本发明专利技术公开了一种蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其是将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理后，加入考马斯亮蓝G-250溶液和聚山梨酯20溶液的混合液中形成混合体系，采用紫外可见分光光度计测定该混合体系的吸光度，最后用外标法定出该蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠的含量，所述外标法的外标物为氰基硼氢化钠。本发明专利技术操作步骤简单、快捷、成本低、毒性小。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学物质检测领域，具体涉及一种氰基硼氢化钠残留量的检测方法。
技术介绍
氰基硼氢化钠是一种常用的络合型氢化物，具有优良的还原性，但同时也有一定的毒性。在医药行业，氰基硼氢化钠残留造成的安全问题早已引起人们的关注，而且药典中出现了三种氰化物残留的检测方法。不过，现有方法对氰化物残留的分析，要么只能做到定性分析，要么需要剧毒物质，如溴化氢，联苯胺等，如药典中的060氰化物检查法。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提出一种操作步骤简单、快捷、成本低、毒性小的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法。所采用的技术方案为：一种蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其是将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理后，加入考马斯亮蓝G-250溶液和聚山梨酯20溶液的混合液中形成混合体系，采用紫外可见分光光度计测定该混合体系的吸光度，最后用外标法定出该蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠的含量，所述外标法的外标物为氰基硼氢化钠。优选地，所述外标法为校正曲线法。优选地，所述校正曲线法包括氰基硼氢化钠标准梯度溶液和所述混合液的配制，然后取氰基硼氢化钠标准梯度溶液分别加入所述混合液中形成梯度标准体系，采用紫外可见分光光度计测定该梯度标准体系的吸光度，建立吸光度和浓度之间的标准曲线图。优选地，所述混合液是考马斯亮蓝G-250溶液与体积浓度为10％的聚山梨酯20的混合液，两者配比的体积比为10:1。优选地，所述混合体系的放置环境及时间为37℃避光水浴保存30min。优选地，所述紫外可见分光光度计的检测波长为595纳米。优选地，所述去除蛋白为将蛋白样品或制品进行煮沸。优选地，所述将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理为：取蛋白原液，抽取到小烧杯中，调节pH于等电点附近；将调节好的样品分装于EP管中，再将EP管架于浮漂上放入沸水中，进行煮沸；沸水浴10-20min至明显絮状沉淀，10000rpm离心10min，取上清液为供试品溶液。优选地，所述校正曲线法包括如下步骤：S1.试液配制：S11.1mol/L氰基硼氢化钠标准溶液：精确称取0.0628g氰基硼氢化钠，用1mol/LNaOH溶液溶解并稀释到1.0ml，4℃保存；S12.氰基硼氢化钠标准梯度溶液：取1mol/L氰基硼氢化钠标准溶液用纯化水分别稀释为0.25mmol/L,0.20mmol/L,0.15mmol/L,0.10mmol/L,0.05mmol/L,0.025mmol/L溶液；S13.考马斯亮蓝G-250溶液：取考马斯亮蓝G-25010mg置于100ml量瓶中，加入5ml95％乙醇溶解，再加入10ml磷酸，用纯化水稀释到100ml，滤纸过滤，4℃保存；S14.10％聚山梨酯20溶液：量取1ml吐温-20置于10ml量瓶中，纯化水稀释到10ml，4℃保存；S15.混合液：考马斯亮蓝溶液与10％吐温-20按10：1比例，混合；S2.检测S21.标准曲线：取氰基硼氢化钠标准梯度溶液各0.60ml置于1.5ml离心管中，分别加入0.66ml混合液，混匀，37℃避光水浴30min，在波长595nm处测定吸光度；S22.建立吸光度和浓度之间的标准曲线图；所述加入考马斯亮蓝G-250溶液和聚山梨酯20溶液的混合液中形成混合体系，采用紫外可见分光光度计测定该混合体系的吸光度为：取供试品溶液0.60ml置于1.5ml离心管中，加入0.66ml染色液，混匀，37℃避光水浴30minh，在波长595nm处测定吸光度。优选地，所述蛋白为聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子或重组人粒细胞集落刺激因子。本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过考马斯亮蓝G-250和聚山梨酯20溶液为反应体系建立了采用紫外可见分光光度法测定微量氰基硼氢化钠的方法。此方法简单、快捷、成本低，毒性小，可用于其它相关原液或样品中氰基硼氢化钠残留检测提供参考，如在检测聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子中氰基硼氢化钠残留量的应用。附图说明图1为本专利技术不同条件(煮沸/不煮沸)、不同日期的条件下，不同浓度与响应吸光度之间的关系图。具体实施方式下面对本专利技术作进一步详细的阐述。本专利技术的一种蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其是将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理后，加入考马斯亮蓝G-250溶液和聚山梨酯20溶液的混合液中形成混合体系，采用紫外可见分光光度计测定该混合体系的吸光度，最后用外标法定出该蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠的含量，所述外标法的外标物为氰基硼氢化钠。也就是在针对蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法上，专利技术人的核心专利技术构思在于，首先利用考马斯亮蓝G-250溶液和聚山梨酯20溶液的混合为反应体系，然后采用紫外可见分光光度法测定上述混合体系的吸光度，最后利用外标法定量。所述外标法在本
