液相色谱法用柱和血红蛋白类的分析方法技术

本发明专利技术的目的在于，提供能够廉价地制造、并能够抑制来自生物体的成分的非特异吸附的液相色谱法用柱。此外，本发明专利技术的目的还在于，提供使用该液相色谱法用柱的血红蛋白类的分析方法。本发明专利技术是一种液相色谱法用柱，其具有柱管和末端接头，所述柱管和所述末端接头由聚乙烯或者聚甲基丙烯酸甲酯制成。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术的目的在于，提供能够廉价地制造、并能够抑制来自生物体的成分的非特异吸附的液相色谱法用柱。此外，本专利技术的目的还在于，提供使用该液相色谱法用柱的血红蛋白类的分析方法。本专利技术是一种液相色谱法用柱，其具有柱管和末端接头，所述柱管和所述末端接头由聚乙烯或者聚甲基丙烯酸甲酯制成。【专利说明】
本专利技术涉及液相色谱法用柱。此外，本专利技术涉及使用该液相色谱法用柱的血红蛋白类的分析方法。
技术介绍
在有机化学、生物化学、医学等领域中，在样品中的成分测定或分析中广泛使用液相色谱法。例如，在医学领域中，在测定作为糖尿病诊断指标的血红蛋白Alc时使用液相色谱法。血红蛋白Alc为血液中的糖与血红蛋白的β链N末端化学结合的糖化血红蛋白，可以说血红蛋白类中血红蛋白Alc的比例、即糖化血红蛋白相对于糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白的合计的比例反映了 I?2个月期间的血糖平均值。表示血红蛋白类中血红蛋白Alc比例的血红蛋白Alc值(％)与血糖值不同，并不是表示一时的变动，因此，作为糖尿病诊断的指标被广泛使用。以往，作为在高效液相色谱中使用的柱，主要使用耐压性优良的不锈钢制的柱。但是，如果使用不锈钢制的柱测定蛋白质、核酸、糖类等来自生物体的试样，则会在柱内面上非特异地吸附来自生物体的成分，会对分析产生不好的影响。特别是，如果在血红蛋白Alc分析时发生对柱内面的非特异吸附，则无法获得正确的测定值，因此成为较大的问题。因此，如专利文献I中公开的那样进行利用硅酮树脂等的涂覆处理是有必要的。此外，专利文献2中，公开了使用以聚醚醚酮(PEEK)为代表的强度(耐压性)优异的工程塑料的柱。如果使用这样的柱，则能够抑制来自生物体的成分的非特异吸附。但是，以PEEK为代表的工程塑料具有价格昂贵的缺点。因此，期待能够廉价地制作、并能够抑制来自生物体的成分的非特异吸附的柱。现有技术文献专利文献专利文献1:日本特开2000-131302号公报专利文献2:日本特开平6-229999号公报
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供能够廉价地制作、并能够抑制来自生物体的成分的非特异吸附的液相色谱法用柱。此外，本专利技术的目的在于，提供使用该液相色谱法用柱的血红蛋白类的分析方法。用于解决问题的手段本专利技术是一种液相色谱法用柱，其具有柱管和末端接头，上述柱管和上述末端接头由聚乙烯或聚甲基丙烯酸甲酯制成。以下对本专利技术进行详细描述。为了抑制来自生物体的成分向柱内面的非特异吸附，来进行正确的测定，考虑使构成柱的材料为疏水性高的材料(具体而言，水的接触角为90°以上)。但是，实际上制作由疏水性高的材料制成的柱并进行血红蛋白类等的试样的测定时，有时分离性能根据材料而发生劣化。此外，当使用疏水性比较低的材料制作出的柱时，在用于血红蛋白类等试样的测定的情况下，也能够良好地分离检出测定对象。因此，认为构成柱的材料的疏水性程度未必会影响血红蛋白类等的分离性能。因此，本专利技术人未局限于疏水性的程度，而是对各种材料进行了深入研究，结果发现在使用聚乙烯或聚甲基丙烯酸甲酯作为柱管和末端接头的材料时，能够廉价地制作出抑制了来自生物体的成分的非特异吸附、且可以进行正确测定的液相色谱法用柱，从而完成了本专利技术。本专利技术的液相色谱法用柱(以下，也称作“本专利技术的柱”)具有由聚乙烯或聚甲基丙烯酸甲酯制成的柱管和末端接头。不仅是疏水性高的聚乙烯，即使在使用了疏水性低的聚甲基丙烯酸甲酯的情况下，也可抑制来自生物体的成分的非特异吸附，能够进行正确的测定。