常绿萱草的组织培养法制造技术

本发明专利技术公开了一种常绿萱草的组织培养法，包括以下步骤：1）取常绿萱草植株茎段流水冲洗；2）茎段经消毒后，剥取茎尖接种到诱导无菌苗培养基上进行培养；3）待步骤2）所得的无菌苗长至1.0～2.0cm高时，进行割取，得小苗Ⅰ；将小苗Ⅰ接种到诱导不定芽培养基上进行培养；4）待上述小苗Ⅰ上诱导出的不定芽长到1.0～3.0cm高时，以2～5株为一丛进行割取，得丛生小苗；将上述丛生小苗接种到增殖培养基上进行培养；5）待上述丛生小苗长出的不定芽长到3.0～6.0cm时，进行割取，得小苗Ⅲ；将此小苗Ⅲ接种到生根培养基中培养；6）待上述小苗Ⅲ长出大于2cm的至少5条根时，得可出瓶种植的种苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
常绿萱草具有四季常绿、花期长、抗病性强、耐寒、耐半阴等特点，是一种广受欢迎的绿化园林栽培植物。此外，常绿萱草的根可以入药，具利尿、凉血功效，用于治疗水肿、小便不利、淋浊、带下、黄疸、便血、崩漏等症。从常绿萱草分离出来的蒽醌类、二氢呋喃-Y -内酰胺类等化合物具有抗菌、抗癌、杀虫等活性。据生产调查，常绿萱草在自然条件下生长很少能够结籽繁殖，一般采用“分株法”进行繁殖，年繁殖系数一般为4~5倍左右，严重阻碍了常绿萱草的大规模应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种，采用该方法能获得大量的常绿萱草组培种苗。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种，依次包括以下步骤:I)、取生长健壮且无病虫害的常绿萱草植株，剥去外面I~2层老叶，取茎尖部位I~2cm长的茎段，放入纱袋中进行流水冲洗；2)、将步骤I)所得的流水冲洗后的茎段经消毒(为常规消毒)后，剥取长度为3~5毫米的茎尖，接种到诱导无菌苗培养基上进行培养，得无菌苗；培养条件为:16小时光照，光照强度30~40μOL M-2.S-1，温度为27土 1°C ;8小时暗培养，温度为21 土 1°C ;上述光照和暗培养交替进行；3)、待步骤2)所得的无菌苗长至1.0~2.0cm高时，进行割取，得小苗I (为单株小苗)；将所述小苗I接种到诱导不定芽培养基上进行培养，从而使小苗I上诱导出不定芽；培养条件为:16小时光照，光照强度30~40μπιΟ1 m_2 ?s—1，温度为27±1°C;8小时暗培养，温度为21±1°C ;上述光照和暗培养交替进行；4)、待上述小苗I上诱导出的不定芽长到1.0~3.0cm高时，以2~5株为一丛进行割取，得丛生小苗；将上述丛生小苗接种到增殖培养基上进行培养；培养条件为:16小时光照，光照强度30~40μ mol π2.s—1，温度为26~28°C;8小时暗培养，温度为20~22°C;上述光照和暗培养交替进行；5)、待上述丛生小苗长出的不定芽长到3.0~6.0cm时，进行割取，得小苗III (为单株小苗)；将此小苗III接种到生根培养基中培养；培养条件为:16小时光照，光照强度40~50 μ mo I π2.s—1，温度为26~28°C ；8小时暗培养，温度为20~22°C ;上述光照和暗培养交替进行；6)、待上述小苗III长出大于2cm的至少5条根时，得可出瓶种植的种苗。作为本专利技术的的改进:步骤I)为:将常绿萱草的茎段放入纱袋中，无菌水冲洗0.5~I小时。作为本专利技术的的进一步改进:步骤2)中的诱导无菌苗培养基为:1/4MS基本培养基+白砂糖20~30g/L+琼脂4 ~9g/L, pH 为 5.5 ~6.0。上述诱导无菌苗培养基的制作方法具体如下:以1/4MS基本培养基(即溶液中大量元素的含量为MS基本培养基的四分之一)为基础，分别加入白砂糖、琼脂均匀混合，利用lmol/L的KOH或lmol/L的HCl调节pH为5.5~6.0 ;每IL的1/4MS基本培养基中加20~30g糖、4~9g琼脂。步骤3)中的诱导不定芽培养基为:MS基本培养基+TDZ0.05~0.5mg/L+白砂糖20 ~30g/L+ 琼脂 4 ~9g/L, pH 为 5.5 ~6.0。