基于来自恶性疟原虫的红细胞前期抗原的疟疾疫苗制造技术

本发明专利技术涉及用作疟疾疫苗的多肽或其片段。其还涉及编码本发明专利技术的多肽的核酸分子。其进一步涉及包含这些多肽或其片段或核酸分子、特别是这些多肽或其片段的组合的组合物，以及这些组合物作为疟疾疫苗的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于来自恶性疟原虫的红细胞前期抗原的疟疾疫苗本专利技术涉及用作疟疾疫苗的多肽或其片段。其还涉及编码本专利技术的多肽的核酸分子。其进一步涉及包含这些多肽或其片段或核酸分子、特别是这些多肽或其片段的组合的组合物，以及这些组合物作为疟疾疫苗的用途。专利技术背景疟疾是感染性疾病，通过来自疟原虫寄生虫的感染性子孢子经由疟蚊叮咬的接种传播。全球目前估计每年有5亿疟疾病例，并且在流行地区，如撒哈拉以南的非洲每年在1-3百万人中感染是致命的。受影响最严重的是5岁以下的儿童，其中疾病包括几种综合症，例如急性呼吸疾病，严重贫血或脑型疟疾。导致人类疟疾最严重的形式的寄生虫，恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)的生命周期是复杂的和多方面的，具有宿主组织内的局部差异和对应差异的抗原表达的不同形态。子孢子接种后，寄生虫转化并在专性、临床无症状和单向阶段中在肝脏中扩增(Prudenco等，2006)。膜包裹的裂殖子(merozoite)(称为裂殖体)的包装的释放标志着疟疾的发生(Sturm等，2006)，尽管典型地通过其发烧和畏寒的循环模式被识别的疟疾的症状和病理学，专门是在红细胞内疟原虫寄生虫的快速无性繁殖阶段期间导致的(Haldar等，2007)。因此，只有靶向红细胞前期的预防性治疗具有预防疾病并提供有效保护的潜力。用伽马辐射的恶性疟原虫子孢子(RAS)对人和啮齿动物的接种是仅有的赋予基本上完全保护的实验性疫苗，并且是针对蚊传播的疟疾传播的保护性免疫的金标准(Nussenzweig等，1967；Hoffman等，2002)。辐射破坏寄生虫遗传指令(repertoire)并且寄生虫停滞在肝脏中，在那里它们感染后持续至多达6个月(Silvie等，2002)。但是，这些寄生虫在基因上是不明确的，并且直到今天，仅限于实验研究中。然而，此模型提供下列原理论证(proof-of-principle)：基于通过辐射获得的随机的基因减毒，人类中的无虫免疫(sterileimmunity)是可能的。近期工作在啮齿动物模型中通过基因减毒的寄生虫(GAPs)已引发了无虫免疫(Mueller等，2005a/b；vanDijk等，2005；Tarun等，2007；Aly等，2008；Silvie等，2008)。这些GAPs停滞在早期肝脏阶段并赋予持续的和阶段特异性的免疫(Mueller等，2007；Jobe等，2007)。基于基因减毒的寄生虫的疟疾接种的挑战取决于将在啮齿动物疟疾模型中获得的结果到人疟疾的转化。这已经通过破坏恶性疟原虫中的p52成功进行，所述p52是啮齿动物寄生虫基因p36p的直向同源物，最近已显示其诱发针对子孢子引起的疟疾的无虫免疫(sterilisingimmunity)(vanSchaijk等，2008；vanDijk等，2005；VanBuskirk等，2009)。赋予对减毒子孢子抗性的免疫机制被认为是依赖于免疫系统的体液和细胞武器两者。细胞凋亡的RAS感染的肝细胞导致疟原虫抗原到树突细胞的递呈，有可能引发赋予保护的免疫应答(Leiriao等，2005)。基本上，已认为保护依赖于作为细胞毒性效应细胞的CD8+T细胞(White等，1996；Bongfen等，2007)和为抗体和最佳记忆CD8+细胞毒性T淋巴细胞活性提供帮助的CD4+T细胞(Carvalho等，2002)。无虫免疫在不存在CD8+T细胞的情况下可以获得，其仅仅由CD4+T细胞和II类效应机制介导(Oliveira等，2008)。有趣的是，已经描述了最近发表的模型，其中磷酸伯氨喹，一种专门靶向疟原虫肝脏阶段的药物，不存在对这样的CD8+T细胞应答必不可少的持续的代谢活跃肝脏阶段的情况下，已经被用于在体内引发针对随后的子孢子诱导的啮齿动物疟疾的疫苗样保护性免疫(Putrianti等，2009)。并且，野生型寄生虫连同预防化学治疗(例如氯喹)的使用导致对恶性疟原虫的保护性免疫(Roestenberg等，2009)。然而，已表明，长期持续的RAS的形式经由MHCⅠ类递呈寄生虫抗原，其诱导被感染的肝细胞的基于IFN-γ的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)产生(Klotz等，1995)。环子孢子蛋白(CSP)，子孢子主要的表面蛋白，历来被认为是与疟原虫肝脏阶段相关的主要抗原和疫苗候选。到目前已鉴定了几个CSP衍生的T细胞表位，一些与非常高水平的保护相关，如通过用正常子孢子攻击免疫的小鼠后肝脏阶段载量的减少所测量的。RTS,S/AS02A是基于恶性疟原虫CSP的红细胞前期疫苗候选，由葛兰素史克(GSK)和健康适用技术组织(PATH)的疟疾疫苗行动(malariavaccineinitiative，MVI)项目之间合作开发。