制备低表达血型抗原红细胞的方法及其在血型试剂质量控制中的应用技术

采用至少一个优势免疫糖修饰化酶制备低表达血型抗原的红细胞的方法，如Ｎ－乙酰半乳糖胺酶或α－半乳糖苷酶。应用本方法制备的红细胞所表达的抗原实质上只达到临床上所能检测到的抗原水平的阈值。应用本方法所制备的红细胞可以应用于血型试剂的质量控制和测试系统的校正，从而精确和标准化地判断血型。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
该项专利技术涉及血型抗原表达水平改变的细胞。特别是，该项专利技术涉及到这些细胞的制备及其在血型试剂的质量控制和血液学、免疫血液学和免疫学分析的校正和确认。
技术介绍
血液中心的功能是检测血液以准确判断个人的血型。对于血型的准确和精确的判断对于多项治疗是必需的，包括输血，器官移植和治疗新生儿的遗传性溶血。例如，一名病人在接受输血前必需知道其血型。献血者和受血者的血型的错配将会产生严重的后果，甚至会导致受血者的死亡。在输血血清学中，ABO血型分类是红细胞血型分类中最重要的一种分类方法。人的血型主要被分成四种血型A，B，AB和O型。每种血型的红细胞分别携带A抗原，B抗原，A抗原和B抗原，既无A抗原也无B抗原。在每个人的血液中，存在抗ABO血型抗原或红细胞中缺少的抗原的抗体。因此，A型血的人血中含有抗B抗原的抗体，B型血的人血中含有抗A抗原的抗体，O型血的人血中含有抗A抗原和B抗原的抗体，AB型血的人血中既无抗A抗原的抗体也无抗B抗原的抗体。在从献血者向受血者输血前，必须进行交叉配血。交叉配血是通过直接检测献血者血液对受血者血清的排异性，或者是根军献血者和受血者血型的记录进行配对。交叉配血需要保证一种血型的红细胞不能供给对该血型的抗原可以产生抗体的个人。从历史上看，直接测试献血者红细胞对受血者血清排异性的交叉配血可以检测出微弱亚型的错误测定和试图给不相容的受体输血之间的不相容性。然而，现在直接测试的交叉配血方法在大部分血液中心很少用到，取而代之的是依赖于血型的正确记录。在血型血清学中，红细胞的测定是采用含有针对特异抗原的抗体的试剂(正向分组)，测定血清对表达已知抗原的红细胞的排异性(反向分组)。从20世纪80年代开始，单克隆抗体(Mabs)已经被用于血型测定试剂中。与传统的多克隆抗血清相比，单克隆试剂提供了更高的特异性，更加一致的反应性，而且大部分情况下可以提高灵敏度。血型试剂的质量控制对于血型测定的准确性和可信性是必须的。血型试剂会在运输和储存过程中出现特异性和/或灵敏性的降低，或者是在制备和使用过程中造成的污染。在人类中，有各种表达低水平A抗原和/或B抗原的ABO亚型。各亚型中抗原的表达水平差异很大，通常如果没有广泛的分析不易查明。大多数A型血和稀有的A亚型的抗原水平通常在以下范围内是可以被接受的(每个红细胞的抗原分子数)A1，8×105到1.2×106；A2，1.5×105到4×105；A3，4×104到1.2×105；Ax，7×103到104；Aend，2×103到3×103；Am，102到2×103；Ael，102到1.5×103. B亚型也有相应的抗原表达水平。血型试剂应该能够检测所有临床上显著的ABO亚型。从质量控制的目标出发，血型试剂用来测定红细胞。因此抗原水平表达低的红细胞更适合用作“质量控制细胞”(或者“标准试剂”)。抗原表达水平低的红细胞适合用于血型测定分析，因为这种红细胞可以提供更多多克隆抗体试剂可能行为的信息。这些红细胞可以用作质量控制细胞，用来测定试剂的变化，这种变化会导致不能检测表达低水平抗原的血液亚型的红细胞，例如A2型的红细胞表达抗原的水平处于趋向于可接受范围的低端，从而导致血型检测的错误发生。这些红细胞还可以用来校正和确认检测系统，以保证所有临床意义的ABO血型和亚型可以被检测。实际上，用表达低水平A抗原和/或B抗原的天然的ABO亚型的红细胞作为质量控制细胞是很困难的。人群中具有这样表型的比例很低。例如据估计，Ax血型的个人是A型血个人数量的0.003％。