高密度培养裂壶藻的方法技术

本发明专利技术公开了一种高密度培养裂壶藻的方法，包括菌种活化，制备豆粕水解物，种子培养，摇瓶培养，10L发酵罐培养，500L发酵罐培养。方法简单易操作，成本低，生物量高。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种，包括菌种活化，制备豆粕水解物，种子培养，摇瓶培养，10L发酵罐培养，500L发酵罐培养。方法简单易操作，成本低，生物量高。【专利说明】
本专利技术属于生物
，具体涉及。
技术介绍
裂壶藻又称裂殖壶菌，属于真菌门(Eumycota)、卵菌纲(Oomycetes)、水霉目(Saprolegniales)、破囊壶菌科(Thraustochytriaceae)的一类海洋真菌，单细胞、球形。裂壶藻细胞积累大量对人体有用的活性物质，如:油脂、色素、角鲨烯等，其中油脂占细胞干重的70%以上，总脂中DHA含量非常高，结构类似的脂肪酸含量低，容易分离纯化，而且没有鱼腥味。是一种有潜力的DHA原料。现有培养裂壶藻的方法普遍存在生物量不高的问题。
技术实现思路
为了克服现有
存在的上述缺陷，本专利技术的目的在于，提供一种，解决现有技术培养裂壶藻的方法普遍存在生物量不高的问题。本专利技术提供的，包括以下 步骤: 一、菌种活化，将保藏于-70°C的菌种转接于斜面培养基，25°C培养3—4天； 二、制备豆柏水解物，取32g豆饼粉加入65mlIM的HCl，定容至250ml，120°C高压水解25分钟，加入50 mlIM的NaOH溶液，6000rpm离心8分钟，上清液用IM的NaOH溶液调pH至7.0，6000rpm离心8分钟除去沉淀定容至800ml，得到的溶液即为40g/L的豆柏水解液； 三、种子培养，一级种子:将活化的斜面菌种接入装有IOOmL种子培养基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培养2天；二级种子:取4ml —级种子，接入装有IOOmL种子培养基的500mL 三角瓶，25°C、200rpm 培养 2 天； 四、摇瓶培养，取4mL二级种子液接入装有IOOmL发酵培养基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培养5天； 五、IOL发酵罐培养,将培养好的液体种子,按4%接种量接种于发酵培养基中，在25°C和4L/min的通气量下培养3天，通过流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自动控制发酵液pH ； 六、500L发酵罐培养，将培养好的液体种子，按10%接种量接种于发酵培养基中，在25°〇和通气比3.48 L miiTV1的通气量下培养4天，通过流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自动控制发酵液pH。所述斜面培养基为60 g/L葡萄糖，40 g/L豆柏水解物，20g/L琼脂，50% v/v天然海水,pH 6.0 ;所述步骤三或四或五所用发酵培养基为60 g/L的葡萄糖,40 g/L豆柏水解物,50% v/v天然海水，pH 6.0 ;所述步骤六所用发酵培养基为125g/L葡萄糖，10g/L酵母膏,59/L大豆蛋白胨,适量自然海水。本专利技术提供的，其有益效果在于，方法简单易操作，成本低，生物量高。【具体实施方式】下面结合一个实施例，对本专利技术提供的进行详细的说明。实施例本实施例的，包括以下步骤: 一、菌种活化，将保藏于-70°C的菌种转接于斜面培养基，25°C培养3—4天； 二、制备豆柏水解物，取32g豆饼粉加入65mlIM的HCl，定容至250ml，120°C高压水解25分钟，加入50 mlIM的NaOH溶液，6000rpm离心8分钟，上清液用IM的NaOH溶液调pH至7.0，6000rpm离心8分钟除去沉淀定容至800ml，得到的溶液即为40g/L的豆柏水解液； 三、种子培养，一级种子:将活化的斜面菌种接入装有IOOmL种子培养基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培养2天；二级种子:取4ml —级种子，接入装有IOOmL种子培养基的500mL 三角瓶，25°C、200rpm 培养 2 天； 四、摇瓶培养，取4mL二级种子液接入装有IOOmL发酵培养基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培养5天； 五、IOL发酵罐培养,将培养好的液体种子,按4%接种量接种于发酵培养基中，在25V和4L/min的通气量下培养3天，通过流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自动控制发酵液pH ； 六、500L发酵罐培养，将培养好的液体种子，按10%接种量接种于发酵培养基中，在25°〇和通气比3.48 L miiTV1的通气量下培养4天，通过流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自动控制发酵液pH。