但是，其结果相当令人失望，具有40和60%之间的效力(Alonso等，2004；Alonso等，2005；Bejon等，2008，Epstein等，2011)。这样的部分保护表明，CSP可能不是减毒模型中唯一的保护性抗原。的确，没有在C57Bl/6小鼠中描述的CSP表位，虽然在Balb/c中存在众所周知并表征的T细胞表位。有趣的是，最近的研究(其采用表达异源恶性疟原虫CSP的伯氏疟原虫(P.berghei)寄生虫系)表明，无虫免疫可以在不存在CSP特异性免疫应答的情况下获得，并且得出结论，迄今尚未被表征的抗原，而不是CSP，可能被靶向以诱导无虫免疫(Grüner等等，2007；Mauduit等，2010)。本专利技术的一个目的是提供用于有效疟疾疫苗的手段。更具体地，本专利技术的一个目的是鉴定新的肝脏阶段抗原，其是保护性的(即，对免疫是关键的)，并从而可以用于接种。专利技术概述根据本专利技术，此目的通过组合物解决，所述组合物包含至少两种多肽，所述多肽选自包含SEQIDNO.1-18的氨基酸序列的多肽和与任何上述多肽至少80％相同的多肽，优选进一步选自包含SEQIDNO.19-23的氨基酸序列的多肽和与任何上述多肽至少80％相同的多肽，或包含上述多肽的至少两种片段。根据本专利技术，此目的通过组合物解决，所述组合物包含至少两种核酸分子，所述核酸分子每种编码至少一种根据本专利技术的多肽或其片段，优选具有选自SEQIDNO.41-63，更优选SEQIDNO.41-65的核苷酸序列。根据本专利技术，此目的通过提供本专利技术的组合物解决，其用作疟疾疫苗，优选用作模拟疟疾活的减毒生物体的亚单位疟疾疫苗或多成分疟疾疫苗。根据本专利技术，此目的进一步通过包含选自SEQIDNO.1-23的氨基酸序列的多肽，和与任何上述多肽至少80%相同的多肽，或其片段来解决，其用作疟疾疫苗，优选用作模拟疟疾活的减毒生物体的亚单位疟疾疫苗或多成分疟疾疫苗。根据本专利技术，此目的进一步通过上述多肽的片段解决，所述片段包含或具有选自SEQIDNO.26-36的氨基酸序列，其用作疟疾疫苗，优选用作模拟疟疾活的减毒生物体的亚单位疟疾疫苗或多成分疟疾疫苗。根据本专利技术，此目的进一步通过编码至少一种根据本专利技术的多肽或其片段的核酸分子解决，所述核酸分子优选具有选自SEQIDNO.41-63的核苷酸序列，其用作疟疾疫苗，优选用作模拟疟疾活的减毒生物体的亚单位疟疾疫苗或多成分疟疾疫苗。本专利技术优选实施方案的描述在下文更详细的描述本专利技术之前，应本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.12.06 US 61/4199061.包含至少两种多肽的组合物，所述多肽选自由下列氨基酸序列组成的多肽：SEQIDNO.1，SEQIDNO.2，SEQIDNO.3，和SEQIDNO.4。2.权利要求1的组合物，进一步包含由下列氨基酸序列组成的多肽：SEQIDNO.5，SEQIDNO.6，SEQIDNO.7，SEQIDNO.8，SEQIDNO.9，SEQIDNO.10，SEQIDNO.11，SEQIDNO.12，SEQIDNO.13，SEQIDNO.14，SEQIDNO.15，SEQIDNO.16，SEQIDNO.17，和SEQIDNO.18。3.权利要求1或2的组合物，进一步包含由下列氨基酸序列组成的多肽：SEQIDNO.19，SEQIDNO.20，SEQIDNO.21，SEQIDNO.22，和SEQIDNO.23。4.权利要求1或2的组合物，进一步包含分别为以下氨基酸序列的恶性疟原虫Ferlin和恶性疟原虫Ferlin样蛋白：SEQIDNO.24，和SEQIDNO.25。5.权利要求1或2的组合物，其包含所述多肽中的至少3种。6.权利要求1或2的组合物，其包含所述多肽中的至少4种。7.权利要求1或2的组合物，其包含所述多肽中的至少5种。8.权利要求1或2的组合物，其包含所述多肽中的至少6种。9.权利要求1或2的组合物，其包含所述多肽中的至多达23种。10.权利要求1或2的组合物，进一步包含由下列氨基酸序列组成的多肽：SEQIDNO.15，和SEQIDNO.24。11.组合物，其包含至少两种肽，其中所述肽选自由下列氨基酸序列组成的肽：SEQIDNO.26，SEQIDNO.27，SEQIDNO.28，SEQIDNO.29，SEQIDNO.30，SEQIDNO.31，SEQIDNO.32，SEQIDNO.33，SEQIDNO.34，SEQIDNO.35，和SEQIDNO.36。12.权利要求11的组合物，其进一步包含选自由下列氨基酸序列组成的肽的片段：SEQIDNO.37，SEQIDNO.38，SEQIDNO.39，和SEQIDNO.40。13.权利要求11或12的组合物，其进一步包含选自由下列氨基酸序列组成的肽的片段：SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：J普法伊尔，K海斯，AK米勒，
申请(专利权)人：马尔瓦有限责任公司，
类型：
国别省市：