其他亚型的在人群中的比例还要低。在那些不表达低水平抗原的细胞中，血型测定试剂是这样评价的测定对正常细胞的排异性。(这包括使用表达相对高水平抗原的红细胞，但这一方法缺乏灵敏度)；或稀释血型测定试剂。(这包括稀释血型测定试剂和测定其对正常细胞的排异性)。很多实验室仅依赖于对测定试剂供应商的质量控制。血型测定试剂的评价普遍是采用血型测定试剂稀释的方法。然而，实验室只能以每周或每月为周期分批检测血型测定试剂。稀释血型测定试剂和检测对正常细胞的排异性的方法并不可靠。正常细胞表达高水平的抗原，例如，每个红细胞的抗原分子数大于1.5×105。当检测血型测定试剂时，这些试剂被稀释至较低的稀释度，仍可以与红细胞作用，从而产生血清阳性的结果。用外推法处理这些结果以判断正常稀释度下的抗原表达水平。这一方法除了耗费时间这一缺点之外，该方法还作了以下的假定血型测定试剂预测的灵敏度可以扩大至测定表达低水平抗原的红细胞。除非血型测定试剂的真正的灵敏度刚好下降到测定一些ABO亚型所需的阈值，否则试剂的变质无法被检测到。测定这种程度的试剂的变质只可能出现在更进一步耗时的稀释实验的完成。应该指出的是，多克隆抗体试剂经常是双克隆和具有特异性能的特点。众所周知，在测定ABO亚型方面，某些克隆比其他的更好。因此，试剂经常以混合物的形式出现。当血型测定试剂被稀释时，其内在的行为特点将不起作用。当缺少可信的血型测定试剂时，实验室常依赖于制造商的说明书和试剂的以往的表现。当缺少可靠的血型测定试剂的质量控制时，血型测定是用变质的试剂，而且临床上显著区别的亚型可能会被错误的测定。这种试剂变质时，无法检测抗原表达水平位于可接受范围低端的亚型的红细胞。如果用于输血，这种血液将导致或轻或重的输血反应，包括受血者可能出现死亡。显而易见，需要一种可信的表达低水平抗原的红细胞作为质量控制细胞。血型测定试剂的可靠的质量控制和测定系统的校正以保证准确和标准化的判断血型，对于使受血者的危险性降低至最小程度是必须的。缺乏大量输血经验的多技能的技术人员更加需要这种方法。可靠的测定可信度的增加比对于测定试剂过往表现的了解更重要。这一专利技术的目的是提供用于血型测定试剂质量控制和测定系统的校正和确认的红细胞，或者是至少为公众提供一个有用的选择。参考文献Davis，M.O.et al.Cloning，sequence，and expression of a blood group Bactive recombinant alpha-D-galactosidase from pinto ean(Phaseolus vulgaris).Biochem.Mol.Biol.Int.42.3(1997)453-67. Goldstein，J.Conversion of ABO blood groups.Transfus.Med.Rev.3(1989)206-12Goldstein.J.et al.Group B erythrocytes enzymatically converted togroup O survive normally in A，B，and O individuals.Science 215(1982)168-70. Hobbs，L.et al.The activity of a blood type B specific exoglycosidasefrom Glycine max.Clin.Chim.Acta 247.1-2(1996)7-21. Hoskins，L.C.et al.Blood group A immunodeterminants on human red本文档来自技高网...

【技术保护点】
作为质量控制细胞的表达低水平抗原的红细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬迈克尔亨利，丽莎格威妮丝吉利佛，
申请(专利权)人：科德生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：NZ[]