上述诱导不定芽诱导培养基的制作方法具体如下:以MS基本培养基为基础，分别加入N-苯基-N' -1, 2，3-噻二唑-5脲(TDZ)、白砂糖、琼脂均匀混合，利用lmol/L的KOH或lmol/L的HCl调节pH为5.5~6.0 ;每IL的MS基本培养基加入0.05~0.5mg的TDZ、20~30g白砂糖、4~9g琼脂。步骤4)中的增殖培养基为:MS基本培养基+TDZ0.05~0.5mg/L+白砂糖20~30g/L+ 琼脂 4 ~9g/L，pH 为 5.5 ~6.0。上述增殖培养基的制作方法具体如下:以MS基本培养基为基础，分别加入N-苯基-N' -1, 2，3-噻二唑-5脲(TDZ)、白砂糖、琼脂均匀混合，利用lmol/L的KOH或lmol/L的HCl调节pH为5.5~6.0 ;每IL的MS基本培养基加入0.05~0.5mg的TDZ、20~30g白砂糖、4~9g琼脂。步骤5)中的生根培养基为:1/2MS基本培养基+白砂糖15~20g/L+琼脂4~10g/L, pH 为 5.5 ~6.0。上述生根培养基的制作方法具体如下:以1/2MS基本培养基(即溶液中大量元素的含量为MS基本培养基的一半)为基础，分别加入白砂糖、琼脂均匀混合，利用lmol/L的KOH或lmol/L的HCl调节pH为5.5~6.0 ;每1L1/2MS基本培养基中加15~20g糖、4~IOg琼脂。依照本专利技术的方法，只需60~90天即可获得试管苗；因此采用本专利技术的方法可以长期得到大量的试管苗。在本专利技术中，步骤3)中的诱导不定芽培养基的配方同步骤4)中的增殖培养基的配方。本专利技术的特点在于:1、本专利技术使用了植物激素TDZ，使用效果优于使用激素6-BA ；本专利技术采用“1/4MS基本培养基”作为无菌苗培养基，1/4MS基本培养基中无机盐浓度相对较低，植株长的较快，更有利于诱导无菌苗。2)、本专利技术以2~5株为一丛进行割取，转接该丛生小苗进行继代，丛生小苗有看护作用，利于植株的增殖；单株转接容易损伤不利于植株的增殖。3)、本专利技术对继代增殖次数进行了比较，发现继代周期为2-3次时增殖的倍数和苗的质量为最佳。本专利技术的常绿萱草组织培养法，属于一种离体快速繁殖的组织培养方法。依照植物组织培养中细胞全能性的原理，可以在短时间内生产大量遗传背景相同、长势一致的优质种苗(种子)，而且依靠实验室可以实现周年的长期提供优质种苗。在本专利技术的方法中，将长势健壮且无病虫害的常绿萱草植株上取得的茎尖进行消毒；再通过合适的诱导培养基进行诱导不定芽以及增殖不定芽，可以获得大量的无菌苗。采用本专利技术的方法，一般仅需60~90天即可得到可出瓶种植的种苗；因此常绿萱草组培苗一周年内的繁殖系数理论上为81°倍以上。所以，本专利技术的，是一种不受季节等因素影响，高效、快速提供优质常绿萱草种苗的方法，可以加速良种推广速度，提高田间品种种植产量。综上所述，本专利技术建立的常绿萱草组织培养体系将为良种(常绿萱草)工厂化育苗提供理论依据和技术支撑。 本专利技术所得的种苗可采用以下方法进行种植:待种苗高4~8cm、具有至少3条长于2cm的根时，进行炼苗驯化，在室温下(25°C左右)放置2~3d后开瓶，然后在自然光下放置2~3d后取出小苗，用温水(30°C左右)洗净根部琼脂，并晾干，移栽入营养土中，(泥炭:珍珠岩:蛭石=4:3:3的体积比)，于人工气候箱室培养，培养条件:温度20~25°C，湿度85%~90%,光照强度15~25 μ mol m 2 *s 1 ;3~5周后光照强度30~40 μ mol m 2 *s 1 ；2个月后，存活率达到95%以上。【附图说明】图1为实施例1中激素浓度是TDZ0.05mg/L时所诱导出来的常绿萱草芽；图2为激素浓度是TDZ0.lmg/L时所诱导出来的常绿萱草芽；图3为激素为6-BA时所诱导出来的常绿萱草芽；图4为实施例1所得的常绿萱草的生根苗(即，可出瓶种植的种苗)；【具体实施方式】实施例1、一种，依次进行以下步骤:I)、取本文档来自技高网...

