【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种利用发根农杆菌高效诱导枳产生毛状根的方法,其步骤如下:(1)剥取枳果实种子,1M?NaOH?浸泡10min去除果胶,蒸馏水漂洗3-5次后3%次氯酸钠消毒20min,灭菌蒸馏水漂洗3次,去掉内外种皮后播种于MT播种培养基,24?26℃暗处培养30?45d获得无菌苗,取出1500-2000lx光照强度下光照5?7d左右,转绿后挑选健壮无菌苗,将上胚轴切成1.5cm,待用;(2)利用电转化方法将含DR5::YFP:GUS的双元表达载体质粒导入发根农杆菌MSU440,获得含双元载体的发根农杆菌;(3)挑取活化后的发根农杆菌单菌落,在含50mg/L?壮观霉素的LB固体培养基上划线,28℃暗培养36-48h,用手术刀片刮取培养好的菌体于添加了20mg/L乙酰丁香酮的MT悬浮培养基中,180rpm、28℃振荡培养1.5-2h后将菌液OD600值调整至0.6-0.8,待用;???(4)将无菌苗上胚轴切段转至含发根农杆菌的MT悬浮培养基中,浸泡20-30min,期间轻轻摇匀2-3次;(5)无菌滤纸吸干多余菌液后转至含20mg/L乙酰丁香酮的?MT共培养培养基中,21℃?暗处共培养3-4d;(6)取共 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:陈春丽,肖璇,张俊红,郭文武,
申请(专利权)人:华中农业大学,
类型:发明
国别省市:
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