本发明专利技术公开一种检测小反刍兽疫抗原的金标试纸及制备方法。本发明专利技术的金标试纸，含有底板和底板上依次衔接的加样吸收垫、由吸附有金标抗原的玻璃纤维素膜构成的免疫金标垫、硝酸纤维膜和吸水垫，在硝酸纤维膜上含有检测线和质控线，免疫金标垫上检测线由原核表达经优化后N基因部分重组蛋白N1-N4构成，质控线为抗N1-N4重组蛋白的兔IgG抗体。本发明专利技术具有快速、简便、直观、灵敏、准确、检测成本相对较低的特点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开。本专利技术的金标试纸，含有底板和底板上依次衔接的加样吸收垫、由吸附有金标抗原的玻璃纤维素膜构成的免疫金标垫、硝酸纤维膜和吸水垫，在硝酸纤维膜上含有检测线和质控线，免疫金标垫上检测线由原核表达经优化后N基因部分重组蛋白N1-N4构成，质控线为抗N1-N4重组蛋白的兔IgG抗体。本专利技术具有快速、简便、直观、灵敏、准确、检测成本相对较低的特点。【专利说明】
本专利技术涉及一种病原体的检测试纸及其制备方法，确切讲本专利技术涉及。
技术介绍
小反会兽疫是由副粘病毒科(Paramyxoviridae)麻疫病毒属(Morbolivirus)的小反会兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants virus, PPRV)引起的，主要感染小反会兽，特别是山羊和绵羊高度易感，是一种烈性、接触性传染病。世界粮农组织(FAO)和世界动物卫生组织(OIE)将小反刍兽疫列为法定报告动物疫病，我国将其划分为I类动物疫病。(龙云凤，刘晓慧，周晓黎，等.小反刍兽疫流行病学及防控研究进展.动物医学进展，2012，33(5): 94-98.)。PPRV于1942年在西非科特迪瓦首次发现(Gargadennec L,Lalanne A.La peste des petits ruminants.Bull Serv Zoo AOF, 1942, 5: 15-21.),近年来，小反刍兽疫((PPR)呈扩散的趋势，成为重要的跨国动物传染病之一，并且我国周边国家频繁暴发该病，2007年7月，我国西藏自治区阿里地区日土县发生小反刍兽疫疫情，造成了巨大的经济损失(王志亮，包静月，吴晓东，等我国首例小反当兽疫诊断报告.中国动物检疫，2007，24 (8):24-26.)。小反当兽疫(PPR)具有很高病死率，在初次发病动物群中病死率可高达50%?80%，羊在我国畜牧养殖中占了不小的比重，因此，预防和控制小反刍兽疫的发生对我国的畜牧业健康的发展具有重要的意义(Banvard A C，Parida S，Batten C， et al.Global distribution of peste des petits ruminants virus andprospects for improved diannosis and control.J Gen Virol, 2010, 91 (Pt 12):2885-2897.)。目前本病控制主要是通过早期诊断和免疫预防(Chauhan H C，Lambade P,Sen S，et al.The use of patholoaiealand histopatholoaicaltechniques in thediagnosis of peste des petits ruminants in India.Veterinaria Italiana,2011，47(1): 41-47.)。小反当兽疫防控主要采用免疫接种及血清学监测和疫情发生后扑杀策(黄华欣，李刚，史利军，等。小反刍兽疫病毒M蛋白主要抗原表位区的原核表达及鉴定.中国兽医科学，2013,43 (03):266-270.)。在血清学检测方法中，病毒中和试验(VNT)是国际贸易中检测金标准，其灵敏度高、特异性强，但非常耗时(龙云凤，刘晓慧，周晓黎，等.小反刍兽疫流行病学及防控研究进展.动物医学进展，2012，33 (5):94-98.)。ELISA是口前PPR最常用血清学检测方法，敏感性和特异性较高。目前，国内外建立的检测PPRV的ELISA方法主要是以PPRV N (邱文英，李伟，李刚，等.小反刍兽疫N蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELIAS方法的建立.农业生物技术学报，2011，19 (5) =967-972.)、PPRV H(Singh R P, Sreenivasa B P, Dhar P, et al.Development of a monoclonal antibodybased competitive—ELISA for detection and titration ol antibodies to peste despetits ruminants (PPR) virus .Vet Microbial, 2004, 98 (I): 3-15.)、PPRV F(田康乐，李刚，邱文英，等。小反当兽疫病毒F蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备.中国生物制品学杂志，2012，25 (9):1185-1189.)和中国专利技术专利申请CN102967710A公开的一种小反刍兽疫抗体检测的竞争ELISA试剂盒及其制备方法，这些方法主要是以重组蛋白作为诊断抗原的检测技术，而 Brning-Richardson A 等(Bruning-Richardson A, AkerblomI，Klingeborn B，et al.1mprovement and development ο I rapid chromatographicstrip tests for the diagnosis ol rinderpest and peste des petits ruminantsviruses .Virol Methods, 2011，174(1-2):42-46.)在制备特异性单克隆抗体的基础上建立了一种层析试纸条快速检测PPRV的方法，给小反刍兽疫的检测带来了革命性的飞跃。我国对小反刍兽疫的抗体检测方法和技术仍处于试验和摸索的阶段，用小反刍兽疫全病毒作为抗体诊断试剂，虽然在特异性和灵敏性上较好，但全病毒的获得较为困难，且成本较高。而用分子生物学构建表达的蛋白具有很好的优势。面对我国基层检测机构条件简陋并且缺乏相应的技术人员的现实，发展一种快速、简便、检测成本相对较低、无需要专业人员，可在检测现场操作的新型诊断方法已成为要面对的任务。
技术实现思路
本专利技术提供一种可克服现有技术不足的，可用于检测小反刍兽疫抗体检测金标试纸条。本专利技术的一种检测小反刍兽疫抗原的金标试纸，含有底板和底板上依次衔接的加样吸收垫、由吸附有金标抗原的玻璃纤维素膜构成的免疫金标垫、硝酸纤维膜和吸水垫，在硝酸纤维膜上含有检测线和质控线，其中免疫金标垫上检测线由原核表达经优化后N基因部分重组蛋白N1-N4构成，质控线为抗N1-N4重组蛋白的兔IgG抗体。本专利技术的检测小反刍兽疫抗原的金标试纸制备方法是:以pUC57-Simple-N为模板、以引物SEQ ID Na USEQ ID Na2,SEQ ID Ns3和SEQ ID Ns4扩增得到pMD19_T Simple-NjPpMD19-T Simple- N4 和 pMD19_T Simple-N1-N4JfpMDig-T Simple-N1-M 质粒双酶切后，克隆至经过同样酶切处理的原核表达载体pET-32a中，获得重组质粒PETIZa-N1-N4 ；将重组质粒PETIZa-N1-N5表达宿主菌中表达，将表达蛋白加入胶体金溶液中，再在其中加入缓冲液，然后再将前述溶液喷涂于玻璃纤维素膜上，再将重组N1-N4蛋白，喷于NC膜上为检测带；将兔抗N1-N4蛋白IgG抗体喷于NC膜上为质控带，然后依次将吸水垫、硝酸纤维膜、免疫本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：祁光宇，蒋韬，刘斌，王超英，牟克斌，刘学荣，杜平，董金杰，智晓莹，武发菊，
申请(专利权)人：祁光宇，
类型：发明
国别省市：
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