公开了用于使用支撑液萃取和液相色谱-质谱法分析样品中的睾酮的方法和系统。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】公开了用于使用支撑液萃取和液相色谱-质谱法分析样品中的睾酮的方法和系统。【专利说明】用于测定睾酮在样品中的存在或量的方法和系统与相关申请的交叉引用本申请要求保护2011年2月7日提交的美国临时专利申请号61/440，282的优先权的权益，如同在本文中完全显示一样将所述临时专利申请通过引用并入。专利
本申请提供了用于测定生物标志物在样品中的存在或量的方法和系统。具体地，本专利技术提供了使用液相色谱和质谱法分析样品中的睾酮的方法和系统。背景生物标志物例如激素、维生素和/或代谢物可被用于多种病症的临床诊断和在内分泌学中用作内源性生物标志物。类固醇激素例如睾酮是一类重要的激素。睾酮产生并且维持男性第二性征，以及促进精子的生长和发育。肾上腺和性腺合成睾酮。水平可因酶阻断而在先天性肾上腺增生患者中升高，这减少了皮质醇的产生并且增加了导向产雄激素途径的前体水平。睾酮还可在具有多毛症的女性中升高。卵巢可以是这类患者中该激素的重要来源。由于在睾丸中产生，睾酮在成年男性中通常比其在女性和儿童中高得多。在男性中的水平在性腺机能减退状态中可下降。内分泌学中内源性生物标志物的临床诊断测试的需要可包括高度灵敏性和特异性测定，分析小的样品容积(例如，儿科样品容积可被限定为小于约200 u L)的能力和筛选多个分析物以精确诊断疾病状态例如内分泌病症的能力。在历史上，放射性免疫测定(RIA)和酶联免疫测定(ELISA)法已被用于这样的临床诊断测试。然而，免疫测定法(IA)例如RIA和EIA可遭受低通量、抗体交叉反应性的困扰，这可需要针对特异性和不良可扩展性(poorscalability)的额外准备。同样地，通过RIA分析内源性生物标志物可需要多个系列稀释来分析每一种个体标志物，这可引起对进行多次调整来使样品容积标准化的需要和/或对多个单独的测试的需要。同样地，免疫测定测试对于分析每一个样品中的多个生物标志物也不是特别有帮助的。单个测定中多个分析物的分析可允许使用减少的尺寸的样品，这产生具有增加的灵敏性和效率/样品的测定。因此，存在对开发可用于测量内源性生物标志物的分析技术和提供比RIA更强的灵敏性和更高的通量的方法的需要。然而，直至最近，仅有伴有衍生化的GC-MS或LC-MS/MS对于小的样品容积是成功的。因此，本领域中存在对用于分析内分泌学中的临床诊断的内源性生物标志物的LC-MS/MS技术的需要，该技术能够提供可接受水平的检测限，而无需繁复的衍生过程。专利技术概述在至少一个方面，本专利技术提供了用于测定睾酮在样品中的存在或量的方法，所述方法包括:(a)提供包含睾酮的样品；(b)使用支撑液萃取(supported liquidextraction)部分纯化样品，从而提供经部分纯化的包含睾酮的样品；(c)使用液相色谱法将睾酮与部分纯化的样品中的其它组分色谱分离；和(d)通过质谱法分析色谱分离的睾酮以测定睾酮在样品中的存在或量。在下文中对这类方法的其它实施方案进行详细描述。在另一个方面，本专利技术提供了用于测定睾酮在生物学样品的量的方法，所述方法包括:(a)提供样品，所述样品包括含有睾酮的生物学样品；(b)使用支撑液萃取部分地纯化样品，从而提供部分纯化的包含睾酮的样品；(C)使用反相液相色谱法色谱地将睾酮与部分纯化的样品中的其它组分分离；和(d)通过质谱法分析色谱分离的睾酮，以测定睾酮在生物学样品中的量。在下文中对这类方法的其它实施方案进行了详细描述。在另一个方面，本专利技术提供了产生用于诊断与异常睾酮水平相关的疾病或病况的报告的方法，所述方法包括:(a)提供样品，所述样品包括含有睾酮的生物学样品；(b)使用支撑液萃取部分纯化样品以提供含有睾酮的经部分纯化的样品；(C)使用液相色谱法将睾酮色谱地与部分纯化的样品中的其它组分分离；(d)通过质谱法分析色谱分离的睾酮以测定睾酮在生物样中的量；和(e)产生引述生物学样品中的睾酮的浓度的报告。