一种检测喹乙醇代谢物残留的免疫胶体金试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种检测喹乙醇代谢物残留的免疫胶体金试剂盒，包括试剂板、5 mL离心管、50 mL离心管、滴管、喹乙醇代谢物复溶液、喹乙醇代谢物提取剂、喹乙醇代谢物净化剂及试剂盒使用说明书。试剂板由壳体、支撑层、反应膜及反应膜上方从样品端依次连接的样品垫、金标结合垫、吸水垫构成；提取剂分为喹乙醇代谢物提取剂A和喹乙醇代谢物提取剂B。与其它仪器分析方法相比具有准确度高、灵敏度高、成本低、易推广、检测效率高等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种检测喹乙醇代谢物残留的免疫胶体金试剂盒
本技术涉及动物源性食品快速检测领域，具体涉及一种检测喹乙醇代谢物残留的免疫胶体金试剂盒。
技术介绍
喹乙醇又称喹酰胺醇，商品名为倍育诺、快育灵，因其具有良好的广谱抗菌效果尤其是对大肠杆菌、沙门氏杆菌等革兰氏阴性致病菌所致的消化道疾病具有良好的治疗效果，并且有助于提高畜禽对饲料的转化率，提高生长速度等，因此常被用作饲料添加剂应用于饲料行业。随着喹乙醇的广泛应用，随之而来的是喹乙醇代谢物在动物体内的残留问题及安全问题。有研究表明喹乙醇有中度至明显的蓄积毒性，对大多数动物有明显的致畸作用，对人也有潜在的三致性，即致畸形，致突变，致癌。鉴于喹乙醇的毒性和潜在危害，人们对喹乙醇的安全性进行了重新评价，对喹乙醇的使用也做出了新的规定。美国和欧盟禁止使用喹乙醇作为饲料添加剂；我国农业部颁布的《动物性食品兽药最高残留限量》中对喹乙醇代谢物残留限量做出了规定。《中国兽药典》(2005版)也有明确规定，喹乙醇被禁止用于家禽及水产养殖。喹乙醇作为抗菌促生长剂，仅限用于35kg以下猪的促生长，以及防治仔猪黄痢、白痢，猪沙门氏菌感染，禁用于体重超过35kg以上的猪。目前的喹乙醇代谢物检测方法多为液相色谱-质谱/质谱法，该方法灵敏准确、特异性强，但是需要复杂昂贵的仪器，样品前处理过程繁琐，不适应现场大量样本的筛查，而且需要专业技术人员。基于抗原抗体免疫反应的免疫学检测技术为小分子残留物的分析检测提供了一个新的途径。该技术研究的关键是半抗原分子的设计、合成和人工全抗原及抗体的制备。因为喹乙醇代谢物是小分子化合物，本身没有免疫原性，必须将其与大分子载体蛋白偶联得到具有免疫原性的人工抗原。在此基础上建立起来的免疫胶体金试剂盒可快速、方便、准确的检测动物组织中的喹乙醇代谢物残留，可为建立监控动物源性食品中喹乙醇代谢物残留提供技术支持。
技术实现思路
本技术的目的是针对其它检测方法的不足，研制出一种准确度高、特异性强、快速、成本低、小巧轻便的检测喹乙醇代谢物残留的免疫胶体金试剂盒。为了实现上述目的，本技术的技术方案为：一种检测喹乙醇代谢物残留的免疫胶体金试剂盒，由试剂板、离心管、滴管、喹乙醇代谢物复溶液、喹乙醇代谢物提取剂、喹乙醇代谢物净化剂、试剂盒使用说明书组成。试剂板由上下塑料壳体、支撑层、反应膜及反应膜上方从样品端依次连接的样品垫、金标结合垫、吸水垫组成。所述支撑层由PVC板构成，反应膜由硝酸纤维膜或醋酸纤维素膜构成，样品垫及金标结合垫由玻璃纤维或聚酯膜构成，吸水垫由吸水滤纸构成。所述反应膜中间部位分别设有包被喹乙醇代谢物-牛血清蛋白偶联物的检测线（T线）及包被有羊抗鼠IgG的控制线（C线），金标结合垫包被有抗喹乙醇代谢物单克隆抗体-胶体金结合物。所述喹乙醇代谢物复溶液为PBS缓冲液、活性剂和防腐剂的混合物；喹乙醇代谢物提取剂A为酸类；喹乙醇代谢物提取剂B为乙酸乙酯；喹乙醇代谢物净化剂为正己烷。所述的喹乙醇代谢物复溶液中的活性剂可为金属氧化物、氢氧化物、碱式碳酸盐、脂肪酸类、胺类、皂类、多元醇和氨基醇等。所述的喹乙醇代谢物复溶液中的防腐剂为叠氮钠。所述离心管包括5mL离心管和50mL离心管，用作样品处理环节提取离心。喹乙醇代谢物复溶液、喹乙醇代谢物提取剂、喹乙醇代谢物净化剂用于样品的提取与纯化。所述试剂盒使用说明书对产品简介、产品组成、所需仪器、样品处理与检测、结果判读、注意事项、特异性、精密度、贮存条件、有效期进行了描述，用于为客户提供使用依据。本技术的优点在于：（1）每个试剂盒中含10个试剂板，携带的试剂足以测定10个样品，既能实现单个样本的检测，又能实现多个样本的连续检测。（2）本试剂盒的具有较高的灵敏度及准确度，与喹乙醇、喹烯酮、乙酰甲喹等药物无交叉反应。（3）本试剂盒仅需配备一般的设备就能完成对样品的定性或半定量检测，具有成本低、易推广等优点。