一种检测猪尿中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的免疫胶体金联合试剂板制造技术

本实用新型专利技术涉及一种能同时快速检测猪尿中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的免疫胶体金联合试剂板。本试剂板由上下两块塑料模板和盐酸克伦特罗快速检测试纸条、莱克多巴胺快速检测试纸条、沙丁胺醇快速检测试纸条组成，每根试纸条均由底板以及底板上依次黏着的样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫所组成。每根试纸条的硝酸纤维素膜从样品垫到吸水垫方向上依次喷有检测线和质控线。该试剂板可进行半定量直观检测，整个操作过程仅需5分钟左右，且无需任何昂贵实验设备辅助，利于大规模样本筛选，适合屠宰企业及政府检测机构。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
—种检测猪尿中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的免疫胶体金联合试剂板
本技术涉及一种能同时快速检测猪尿中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的免疫胶体金联合试剂板。
技术介绍
盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLEN)、沙丁胺醇(Salbutamol, SAL)、莱克多巴胺(Ract0pamine，RAC)，属于β -兴奋剂类药物，通常被称为“瘦肉精”。在临床上盐酸克伦特罗可用于防治哮喘、肺气肿等肺部疾病，沙丁胺醇可用于治疗支气管哮喘，莱克多巴胺可用于治疗充血性心力衰竭症等疾病。研究发现长期或大量使用β_兴奋剂会使动物肌肉合成增加，脂肪沉积减少，明显促进动物生长，因此，它常被用做饲料添加剂。由于β_兴奋剂在动物体内的代谢慢，长时间使用会造成积累，当人类食用了含有β_兴奋剂残留的食用性动物后，会出现不同程度的中毒症状，常见有恶心、头晕、四肢无力、手颤等，心脏病、高血压患者危害尤其严重。为此，欧盟明确禁止在食用性动物中使用包括盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等在内的所有β_兴奋剂类药物。为保障畜牧业的持续健康发展和人民的身体健康，我国农业部也在176号公告《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中将盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等列入了禁用清单。尽管我国明令禁止使用，然而，受经济利益驱动以及缺乏有效的监测手段，目前仍有不少养殖户违令使用兴奋剂，因此，建立科学、规范的药物残留监控方法十分必要。现阶段，对于β -兴奋剂类药物的检测方法主要有理化分析法和免疫分析法。理化分析法，如高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱质谱联用法(LC-MS)，这些方法具有特异性好、准确率高的特点，是各大检测机构对检测样本进行确证的首选方法，但对设备、环境、操作技能等要求较高，不利于大规模样本筛选，因而不适合广大基层部门。免疫分析法常用的有酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金免疫层析法(GICA)。酶联免疫吸附法是应用抗原抗体特异性反应和酶的高效催化作用来测定β -兴奋剂类药物含量的免疫分析方法，具有特异性强、灵敏度高、快速、简便等优点。但是ELISA法中酶的活性易受反应条件影响，造成测定结果重复性较差；且需要用到昂贵特殊的仪器设备，故存在一定的局限性。胶体金免疫层析法是在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。该方法将反应所需要的全部或大部分原料整合到试剂中，可在3?5min内完成对样品的测定，具有简单、快速、灵敏度高等特点，既可用于实验室检测，也可用于养殖场等实地测定。
技术实现思路
本技术针对实际检测需求，研制开发出一种能同时快速检测猪尿中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的免疫胶体金联合试剂板。本技术试剂板操作简便快捷，灵敏度高，特异性好，实验结果肉眼可直观判断，无需配备仪器设备，3?5min内即可完成对猪尿中上述三种药物残留的测定。本技术试剂板由上下两块塑料模板和盐酸克伦特罗快速检测试纸条、莱克多巴胺快速检测试纸条、沙丁胺醇快速检测试纸条组成。每根试纸条均由底板以及底板上依次黏着的样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫所组成，相邻部分有I?2_的重叠区域。样品垫经过盐离子缓冲液及活性剂的浸泡干燥后，上面附着有盐离子及活性剂等物质。金标结合垫上分别包被有盐酸克伦特罗单抗-胶体金标记物、莱克多巴胺单抗-胶体金标记物和沙丁胺醇单抗-胶体金标记物。硝酸纤维素膜从样品垫到吸水垫方向依次喷有检测线和质控线，三种试纸条的检测线上分别包被有盐酸克伦特罗-载体蛋白偶联物、莱克多巴胺-载体蛋白偶联物、沙丁胺醇-载体蛋白偶联物，质控线上均包被有羊抗鼠IgG抗体。