本发明专利技术涉及一种基于纳米金标记的金黄色葡萄球菌可视化检测方法，将与金黄色葡萄球菌的目标DNA互补配对的且经巯基修饰的DNA1和DNA2分别与10~14纳米的纳米金连接制成DNA1-适配体探针和DNA2-适配体探针，用DNA提取试剂盒提取待测物中的DNA,然后将DNA1-适配体探针和DNA2-适配体探针混匀后，加入待测物中的DNA，混匀，在90~95℃热处理4~6分钟后，降温至37℃以下，在400~900纳米进行UV-vis扫描，即可实现对待测物中的金黄色葡萄球菌的定量检测。与现有技术相比，该方法灵敏度高、操作简单、成本低。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及，将与金黄色葡萄球菌的目标DNA互补配对的且经巯基修饰的DNA1和DNA2分别与10~14纳米的纳米金连接制成DNA1-适配体探针和DNA2-适配体探针，用DNA提取试剂盒提取待测物中的DNA,然后将DNA1-适配体探针和DNA2-适配体探针混匀后，加入待测物中的DNA，混匀，在90~95℃热处理4~6分钟后，降温至37℃以下，在400~900纳米进行UV-vis扫描，即可实现对待测物中的金黄色葡萄球菌的定量检测。与现有技术相比，该方法灵敏度高、操作简单、成本低。【专利说明】
本专利技术属于生物
，具体涉及。
技术介绍
金黄色葡萄球菌在自然界中广泛分布，可以引起食物中毒和胃肠炎等多种疾病。根据美国疾病预防与控制中心的统计，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒，占到整个细菌性食物中毒病例的33%，位居第二位，而加拿大则高达45%。传统的检测方法由于其操作复杂、特异性以及灵敏度不好的缺点，已经无法满足人们对于食品安全越来越高的要求了。因此，对于食品中金黄色葡萄球菌的快速、准确的检测，越来越引起人们的关注。传统的检测方法主要是应用国标法进行检测，但是国标法需要较长的时间才能得到准确的检测结果，无法满足快速检测的目的。目前快速检测金黄色葡萄球菌的方法主要有纸片法、免疫学方法、分子生物学方法和生物传感器检测法等四种方法。其中免疫学的方法主要有免疫荧光法(IFA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫沉淀法、免疫层析法、免疫磁珠法、免疫印迹技术等。分子生物学的方法主要包括PCR技术、基因芯片等。这些方法各有其优缺点，其中一些存在如成本较高、操作复杂、稳定性差等问题，一定程度上限制了其推广与应用。因此，非常有必要开发一种成本较低、操作简单、特异性强、灵敏度高、检测时间较短的金黄色葡萄球菌的检测技术。纳米金由于具有独特的光学、化学、电化学及催化性能，已被广泛应用于生物学和化学传感器的研究中。近年来，应用纳米金及纳米金的团聚对靶物质进行可视化检测的报道越来越多，这些靶物质主要包括一些食源性致病菌、毒素、金属离子、农药残留、食品非法添加剂等，纳米金除了在检测方面有着十分重要的应用外，在生命科学分析及癌症的诊断与治疗方面也有着非常广泛的应用。但是，到目前为止，还没有将纳米金用于金黄色葡萄球菌的检测`中。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种灵敏度高的基于纳米金标记的金黄色葡萄球菌可视化检测方法。为解决以上技术问题，本专利技术采取如下技术方案:，将与金黄色葡萄球菌的目标DNA互补配对的且经巯基修饰的DNAl和DNA2分别与10~14纳米的纳米金连接制成DNAl-适配体探针和DNA2-适配体探针，用DNA提取试剂盒提取待测物中的DNA，然后将所述的DNAl-适配体探针和DNA2-适配体探针混匀后，加入所述的待测物中的DNA，混匀，在90~95°C热处理4~6分钟后，降温至37°C以下，在400~900纳米进行UV-vis扫描，即可实现对待测物中的金黄色葡萄球菌的定量检测。具体地，所述的金黄色葡萄球菌的目标DNA序列为Y -CGA GGA TTT TCC MT GAGGTG GCC GA-3/ 。具体地，所述的DNAl的序列为Y SH-TCG GCC ACC TCA T-3 ^，所述的DNA2的序列为 5' -TGG AAA ATC CTC G-3' SH。