（4）检测快速，从样品处理到结束检测时间不超过30min。附图说明图1为喹乙醇代谢物免疫胶体金试剂盒的试剂板剖面示意图，其中1为支撑层，2为反应膜，3为金标结合垫，4为吸水垫，5为检测线，6为控制线，7为样品垫；图2为喹乙醇代谢物免疫胶体金试剂盒的试剂板俯视图，其中S为加样孔，T为检测线，C为控制线。具体实施方式下面实施例是为了更好的解释本技术，但并不表示对本技术的特别限定。【实施例1】试剂板的制备方法（1）喹乙醇代谢物-牛血清蛋白偶联物的制备取20mL蒸馏水和0.5mL乙酸放入圆底烧瓶，混匀，加入0.5mmol酒石酸喹乙醇代谢物和0.5mmol对氨基苯乙酸。加热回流至溶液变黄后，将溶液转移到40℃鼓风干燥箱中干燥，将所得残渣用10mL乙醇溶解，并加入10mL乙酸乙酯，通过真空抽滤的方式获得液体中的黄色沉淀。用50mL乙酸乙酯分3次洗涤所得沉淀物，通过旋转蒸发仪除去乙酸乙酯，即可得到对氨基苯乙酸喹乙醇代谢物半抗原。称取对氨基苯乙酸喹乙醇代谢物半抗原0.0532g溶于4mLDMF中，加入三乙胺25µL混匀后加入氯甲酸异丁脂20µL，磁力搅拌反应1h，得到A液。将0.074g牛血清蛋白溶于2mL1mol/L的NaHCO3溶液中，混匀得到B液。将B液缓慢加到A液中，边加边搅拌，搅拌反应12h。将反应液转至透析袋中，生理盐水透析2天，每天换水3次。透析完毕，将透析液用0.22μm的滤膜过滤，-20℃保存。（2）抗喹乙醇代谢物单克隆抗体-胶体金结合垫制备胶体金溶液的制备：将100mL的0.1%H2AuCl4（氯金酸）加入200mL的锥形瓶中，于磁力搅拌器上搅拌加热至沸腾后向沸腾的溶液中加入1.5mL的0.1%二合水柠檬酸三钠溶液，当获得深红色的溶液时停止加热，冷却后储存备用。抗喹乙醇代谢物单克隆抗体-胶体金结合物制备：取胶体金溶液加入K2CO3调解pH至8.5，以15-30μg/mL加入抗喹乙醇代谢物单克隆抗体，磁力搅拌15min后加入终浓度为1%的牛血清蛋白，混匀后通过高速离心除去未结合的单克隆抗体及非稳定的胶体金颗粒，离心管底部的沉淀即为抗喹乙醇代谢物单克隆抗体-胶体金结合物。金标结合垫的制备：将抗喹乙醇代谢物单克隆抗体-胶体金结合物沉淀以含有1%牛血清单倍的磷酸盐缓冲液复溶后经点膜机喷涂至金标结合垫上，37℃干燥后密封保存。（3）反应膜的制备通过点膜机将适当浓度（1mg/mL）的喹乙醇代谢物-牛血清蛋白偶联物及羊抗鼠IgG按1μL/cm喷涂至反应膜的检测线和控制线上。检测线和控制线平行设置，间距0.5cm，室温干燥后密封干燥保存。（4）样品垫的制备将切割好的条带状样品垫浸泡在缓冲盐蛋白溶液中浸泡2h，彻底湿润后捞出于40℃左右烘干，烘干后密封备用。（5）试剂板组装将样品垫、金标结合垫、吸水垫、硝酸纤维素膜按照上述顺序依次黏贴在PVC支撑层上，用切割机切割成3-4mm的试纸，然后置于下壳体的固定槽中固定，并盖上上壳体，将组装好的试剂板置于含有干燥剂的铝箔袋中密封。【实施例2】实施例1中所述的试剂盒的使用方法（1）样品处理①取一定量的去脂肪组织样本，用均质机搅碎均匀；②称取2g匀质样本于50mL离心管中；③加入2mL喹乙醇代谢物提取剂A，剧烈振荡3min；④再加入6mL喹乙醇代谢物提取剂B（乙酸乙酯），上下颠倒混匀本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测喹乙醇代谢物残留的免疫胶体金试剂盒,包括试剂板、5 mL离心管、50 mL离心管、滴管、喹乙醇代谢物复溶液、喹乙醇代谢物提取剂、喹乙醇代谢物净化剂及试剂盒使用说明书,其特征在于试剂板由上下塑料壳体、支撑层、反应膜及反应膜上方从样品端依次连接的样品垫、金标结合垫、吸水垫构成；提取剂分为喹乙醇代谢物提取剂A和喹乙醇代谢物提取剂B。

【技术特征摘要】
1.一种检测喹乙醇代谢物残留的免疫胶体金试剂盒,包括试剂板、5mL离心管、50mL离心管、滴管、喹乙醇代谢物复溶液、喹乙醇代谢物提取剂、喹乙醇代谢物净化剂及试剂盒使用说明书,其特征在于试剂板由上下塑料壳体、支撑层、反应膜及反应膜上方从样品端依次连接的样品垫、金标结合垫、吸水垫构成；提取剂分为喹乙醇代谢物提取剂A和喹乙醇代谢物提取剂B。2.如权利要求1所述的检测喹乙醇代谢物残留的免疫胶体...

【专利技术属性】
技术研发人员：王伟萍，陈笑笑，王振国，陈青舟，胡叶军，罗南，
申请(专利权)人：杭州南开日新生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：浙江,33