【技术保护点】
常绿萱草的组织培养法，其特征是依次包括以下步骤：1）、取生长健壮且无病虫害的常绿萱草植株，剥去外面1～2层老叶，取茎尖部位1～2cm长的茎段，放入纱袋中进行流水冲洗；2）、将步骤1）所得的流水冲洗后的茎段经消毒后，剥取长度为3～5毫米的茎尖，接种到诱导无菌苗培养基上进行培养，得无菌苗；培养条件为：16小时光照，光照强度30～40μmol?m?2·s?1，温度为27±1℃；8小时暗培养，温度为21±1℃；上述光照和暗培养交替进行；3）、待步骤2）所得的无菌苗长至1.0～2.0cm高时，进行割取，得小苗Ⅰ；将所述小苗Ⅰ接种到诱导不定芽培养基上进行培养，从而使小苗Ⅰ上诱导出不定芽；培养条件为：16小时光照，光照强度30～40μmol?m?2·s?1，温度为27±1℃；8小时暗培养，温度为21±1℃；上述光照和暗培养交替进行；4）、待上述小苗Ⅰ上诱导出的不定芽长到1.0～3.0cm高时，以2～5株为一丛进行割取，得丛生小苗；将上述丛生小苗接种到增殖培养基上进行培养；培养条件为：16小时光照，光照强度30～40μmol?m?2·s?1，温度为26～28℃；8小时暗培养，温度为20～22℃；上述光照和暗培养交替进行；5）、待上述丛生小苗长出的不定芽长到3.0～6.0cm时，进行割取，得小苗Ⅲ；将此小苗Ⅲ接种到生根培养基中培养；培养条件为：16小时光照，光照强度40～50μmol?m?2·s?1，温度为26～28℃；8小时暗培养，温度为20～22℃；上述光照和暗培养交替进行；6）、待上述小苗Ⅲ长出大于2cm的至少5条根时，得可出瓶种植的种苗。...

【技术特征摘要】
1.常绿萱草的组织培养法，其特征是依次包括以下步骤: . 1)、取生长健壮且无病虫害的常绿萱草植株，剥去外面I~2层老叶，取茎尖部位I~.2cm长的茎段，放入纱袋中进行流水冲洗； . 2)、将步骤I)所得的流水冲洗后的茎段经消毒后，剥取长度为3~5毫米的茎尖，接种到诱导无菌苗培养基上进行培养，得无菌苗；培养条件为:16小时光照，光照强度30~.40 μ mo I m_2.s'温度为27±1°C ；8小时暗培养，温度为21±1°C ;上述光照和暗培养交替进行； .3)、待步骤2)所得的无菌苗长至1.0~2.0cm高时，进行割取，得小苗I ;将所述小苗I接种到诱导不定芽培养基上进行培养，从而使小苗I上诱导出不定芽；培养条件为:16小时光照，光照强度30~40 μ mo I um~2.s—1，温度为27± 1°C ；8小时暗培养，温度为21 ± 1°C;上述光照和暗培养交替进行； . 4)、待上述小苗I上诱导出的不定芽长到1.0~3.0cm高时，以2~5株为一丛进行割取，得丛生小苗；将上述丛生小苗接种到增殖培养基上进行培养；培养条件为:16小时光照，光照强度30~40 μ mo I um~2.s—1，温度为26~28°C ；8小时暗培养，温度为20~22°C ；上述光照和暗培养交替进行； .5)、待上述丛生小苗长出的不定芽长到3.0~6.0cm时，进行割取，得小苗III ;将此小苗III接种到生根培养基中培养；培养条件为:16小时光照,光照强度40~50 μ mo I um~2.s_1,温度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛碧增，刘辉辉，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：