所述斜面培养基为60 g/L葡萄糖，40 g/L豆柏水解物，20g/L琼脂，50% v/v天然海水,pH 6.0 ;所述步骤三或四或五所用发酵培养基为60 g/L的葡萄糖,40 g/L豆柏水解物,50% v/v天然海水，pH 6.0 ;所述步骤六所用发酵培养基为125g/L葡萄糖，10g/L酵母膏,59/L大豆蛋白胨,适量自然海水。此种培养方法生物量可达35g/L。【权利要求】1.一种，其特征在于:包括以下步骤: 一、菌种活化，将保藏于-70°C的菌种转接于斜面培养基，25°C培养3—4天； 二、制备豆柏水解物，取32g豆饼粉加入65mlIM的HCl，定容至250ml，120°C高压水解25分钟，加入50 mlIM的NaOH溶液，6000rpm离心8分钟，上清液用IM的NaOH溶液调pH至7.0，6000rpm离心8分钟除去沉淀定容至800ml，得到的溶液即为40g/L的豆柏水解液； 三、种子培养，一级种子:将活化的斜面菌种接入装有IOOmL种子培养基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培养2天；二级种子:取4ml —级种子，接入装有IOOmL种子培养基的500mL 三角瓶，25°C、200rpm 培养 2 天； 四、摇瓶培养，取4mL二级种子液接入装有IOOmL发酵培养基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培养5天； 五、IOL发酵罐培养,将培养好的液体种子,按4%接种量接种于发酵培养基中，在25V和4L/min的通气量下培养3天，通过流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自动控制发酵液pH ； 六、500L发酵罐培养，将培养好的液体种子，按10%接种量接种于发酵培养基中，在25°〇和通气比3.48 L miiTV1的通气量下培养4天，通过流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自动控制发酵液pH。2.根据权利要求1所述的，其特征在于:所述斜面培养基为 60 g/L葡萄糖，40 g/L豆柏水解物，20g/L琼脂，50% v/v天然海水，pH 6.0。3.根据权 利要求1所述的，其特征在于:所述步骤三或四或五所用发酵培养基为60 g/L的葡萄糖，40 g/L豆柏水解物，50% v/v天然海水，pH 6.0。4.根据权利要求1所述的，其特征在于:所述步骤六所用发酵培养基为125g/L葡萄糖，10g/L酵母膏，59/L大豆蛋白胨,适量自然海水。【文档编号】C12N1/12GK103881920SQ201210561184【公开日】2014年6月25日 申请日期:2012年12月21日 优先权日:2012年12月21日 【专利技术者】张述智, 夏伟, 朱绍辉, 张 浩, 王晓丽, 徐权汗, 李之详, 许团辉 申请人:青岛中仁药业有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高密度培养裂壶藻的方法，其特征在于：包括以下步骤：一、菌种活化，将保藏于‑70℃的菌种转接于斜面培养基，25℃培养3—4天；二、制备豆粕水解物，取 32g 豆饼粉加入65ml1M的HCl，定容至250ml，120℃高压水解25分钟，加入50 ml1M的NaOH 溶液，6000rpm离心8分钟，上清液用1M的NaOH溶液调pH至7.0，6000rpm离心8分钟除去沉淀定容至800ml，得到的溶液即为 40g/L的豆粕水解液；三、种子培养，一级种子：将活化的斜面菌种接入装有100mL种子培养基的 500mL三角瓶，25℃、200rpm培养2天；二级种子：取4ml一级种子，接入装有 100mL种子培养基的 500mL三角瓶，25℃、200rpm培养2天；四、摇瓶培养，取4mL二级种子液接入装有100mL发酵培养基的 500mL三角瓶，25℃、 200rpm培养5天；五、10L发酵罐培养，将培养好的液体种子，按4%接种量接种于发酵培养基中，在25℃和4L/min的通气量下培养3天，通过流加2mol/LHCI或2mol/LNaOH自动控制发酵液pH；六、500L发酵罐培养，将培养好的液体种子，按10%接种量接种于发酵培养基中，在25℃和通气比3.48 L min‑1L‑1的通气量下培养4天，通过流加2mol/LHCI或 2mol/LNaOH自动控制发酵液pH。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张述智，夏伟，朱绍辉，张浩，王晓丽，徐权汗，李之详，许团辉，
申请(专利权)人：青岛中仁药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37