贝类食用肉要求不超过20μg/100g。在所有的海洋毒素中，OA的分布范围最广，发病率最高，OA毒素能够导致中毒者出现腹泻、腹痛、呕吐等中毒症状，其作用机制复杂，通过激发消化道细胞中cAMP系统导致水泻发生。随着细胞内cAMP的升高，依赖cAMP的蛋白激酶随之而被激活，蛋白质磷酸化，引起细胞抑制对钠的正常吸收，而且大量分泌水、氯及碳酸盐，从而导致腹泻。另外，OA毒素还具有促肿瘤作用和遗传毒性，可导致DNA加合物的形成。因此，加强对OA毒素的检测，可有效保障水产品安全及其对人类健康的威胁。目前，OA毒素的检测方法主要有气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）、液质联用法（LC-MS/MS）、气质联用法（GC-MS/MS）等。其中，气相色谱法可用于分离和测定OA系列的毒素，而液质联用技术不需要衍生化和复杂的前处理就能够对多组分的毒素进行很好的分离，几乎可以分析所有的贝毒。虽然仪器检测法通常有较高的灵敏度，但其对前处理要求较高，设备昂贵，且对操作人员要求高。因此，开发新型样品前处理方法对提高检测效率具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种具有灵敏度高、稳定好、选择性高，方法简单、操作方便的软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的制备方法，其解决的另一技术问题为将其作为Spin固相萃取小柱吸附材料，达到简单、高效实现贝类样品中软海绵酸贝类毒素的选择性分离、纯化和富集的目的。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的制备方法，包括以下步骤：以软海绵酸为模板分子，加入量子点荧光纳米材料，在交联剂正硅酸乙酯（TEOS）和功能单体3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）或者甲基丙烯酰氧丙基三(三甲基硅氧烷基)硅烷（MPTES）存在条件下，引发聚合后，采用超声辅助萃取法除去所得聚合物中模板分子，即获得可特异识别软海绵酸毒素的软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物（MIP-QDs）。具体步骤如下：（1）将7.5mL环己烷与1.8mLTritonX-100混合搅拌15min后，量子点荧光纳米材料QDs500μg、正硅酸乙酯（TEOS）50μL和氨水100μL，搅拌2h，最后加入浓度为1μg/mL的软海绵酸毒素溶液156μL，功能单体3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）或者甲基丙烯酰氧丙基三(三甲基硅氧烷基)硅烷（MPTES）22.8μL，搅拌聚合反应12h；（2）加入10mL丙酮待沉淀后离心弃上清液，加入6mL双蒸水分散后离心弃上清液，加入5mL乙醇/乙腈溶液，超声分散均匀静置40min后离心；（3）重复步骤（2）直到完全除去软海绵酸毒素为止，即获得可特异识别软海绵酸毒素的软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物（MIP-QDs）。所述的乙醇/乙腈溶液中乙醇与乙腈的混合体积比为8：2。所述的量子点荧光纳米材料为CdSe/ZnS，粒径介于2.5nm-6nm之间。上述软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的应用，利用软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物检测软海绵酸的含量，具体步骤如下：（1）称取0.02-0.05mg软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物溶于0.5-1.0mL乙醇中得到匀浆液，在抽真空状态下，将匀浆液转入聚丙烯Spin固相萃取小柱中，将软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物通过上筛板和下筛板压紧得到软海绵酸Spin固相萃取小柱；然后将软海绵酸Spin固相萃取小柱依次用乙醇0.5-1mL、10wt%乙醇水溶液0.5-1mL淋洗活化；（2）精确称取1.0g贝类样品，加入2.0mL甲醇，12000rpm匀浆30s，涡旋震荡5min，于5000r/min，离心5min，取沉淀加入2.0mL甲醇重复匀浆离心一次；合并两次离心所得上清液，即得到样品提取液，然后将样品提取液上样至步骤（1）活化后的软海绵酸Spin固相萃取小柱，于1000rpm离心2min，然后依次用去离子水0.5-1.0mL，10wt%乙醇水溶液0.5-1.0mL淋洗，于1000rpm离心5min；最后将1.0mL乙醇加入到软海绵酸Spin固相萃取小柱，静止5min后，于1000rpm离心10min，收集洗脱液，过0.22μm滤膜，即可采用LC-MS/MS测定软海绵酸毒素的含量。