在下文中对这类方法的其它实施方案进行了详细描述。在另一个方面，本专利技术提供了用于测定睾酮在样品中的存在或量的系统，所述系统包括:(a)用于使用支撑液萃取部分纯化样品的工作站(station)，样品包含睾酮；(b)用于使用液体相色谱法将睾酮与部分纯化的样品中的其它组分色谱分离的工作站；和(C)用于通过质谱法分析色谱分离的睾酮以测定睾酮在样品中的存在或量的工作站。在下文中对这类方法的其它实施方案进行了详细描述。下文中对本专利技术的其它方面进行了详细描述。附图概述不适用。详述下面的描述陈述了.本专利技术的不同方面和实施方案。具体的实施方案无意界定本专利技术的范围。相反地，实施方案仅提供至少包括在本专利技术的范围内的不同方法和系统的非限定性实例。要从本领域技术人员的角度来阅读所述描述；因此，本领域技术人员公知的信息不必然包括在内。各种缩写可用于本申请。在大多数(如果不是全部的话)情况下，此类缩写的含义对于本领域技术人员来说是已知的。这些缩写包括提供了其含义的下列缩写。APCI=大气压化学电离CBP=竞争性结合蛋白HTLC=高湍流(通量)液相色谱HPLC=高效液相色谱LLE=液-液提取LOQ=定量限LLOQ=定量下限IA=免疫测定ELISA=酶联免疫测定RIA=放射免疫测定SST=系统适用性测试ULOQ=定量上限2D-LC-MS/MS =接合至串联质谱的二维液相色谱(LC)-LC-MS/MS =接合至质谱的二维液相色谱串联(LC) -MS/MS =接合至串联质谱的液相色谱SLE=支撑液萃取定义下列术语，除非另有所指，应被理解为具有下列含义:如本文中所用，术语“一个/ 一种(a)”、“一个/ 一种(an)”和“所指物(the) ”，除非另外指出，可指一个或多个。如本文中所用，术语“生物标志物”是可提供关于生物体的生理状态的生物学信息的任何生物分子。在某些实施方案中，生物标志物的存在或不存在是可提供信息的。在其它实施方案中，生物标志物的水平是可提供信息的。生物标志物可以是激素例如睾酮或激素的代谢物。在整个本申请中，术语“约”用于表示值，其包括装置、用于测定值的方法的固有误差变化，或研究受试者之间存在的变化。 如本文中所用，术语“受试者”、“个体”和“患者”可互换地使用。这些术语的使用不表示与医学专业人员例如医生的任何类型的关系。如本文中所用的，用语“液相色谱”或“LC”用于指用于将样品中的一种或多种分子或分析物与样品中其它分析物分离的方法。LC包括当流体均匀地运动通过细碎物质的柱子时对流体溶液的一种或多种分析物的减缓。减缓产生自混合物的组分在一个或多个固定相与流动相之间的分配。LC包括例如反相 液相色谱(RPLC)和高压液相色谱(HPLC)。如本文中所用的，术语“分离”或“纯化”等不一定用于指从样品基质除去除目标分析物外的所有材料。相反地，在一些实施方案中，此术语用于指相对于存在于样品基质中的一种或多种其它组分而富集一种或多种目标分析物的量的方法。在一些实施方案中，“分离”或“纯化”可用于从样品种除去或减少可干扰分析物的检测(例如，通过质谱法)的一种或多种组分的量。如本文中所用的，术语“质谱法”或“MS”分析是指用于鉴定和/或定量样品中的分子的技术。MS包括电离样品中的分子，形成带电荷的分子；按照它们的质荷比分离带电荷的分子；本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·P·格兰特，M·克劳福德，D·W·钱德勒，W·柯廷，
申请(专利权)人：美国控股实验室公司，
类型：
国别省市：
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