此外，聚乙烯和聚甲基丙烯酸甲酯为常用的树脂，因此本专利技术的柱能够廉价地制作，可以进行焚烧处理，因此易于废弃。使用由聚乙烯或聚甲基丙烯酸甲酯制成的柱时，对来自生物体的成分的非特异吸附进行抑制的效果，特别是在血红蛋白类的测定中得以显著地发挥。即，使用本专利技术的液相色谱法用柱，在特定的压力条件下进行测定，由此不会发生柱的破损或者漏液等不良情况，能够以高分离性能分析血红蛋白类。作为本专利技术柱的制造方法，可以举出例如注射成型，挤出成型，切削加工等。此外，柱管和末端接头的形状没有特别限定。作为连接柱管和末端接头的方式，可以列举例如套圈(7 二 5 >)式，拧入式等。在本专利技术的柱中充填充填剂粒子后，通过在规定条件下向柱中送液洗脱液和测定试样，从而对试样进行测定。特别是，当测定血红蛋白类时，在柱管和末端接头使用由聚丙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯等制成的柱的情况下，容易发生对柱内面的非特异吸附，而在使用本专利技术的柱的情况下能够抑制对柱内面的非特异吸附，因此能够以高分离性能分析血红蛋白类。使用本专利技术柱的血红蛋白类的分析方法也是本专利技术的一个方面。本专利技术的血红蛋白类的分析方法中使用的液相色谱可以通过在具备洗脱液送液用泵、检测器等的公知液相色谱上，连接充填有充填剂粒子的本专利技术的柱而构成。在本专利技术的血红蛋白类的分析方法中，分析时柱的通液压力由充填剂粒子的粒径或粒度分布、柱内径、柱长度、洗脱液的流速等来决定。因此，由于其压力不能唯一地确定，因而只要在能够获得所期望的分离性能的范围内适当调整即可，但是为了不发生柱破损或者漏液等不良情况，并能够以高分离性能分析血红蛋白类，将分析时的柱的通液压力优选设为4.0MPa以下，更优选设为3.0MPa以下。需要说明的是，柱的通液压力通过由送液泵与柱之间连接的压力计读取压力值来测定。对于给分离性能带来较大影响的充填剂粒子的平均粒径、柱的内径、柱的长度和洗脱液的送液速度而言，优选在以下的范围内进行调整。充填剂粒子的平均粒径的优选下限为2 μ m,优选上限为20 μ m。充填剂粒子的平均粒径如果小于2 μ m,则柱的通液压力变高，有时会发生柱的破损或漏液等不良情况。充填剂粒子的平均粒径如果超过20 μ m,则分离性能降低，用于血红蛋白Alc测定时，有时会出现血红蛋白类的分离变得不充分的情况。上述充填剂粒子的平均粒径的更优选的下限为5 μ m,更优选的上限为15 μ m。需要说明的是，充填剂粒子的平均粒径为采用粒度分布测定装置(ParticleSizing Systems 公司制,“Accusizer780”)测定的值。本专利技术柱内径的优选下限为2.0mm，优选上限为6.0mm。如果柱内径小于2.0mm，则柱内流动的流动相的线速度变得过高，柱的通液压力变高，有时会发生柱的破损或漏液等不良情况。如果柱的内径超过6.0_，则引起柱内样品或流动相的过度扩散，有时存在分离性能下降的情况。柱内径的更优选的下限为3.0mm，更优选的上限为5.0mm。本专利技术柱的长度的优选下限为10mm,优选上限为50mm。柱的长度如果小于10mm,则存在分离性能随着理论塔板数的降低而降低的情况。柱的长度如果超过50mm，则柱的通液压力变高，有时会发生柱的破损或漏液等不良情况。柱长度的更优选的下限为15mm，更优选的上限为40mm。由送液用泵提供的洗脱液的送液速度的优选下限为0.5mL/分钟，优选上限为2.5mL/分钟。如果洗脱液的送液速度小于0.5mL/分钟，则由于流速慢而测定时间变长。如果洗脱液的送液速度超过2.5mL/分钟，则柱的通液压力变大，有时会产生柱的破损或漏液等不良情况。上述洗脱液的送液速度的更优选的下限为1.0mL/分钟，更优选的上限为2.0mL/ 分钟。作为在本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：与谷卓也，
申请(专利权)人：积水医疗株式会社，
类型：
国别省市：