偶联盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的载体蛋白可为卵清蛋白(OVA)，牛血清白蛋白(BSA)，血蓝蛋白(KLH)等。本技术试剂板中所含的盐酸克伦特罗快速检测试纸条、莱克多巴胺快速检测试纸条、沙丁胺醇快速检测试纸条的反应原理相同。例如盐酸克伦特罗快速检测试纸条运用了胶体金标记技术、层析技术、竞争免疫技术，通过抗原和单抗-胶体金标记物反应显色，特异性检测猪尿中的盐酸克伦特罗药物残留水平。如果样品溶液中含有盐酸克伦特罗残留，则盐酸克伦特罗先和胶体金颗粒上的盐酸克伦特罗单抗反应，当胶体金颗粒随样品溶液扩散至检测线时，胶体金颗粒上盐酸克伦特罗单抗的活性位点因被样品溶液中的盐酸克伦特罗药物占据而无法与检测线上盐酸克伦特罗-载体蛋白偶联物结合；当样品中的盐酸克伦特罗含量超过试剂板检出限时，试剂板上的检测线无显色，判定为阳性。反之，当样品中盐酸克伦特罗含量在试剂板检出限以下或无残留时，试剂板上的检测线显色，判定为阴性。本技术试剂板的各部分成分和功能如下:塑料模板，起固定底板和标示各功能区(加样孔、检测区、质控区)的作用。底板，由一面涂有不干胶的聚氯乙烯(PVC)材料制成，起固定支撑试剂板其他组成部分的作用。样品垫，由玻璃纤维制成，起吸收样品溶液和缓冲样品溶液pH值的作用。金标结合垫，由玻璃纤维制成，为样品溶液中有效成分和单抗-胶体金标记物反应提供场所。硝酸纤维素膜，从样品垫到吸水垫方向上依次喷有检测线和质控线，将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。吸水垫，由滤纸制成，吸收反应过程中多余的溶液。本技术试剂板具有如下有益效果:(I)特异性好。本技术试剂板中，盐酸克伦特罗快速检测试纸条对盐酸克伦特罗的交叉反应率为100%，对如沙丁胺醇、莱克多巴胺等其他β-兴奋剂类药物的交叉反应率均低于1% ;莱克多巴胺快速检测试纸条对莱克多巴胺的交叉反应率为100%，对如沙丁胺醇、盐酸克伦特罗等其他β -兴奋剂类药物的交叉反应率均低于1%;沙丁胺醇快速检测试纸条对沙丁胺醇的交叉反应率为100%，对如盐酸克伦特罗、莱克多巴胺等其他β-兴奋剂类药物的交叉反应率均低于I %。可见，本技术试剂板对三种残留的检测各具有高度专一I生。(2)灵敏度高。本技术试剂板针对猪尿样品中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的检出限均为3.0ppb，适用于各类企业及检测机构。(3)操作简单快捷。本技术试剂板将反应所需的大部分原料整合到试纸条上，滴样后反应在固相膜上快速进行，3?5min内即可读取结果，可同时检测三种药物残留，大大缩短了检样时间。本试剂板的使用不需任何专业培训，普通人员均可操作。(4)不依赖于实验设备。本技术试剂板在直接滴样跑板后，通过肉眼判断硝酸纤维素膜上的检测线和质控线的颜色深浅来判读结果，整个检测过程不依赖任何实验设备，尤其适合于野外及现场操作，易于推广。(5)成本低，易推广。本技术试剂板生产工艺简单，可实现单个样本检测，生产成本低，大大降低了检测费用。【附图说明】图1为本技术试剂板中试纸条的侧面结构示意图。其中I为样品垫，2为金标结合垫，3为硝酸纤维素膜(NC膜)，4为检测线(T线)，5为质控线(C线)，6为吸水垫，7为不干胶，8为聚氯乙烯板(PVC板)。图2为本技术试剂板操作示意图，其中S为加样孔，C为质控区，T为检测区，I表示盐酸克伦特罗，2表示莱克多巴胺，3表示沙丁胺醇。图3为本技术试剂板结果判定示意图，其中C为质控区，T为检测区。具体实施方法本技术试剂板的制备包括半抗原-载体蛋白偶联物的制备，单抗的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能同时快速检测猪尿中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的免疫胶体金联合试剂板，其特征在于试剂板由上下两块塑料模板和盐酸克伦特罗快速检测试纸条、莱克多巴胺快速检测试纸条、沙丁胺醇快速检测试纸条组成，每根试纸条均由底板以及底板上依次黏着的样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫所组成，相邻部分有1～2mm的重叠区域。

【技术特征摘要】
1.一种能同时快速检测猪尿中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的免疫胶体金联合试剂板，其特征在于试剂板由上下两块塑料模板和盐酸克伦特罗快速检测试纸条、莱克多巴胺快速检测试纸条、沙丁胺醇快速检测试纸条组成，每根试纸条均由底板以及底板上依次黏着的样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫所组成，相邻部分有I?2_的重置区域。2.如权利要求1所述的试剂板，其特征在于盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇快速检测试纸条的硝酸纤维素膜从样品垫到吸水垫方向依次喷有检测线和质控线，检测线上分别包被有盐酸克伦特罗-载体蛋白偶联物、莱克多巴胺-载体蛋白偶联物、沙丁胺醇-载体蛋白偶联物，质控线上均包被有羊...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明元，张伯杰，董钰，王少峰，邵伟，王永滨，张玉生，齐东红，李淑英，潘建波，周略，张菊，赵霞，
申请(专利权)人：杭州南开日新生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：