具体地，所述的纳米金的制备方法包括依次进行的如下步骤:(I)用王水对容器进行浸泡，然后用超纯水对所述的浸泡后的容器进行清洗并烘干;(2)在所述的烘干后的容器中按体积比为100~125:1加入所述的超纯水和质量百分浓度为2~3%氯金酸溶液，搅拌均匀后煮沸8~12分钟，然后加入质量百分浓度为0.8~1.2%的柠檬酸三钠溶液，继续煮沸8~12分钟，其中所述的柠檬酸三钠溶液与所述的氯金酸溶液的体积比为10~13:1 ;(3)停止加热，继续搅拌12~18分钟，冷却至10~40°C，即得所述的纳米金。具体地，所述的超纯水的电阻率大于等于18.2ΜΩ.cm。具体地，所述的DNAl-适配体探针制备方法包括依次进行的如下步骤:(I)将所述的纳米金在3~5°C，13000~15000r/min离心30~40分钟后，吸出上清液；(2)将浓度为10_5mOl/L的DNAl加入到所述的上清液中，在35~40°C下摇床孵育20~30小时，形成纳米金-DNAl溶液，其中，所述的DNA1、上清液的体积比为1:45~55 ；(3)将十二烷基磺酸钠(SDS)加入到所述的纳米金-DNAl溶液中，然后再分多次加入0.8~1.2mol/L的NaCl，使所述的NaCl的终浓度达到0.3~0.4mol/L,每次加入所述的NaCl后，超声处理8~12秒；(4)将经步骤(3)处理后的纳米金-DNAl溶液在35~40°C陈化20~30小时；(5)将经步骤(4)陈化后的纳米金-DNAl溶液在3~5°C 13000~15000r/min离心30~40分钟，吸出上清液，再用IXPBS缓冲液溶解沉淀，如此重复离心多次，以去除未连接到纳米金上的DNA，即得所述的DNAl-适配体探针。具体地，所述的 I X PBS 缓冲液的配方为 0.lmol/L NaCl、IOmmoI/L Na2HPO4'IOmmoI/L NaH2PO4, pH 值为 7.4。具体地，所述的DNA2-适配体探针的制备方法包括依次进行的如下步骤:(I)将所述的纳米金在3~5°C，13000~15000r/min离心30~40分钟后，吸出上清液；(2)将浓度为10_5mOl/L的DNA2加入到所述的上清液中，在35~40°C下摇床孵育20~30小时，形成纳米金-DNA2溶液，其中，所述的DNA2、上清液的体积比为1:45~55 ；(3)将十二烷基磺酸钠(SDS)加入到所述的纳米金-DNA2溶液中，然后再分多次加入0.8~1.2mol/L的NaCl，使所述的NaCl的终浓度达到0.3~0.4mol/L,每次加入所述的NaCl后，超声处理8~12秒；(4)将经步骤(3)处理后的纳米金-DNA2溶液在35~40°C陈化20~30小时；(5)将经步骤(4)陈化后的纳米金-DNA2溶液分别在3~5°C 13000~15000r/min离心30~40分钟，吸出上清液，再用I XPBS缓冲液溶解沉淀，如此重复离心多次，以去除未连接到纳米金上的DNA，即得所述的DNA2-适配体探针。具体地，所述的I X PBS 缓冲液的配方为 0.lmol/L NaCl、IOmmoI/L Na2HPO4'IOmmoI/L NaH2PO4, pH 值为 7.4。具体地，所述的DNAl-适配体探针、DNA2-适配体探针、待测物中的DNA的体积比为 1:1:4 ~10。检测原理:DNA1、DNA2和金黄色葡萄球菌的目标DNA是完全互补配对的，当检测体系中出现金黄色葡萄球菌的目标DNA时，DNAU DNA2就会与金黄色葡萄球菌目标DNA杂交在一起，从而使纳米金之间的距离拉近，由于纳米金的颜色具有光距离依赖特性，因此就会引起纳米金颜色的变化；目标DNA浓度不同，纳米金聚集的程度也就不同，从而导致纳米金溶液呈现出不同颜色的变化，由此实现金黄色葡萄球菌的可视化检测。由本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于纳米金标记的金黄色葡萄球菌可视化检测方法，其特征在于：将与金黄色葡萄球菌的目标DNA互补配对的且经巯基修饰的DNA1和DNA2分别与10～14纳米的纳米金连接制成DNA1?适配体探针和DNA2?适配体探针，用DNA提取试剂盒提取待测物中的DNA,然后将所述的DNA1?适配体探针和DNA2?适配体探针混匀后，加入所述的待测物中的DNA，混匀，在90～95℃热处理4～6分钟后，降温至37℃以下，在400～900纳米进行UV?vis扫描，即可实现对待测物中的金黄色葡萄球菌的定量检测。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：俞晔，王周平，袁京磊，杜国兴，周强，王玥，
申请(专利权)人：中华人民共和国张家港出入境检验检疫局，江南大学，
类型：发明
国别省市：
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