一种(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法技术

本发明专利技术实施例提供了一种(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，属于生物制药领域。其制备方法为：在盐酸三乙醇胺缓冲溶液中，以(5R)-6-氯-5-羟基-3-氧代己酸叔丁酯为原料，在重组酮还原酶及葡萄糖脱氢酶的复合酶、脱卤酶、辅因子和葡萄糖作用下，用氰化试剂维持pH值在6～8，室温下反应得到(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯。本发明专利技术提供的制备方法以(5R)-6-氯-5-羟基-3-氧代己酸叔丁酯为原料，在重组酮还原酶及葡萄糖脱氢酶的复合酶、脱卤酶的催化下，“一锅法”完成还原反应和氰基取代反应得到产物，过程简单且生产成本低。

【技术实现步骤摘要】
—种(3R, 5R)-6-氰基-3, 5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法
本专利技术属于生物制药领域，具体涉及阿伐他汀中间体(3R，5R)-6-氰基-3，5_二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法。
技术介绍
他汀类药物通过抑制胆固醇合成途径的HMG-CoA还原酶，降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平，对以胆固醇升高为主的高脂血症有较好的疗效，是目前临床上应用广泛的血脂调节药物。阿伐他汀(Atorvastatin)由于其具有起效快、降脂作用强、作用时间长等优点，成为全新第三代、全合成、高纯化、高选择性的HMG-CoA还原酶抑制剂，是目前最有市场前景的他汀类药物。而(3R，5R)-6-氰基-3，5-二羟基己酸叔丁酯是阿伐他汀的最为重要的中间体，因而，开展对(3R，5R)-6-氰基-3，5-二羟基己酸叔丁酯的合成改进，对阿伐他汀制备方法的研究具有十分重要的作用。(3R, 5R)-6-氰基_3，5_ 二羟基己酸叔丁酯是合成阿伐他汀侧链的重要的中间体，其化学结构为:

【技术保护点】
一种(3R,5R)‑6‑氰基‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其特征在于，在盐酸三乙醇胺缓冲溶液中，以(5R)‑6‑氯‑5‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯为原料，在重组酮还原酶及葡萄糖脱氢酶的复合酶、脱卤酶、辅因子和葡萄糖作用下，用氰化试剂维持pH值在6～8，室温下反应得到(3R,5R)‑6‑氰基‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯；在起始时的反应体系中，所述复合酶、脱卤酶、辅因子、葡萄糖和(5R)‑6‑氯‑5‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯的质量比为0.01～0.02: 0.01～0.02:0.0005～0.002:1～2:1。

【技术特征摘要】
1.一种(3R，5R)-6-氰基-3，5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其特征在于，在盐酸三乙醇胺缓冲溶液中，以(5R)-6-氯-5-羟基-3-氧代己酸叔丁酯为原料，在重组酮还原酶及葡萄糖脱氢酶的复合酶、脱卤酶、辅因子和葡萄糖作用下，用氰化试剂维持PH值在6~8，室温下反应得到(31?，51?)-6-氰基-3，5-二羟基己酸叔丁酯；在起始时的反应体系中，所述复合酶、脱卤酶、辅因子、葡萄糖和(5R)-6-氯-5-羟基-3-氧代己酸叔丁酯的质量比为0.01 ~0.02: 0.01 ~0.02:0.0005 ~0.002:1 ~2:1。2.根据权利要求1所述的生物制备方法，其特征在于，所述重组酮还原酶及葡萄糖脱氢酶的复合酶的制备方法为:将携带酮还原酶基因和葡萄糖脱氢酶基因的重组大肠杆菌单菌落接种到含氨苄青霉素和卡拉霉素双抗性的液体LB培养基中，于35~40°C下摇床活化8~12小时，将活化后得到的培养物接种到含氨苄青霉素和卡拉霉素双抗性的液体LB培养基中，于35~40°C下摇床扩大培养，至OD6tltl值达到0.8~I时，加入诱导剂，于35~40°C下继续培养4~8小时，离心，收集沉淀物，加入盐酸三乙醇胺缓冲液得悬浮液，将悬浮液置于冰水浴中超声破壁10~20分钟，再离心，将上清液预冻至温度降至-15~-25°C，然后再冷冻干燥24~48小时，即得所述重组酮还原酶和葡萄糖脱氢酶的复合酶。3.根据权利要求1所述的生物制备方法，其特征在于，所述脱卤酶的制备方法为:将携带脱卤酶基因的重组大肠杆菌单菌落接种到含氨苄青霉素的液体LB培养基中，于35~40°C下摇床活化...

【专利技术属性】
技术研发人员：张龑，熊进军，葛石平，
申请(专利权)人：黄冈华阳药业有限公司， 黄冈师范学院，
类型：发明
国别省市：湖北;42