用于测定HE4a的组合物和方法技术

本发明专利技术包括HE/HE4a标志物用于评估受试者的卵巢癌的用途。还包括使用HE/HE4a标志物进行卵巢癌的诊断、分级和分期、以及确定已经诊断出具有卵巢癌的受试者的预后和治疗有效性的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术包括HE/HE4a标志物用于评估受试者的卵巢癌的用途。还包括使用HE/HE4a标志物进行卵巢癌的诊断、分级和分期、以及确定已经诊断出具有卵巢癌的受试者的预后和治疗有效性的组合物和方法。【专利说明】本专利技术包括用于疑似患有和/或罹患卵巢癌的受试者的检测、诊断、分级、分期、预后以及预测和监测所述受试者的治疗应答性的组合物和方法。也公开了通过确定全长HE4a在得自患者的样品中的存在来检测卵巢癌的免疫测定、结合剂和抗体和方法。
技术介绍
WFDC2 (HE4/HE4a)基因产物是稳定的4_ 二硫键核心蛋白家族的一个成员。HE4是一种首先在人附睾组织中观察到的分泌型糖基化蛋白(人附睾蛋白4;HE4)，且在某些癌症(包括卵巢癌)中过表达。HE4/HE4a蛋白和核酸的表征已经被报道在，例如，KirchhoffC，Habben I,Ivell R, KrulI N(Mar1992).“A major human epididymis-specificcDNA encodes a protein with sequence homo logy to extracellularproteinase inhibitors”.Biol Reprod45 (2):350 - 7Schummer M, Ng WV, BumgarnerRE, Nelson PS,Schummer B,Bednarski DW, Hassell L,Baldwin RL,Karlan BY,HoodL (Decl999).“Comparative hybridization of an array of 21,500ovarian cDNAs forthe discovery of genes overexpressed in ovarian carcinomas，，.Gene238 (2):375 -85;Kirchhoff C (1998).“Molecular characterization of epididymal proteins.^Rev.Reprod.3 (2): 86 - 95.; Kirchhoff C, Osterhoff C, Habben I,等人.(1990).“Cloningand analysis of mRNAs expressed specifically in the human epididymis.，，Int.J.Androl.13(2):155 - 67; Hellstrom I,等人;Cancer Res.2003Jull; 63 (13): 3695-700。HE4/HE4a在癌细胞中的过表达提示，该蛋白和它的各种异形体可以作为用于检测癌症和用于鉴别具有增加的罹患癌症的可能性的患者的有用生物标志物。以前已经报道了与例如HE4/HE4a等分子标志物的应用有关的方法和组合物，包括US7270960、US20100311099、US20080020473、US20070286865、US20100047818、US20090104684 和 US20030108965，它们中的每一篇的内容整体并入本文中。已经报道，由于选择性剪接以及不同糖基化模式所导致的不同糖型，HE4/HE4a蛋白具有不同的异形体。考虑到上述内容，本领域需要能够检测生物标志物例如HE4a、它们的变体、剪接异形体和糖型的过表达来诊断癌症的组合物和结合剂(例如抗体)。
技术实现思路
本专利技术包括用于诊断受试者的卵巢癌和用于鉴别具有增加的罹患卵巢癌的可能性的受试者的组合物和方法。所述组合物包括特异性地结合在卵巢癌上过表达的HE4/HE4a的可溶性形式和细胞表面形式的单克隆抗体、它们的变体和片段。还提供了具有公开的HE4a抗体的结合特征的单克隆抗体。还公开了生产HE4/HE4a单克隆抗体的杂交瘤细胞系。公开的组合物可以用于诊断方法中以及用于鉴别具有增加的罹患卵巢癌的可能性的受试者的筛选方法中。具体地，诊断方法可以包括免疫组织化学(IHC)测定或双夹心ELISA测定。还提供了试剂盒，其包括一种或多种公开的HE4a单克隆抗体，并用于实现本专利技术的方法。还公开了包含HE4a表位的氨基酸序列的多肽和在抗体的生产中使用这些多肽的方法。【专利附图】【附图说明】图1解释了包含HE4a结构域和人/小鼠IgG的一个示例性的HE4a融合蛋白实施方案。图2解释了单克隆抗体实施方案(12A2和14E2抗体)对全长HE4a、HE4a的HE4a-V4和HE4a_V2结构域的一些结合特异性。在该实施例中，MAbl2A2和14E2与HE4a_V4变体和与全长HE4a结合，但是不与HE4a-V2结构域结合。这表明，12A2和14E2MAb与HE4aN-WFDC结构域结合。图3描绘了参照单克隆抗体(2H5和3D8抗体)对融合蛋白的结合特异性。在该实施例中，参照MAb与HE4a-V2结构域和与全长HE4a结合，但是不与HE4a_V4结构域结合，这表明，它们识别HE4a C-WFDC结构域中的表位。图4显示了 HE4a核苷酸和肽序列；包括N-WFDC和C-WFDC HE4a结构域。图5解释了示例性的单克隆抗体(12A2)与N-WFDC和C-WFDC的结合相互作用。在该实施例中，使用噬菌体ELISA形式证实了 12A2的结合特异性，其中所述MAb仅与HE4aN-WFDC噬菌体pVIII融合蛋白反应。图6描绘了 14E2MAb与变性的和还原的HE4a_hIg融合蛋白的反应性。与变性的和还原的HE4a-hIg融合蛋白的结合指示，14E2MAb会识别HE4a蛋白的线性表位。图7显示了使用14E2作为捕获MAb和使用3D8或12A2MAB作为检测MAb的夹心免疫测定的剂量响应曲线。14E2和12A2MAb的组合的结果指示，它们能够同时结合，并从而检测HE4a N-WFDC结构域的独立表位。图8解释了与2H5MAb组合的12A2和14E2MAb的一些实施例夹心免疫测定和结合。在该实施例中，MAbl2A2和14E2仅与全长HE4a反应，而MAb组合3D8和2H5与FL HE4a和HE4a-V2变体二者反应。结果进一步证实:12A2和14E2MAb会识别在HE4a N-WFDC结构域中暴露的表位。图9显示了全长HE4a EIA的剂量响应曲线。该测定是基于2H5MAb作为捕获抗体和HRP缀合的12A2MAb作为检测MAb。如在实施例3中所述进行操作。图10描绘了健康受试者、具有良性妇科疾病的患者和在FL HE4a EIA (如在实施例3中所述)中确定具有卵巢癌的患者的HE4a水平。图11解释了用于监测卵巢癌的临床进程的一个示例性的全长HE4a免疫测定(SD=稳定疾病；R=应答；PD=进行性疾病)。在该实施例中，全长HE4a证实，全长HE4a可用于跟踪具有确诊的卵巢癌的患者的疾病的临床进程。图12.解释了使用对HE4a Ν-ffFDC结构域特异性的示例性MAb的良性和恶性卵巢组织的IHC。在该实施例中，示例性的12A2MAb强烈地结合卵巢癌中的癌细胞，但是没有结合良性肿瘤中的细胞。A:浆液性腺癌；B:浆液性腺癌；C:子宫内膜样卵巢癌；D:浆液性腺癌；E:纤维瘤；F:纤维卵泡膜细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：因格戈尔德·赫尔斯特罗姆，卡尔埃里克·赫尔斯特罗姆，约翰·瑞克瑞夫特，克里斯汀·费尔默，伊娃·罗耶，
申请(专利权)人：富士瑞生物诊断公司，
类型：
国别省市：