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术首次公开了一种软海绵酸分子印迹-量子点聚合物的制备方法，将量子点纳米材料（粒径小、比表面积大等优点）与分子印迹材料的高选择性相结合，获得对软海绵酸贝类毒素具有高选择性、高吸附容量的分子印迹-量子点聚合物，并通过筛选建立合适的Spin分子印迹固相萃取小柱上样、淋洗、洗脱及离心程序，获得对软海绵酸贝类毒素具有较高选择性和灵敏度的萃取体系，可用于贝类样品中软海绵酸贝类毒素的分离、纯化和富集，具有灵敏度高、稳定好、选择性高，方法简单、操作方便的优点。与常规液液萃取、固相萃取等相比，具有富集、净化效率高、有机溶剂消耗少、成本低、样品需要量少等优点。附图说明图1为实施例一制备的软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的透射电镜图；图2为软海绵酸毒素及其结构类似物对MIP-QDs的荧光猝灭结果比较示意图；图3为软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物对软海绵酸的荧光猝灭曲线示意图。具体实施方式以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。具体实施例一一种软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的制备方法，包括以下步骤：以软海绵酸为模板分子，加入量子点荧光纳米材料，在交联剂正硅酸乙酯TEOS和功能单体存在条件下，引发聚合后，采用超声辅助萃取法除去所得聚合物中模板分子，即获得可特异识别软海绵酸毒素的软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物。具体步骤如下：（1）将7.5mL环己烷与1.8mLTritonX-100混合搅拌15min后，加入量子点荧光纳米材料QDs500μg、正硅酸乙酯（TEOS）50μL和氨水100μL，搅拌2h，最后加入浓度为1μg/mL的软海绵酸毒素溶液156μL，功能单体3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）或者甲基丙烯酰氧丙基三(三甲基硅氧烷基)硅烷（MPTES）22.8μL，搅拌聚合反应12h；（2）加入10mL丙酮待沉淀后离心弃上清液，加入6mL双蒸水分散后离心弃上清液，加入5mL乙醇/乙腈溶液，超声分散均匀静置40min后离心；（3）重复步骤（2）直到完全除去软海绵酸毒素为止，即获得可特异识别软海绵酸毒素的软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物（MIP-QDs）。同时，制备空白印迹-量子点聚合物（NIP-QDs），除不加模板分子外，其制备过程同上述MIP-QDs制备方法。上述量子点荧光纳米材料为CdSe/ZnS，粒径介于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种软海绵酸毒素分子印迹‑量子点聚合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：以软海绵酸为模板分子，加入量子点荧光纳米材料，在交联剂正硅酸乙酯和功能单体3‑氨丙基三乙氧基硅烷APTES或者甲基丙烯酰氧丙基三(三甲基硅氧烷基)硅烷存在条件下，引发聚合后，采用超声辅助萃取法除去所得聚合物中模板分子，即获得可特异识别软海绵酸毒素的软海绵酸毒素分子印迹‑量子点聚合物。

【技术特征摘要】
1.一种软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：以软海绵酸为模板分子，加入量子点荧光纳米材料，在交联剂正硅酸乙酯和功能单体3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES或者甲基丙烯酰氧丙基三(三甲基硅氧烷基)硅烷存在条件下，引发聚合后，采用超声辅助萃取法除去所得聚合物中模板分子，即获得可特异识别软海绵酸毒素的软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物。2.根据权利要求1所述的一种软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的制备方法，其特征在于具体步骤如下：（1）将7.5mL环己烷与1.8mLTritonX-100混合搅拌15min后，加入量子点荧光纳米材料500μg、正硅酸乙酯50μL和氨水100μL，搅拌2h，最后加入浓度为1μg/mL的软海绵酸毒素溶液156μL，功能单体3-氨丙基三乙氧基硅烷或者甲基丙烯酰氧丙基三(三甲基硅氧烷基)硅烷22.8μL，搅拌聚合反应12h；（2）加入10mL丙酮待沉淀后离心弃上清液，加入6mL双蒸水分散后离心弃上清液，加入5mL乙醇/乙腈溶液，超声分散均匀静置40min后离心；（3）重复步骤（2）直到完全除去软海绵酸毒素为止，即获得可特异识别软海绵酸毒素的软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物。3.根据权利要求2所述的一种软海绵酸毒素分子印迹-量子点聚合物的制备方法，其特征在于：所述的乙醇/乙腈溶液中乙醇与乙腈的混合体积比为8：2。4.根据权利要求1或2所述的一种软海绵酸毒素分子印迹-...

【专利技术属性】
技术研发人员：史西志，肖婷婷，孙爱丽，李逊甲，李德祥，陈炯，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33