里的定义为：以待测成分的对照品作为对照物质，相对比较以求得供试品含量。外标法在操作和计算上可分为校正曲线法和用校正因子求算法。校正曲线法是用已知不同含量的标样系列等量进样分析，然后做出响应信号与含量之间的关系曲线，也就是校正曲线。校正因子求算法是将标样多次分析后得到响应信号与其含量求出它的绝对校正因子，再根据公式求出待测样品中的含量。本专利技术优选校正曲线法。该校正曲线法包括氰基硼氢化钠标准梯度溶液和所述混合液的配制，然后取氰基硼氢化钠标准梯度溶液分别加入所述混合液中形成梯度标准体系，采用紫外可见分光光度计测定该梯度标准体系的吸光度，建立吸光度和浓度之间的标准曲线图。本专利技术所述的蛋白优选为聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)或重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)，当然也可以为其他种蛋白，从而可用于其它相关原液或样品中氰基硼氢化钠残留检测提供参考。由于聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)是通过氰基硼氢化钠作选择性催化剂，使重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)和聚乙二醇反应生产的。因此，本领域较为常见的是，聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子样品或制品中常有氰基硼氢化钠的残留；因此检测聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子样品或制品中氰基硼氢化钠的残留量具有技术需要和现实意义，从而更为优选地，所述的蛋白为聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其特征在于，其是将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理后，加入考马斯亮蓝G‑250溶液和聚山梨酯20溶液的混合液中形成混合体系，采用紫外可见分光光度计测定该混合体系的吸光度，最后用外标法定出该蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠的含量，所述外标法的外标物为氰基硼氢化钠。
【技术特征摘要】
1.一种蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其特征在于，
其是将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理后，加入考马斯亮蓝G-250
溶液和聚山梨酯20溶液的混合液中形成混合体系，采用紫外可见分光光度计测
定该混合体系的吸光度，最后用外标法定出该蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠
的含量，所述外标法的外标物为氰基硼氢化钠。
2.如权利要求1所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方
法，其特征在于，所述外标法为校正曲线法。
3.如权利要求2所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方
法，其特征在于，所述校正曲线法包括氰基硼氢化钠标准梯度溶液和所述混合
液的配制，然后取氰基硼氢化钠标准梯度溶液分别加入所述混合液中形成梯度
标准体系，采用紫外可见分光光度计测定该梯度标准体系的吸光度，建立吸光
度和浓度之间的标准曲线图。
4.如权利要求3所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方
法，其特征在于，所述混合液是考马斯亮蓝G-250溶液与体积浓度为10％的聚山
梨酯20的混合液，两者配比的体积比为10:1。
5.如权利要求3所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方
法，其特征在于，所述混合体系的放置环境及时间为37℃避光水浴保存30min。
6.如权利要求3所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方
法，其特征在于，所述紫外可见分光光度计的检测波长为595纳米。
7.如权利要求3所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方
法，其特征在于，所述去除蛋白为将蛋白样品或制品进行煮沸。
8.如权利要求7所述的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方
法，其特征在于，所述将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理为：取
蛋白原液，抽取到小烧杯中，调节pH于pH5.8；将调节好的样品分装于EP管中，
再将EP管架于浮漂上放入沸水中，进行煮沸；沸水浴10-20min至明显絮状沉
【专利技术属性】
技术研发人员：张晖，张静，贺淳晓，
申请(专利权)人：深圳新鹏生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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