本发明专利技术公开了一种糖尿病肾病微炎症小鼠模型的建立方法，包括挑选db/db小鼠、casein皮下注射诱导微炎症状态、临床生化指标和组织病理学分析步骤。本发明专利技术具有操作简单、经济实用、造模成功率高等特点，而且能模仿人类糖尿病肾病疾病特征，具备微炎症、肾小球系膜基质增生、肾小球硬化等特点，该方法的建立将有助于深入了解糖尿病肾病损伤机制，更好地防治糖尿病肾病的发生发展。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生命科学
，具体涉及。
技术介绍
糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是一种损毁性肾病,是引起终末期肾病(end stage renal disease, ESRD)发生的主要原因，近10年来患病率逐渐上升，已经超过了 50%。糖尿病肾病的特点为肾小球肥大、基底膜增厚、肾小球滤过屏障受损、肾小球基质增生，晚期发生肾小球硬化、肾小管间质纤维化、进展性蛋白尿及肾功能衰竭。然而，糖尿病肾病的具体发生机制尚不完全清楚，近年来研究表明许多因素涉及DN的发生机制，包括蛋白尿、遗传、种族、缺氧、缺血以及炎症。其中，炎症被认为是在DN发生发展中的一个关键路径，DN中存在的代谢、生化及血液动力学紊乱都可以激活炎症的产生。研究表明，各种炎症细胞，包括白细胞、单核细胞和巨噬细胞，以及其它一些分子，如细胞因子、黏附分子、各种酶(环氧化酶-2、氮氧化物)、生长因子(血管内皮生长因子、生长激素、IGF、TGF-β )及核因子(NF-K B)都参与了糖尿病肾病的发展过程。炎症通路中的这些信号分子活化并募集成纤维细胞，参与肾脏纤维化过程。因此，除了常规的控制血糖和血压外，进一步研究炎症通路活化及其引起肾损伤的机制，找出阻断这些信号的方法，将是一种新的能有效控制糖尿病肾病的治疗手段。目前尚未发现有关糖尿病肾病的微炎症研究模型。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，有助于深入了解糖尿病肾病损伤机制，更好地防治糖尿病肾病的发生发展。本专利技术采用以下技术方案:，包括以下步骤:步骤1、挑选6-8周龄雄性db/db小鼠,饲养备用；步骤2、将步骤I选择的每只小鼠每日或隔日背部皮下注射质量浓度为5 10%的酪蛋白(casein)溶液0.3 0.8ml，持续8_12周，以刺激产生慢性持续微炎症反应；步骤3、将步骤2得到的小鼠进行临床生化指标和组织病理学分析，即可获得糖尿病肾病微炎症小鼠模型。进一步地,步骤I所述小鼠为8周龄雄性db/db小鼠。进一步地,所述步骤2中casein溶液注射持续时间为8周。进一步地，步骤3中所述临床生化指标和组织病理学分析包括采取ELISA法检测炎症指标，Lowery法测24小时尿蛋白，免疫组化检查肾脏组织炎症因子的表达，光镜检查小鼠肾脏病理 变化。本专利技术的有益效果:本专利技术首次应用db/db小鼠并结合小剂量casein皮下注射成功诱导具有典型微炎症特征的糖尿病肾病模型，具有操作简单、经济实用、造模成功率高等特点，而且能模仿人类糖尿病疾病特征，具备微炎症、高血糖、肾小球系膜基质增生、肾小球硬化等特点，病理学检查符合糖尿病肾病病理变化，该模型为研究糖尿病肾病的发生及发展机制打下基础。附图说明图1为本专利技术模型建立方法流程图；图2为实施例1模型组和对照组造模8周后小鼠血清中SAA浓度，其中*表示P〈0.0lVS对照组；图3为实施例1模型组和对照组造模8周后小鼠血清中TNF- α浓度，其中*表示P〈0.0lVS对照组；图4为实施例1模型组和对照组造模8周小鼠24小时尿蛋白变化情况图；图5为实施例1对照组造模8周后HE染色小鼠肾脏组织光镜病理变化图(X 400);图6为实施例1模型组造模8周后HE染色小鼠肾脏组织光镜病理变化图(X 400);·图7为实施例1对照组造模8周后PAS染色小鼠肾脏组织光镜病理变化图(Χ400)；图8为实施例1模型组造模8周后PAS染色小鼠肾脏组织光镜病理变化图(Χ400)；图9为实施例1对照组造模8周后小鼠肾脏组织MCP-1表达图(X400);图10为实施例1模型组造模8周后小鼠肾脏组织MCP-1表达图(X400);图11为实施例1对照组造模8周后小鼠肾脏组织TNF- α表达图(Χ400)；图12为实施例1模型组造模8周后小鼠肾脏组织TNF- α表达图(X 400)。具体实施方式:下面结合实施例和附图对本专利技术做更进一步的解释。应该理解以下实施例仅旨在说明，不应被视为对本专利技术范围的限制。—种糖尿病肾病微炎症小鼠模型的建立方法，如图1所示，包括以下步骤:步骤1、挑选6-8周龄优选8周龄的雄性db/db小鼠,饲养备用；步骤2、将步骤I选择的每只小鼠每日或隔日背部皮下注射质量浓度为5 10%的casein溶液0.3 0.8ml，持续8_12周，优选8周，以刺激产生慢性持续微炎症反应；步骤3、将步骤2得到的小鼠进行临床生化指标和组织病理学分析，即可获得糖尿病肾病微炎症小鼠模型，其中临床生化指标和组织病理学分析包括采取ELISA法检测炎症指标，Lowery法测24小时尿蛋白，免疫组化检查肾脏组织炎症因子的表达，光镜检查小鼠肾脏组织病理变化。 Db/db小鼠是1966年Jackson实验室发现的由C57BL/KsJ品系小鼠自发出现瘦素受体基因(db)突变产生的一种DM鼠种。瘦素基因定位于4号染色体上，呈常染色体隐性遗传。Db/db小鼠的缺陷主要为瘦素受体的转录异常，导致瘦素作用不足。Db/db小鼠大概5-7周出现明显肥胖，血糖逐渐升高，并出现糖尿，8-9周出现微量白蛋白尿，发生DN。12-14周龄出现肾小球肥大、系膜增宽、肾小球基底膜增厚，20周龄时出现细胞外基质明显积聚，7月龄出现明显的肾小球硬化，是研究DN较好的动物模型。本专利技术建立的模型能模仿人类糖尿病疾病特征，具备微炎症、高血糖、肾小球系膜基质增生、肾小球硬化等特点，病理学检查符合糖尿病肾病病理变化。产生此优点的原因与以下因素有关:1.研究对象的选择:选择6-8周龄雄性db/db小鼠作为研究对象，该种瘦素受体基因敲除小鼠是研究II型糖尿病、糖尿病肾病等诸多疾病发病机制的重要模型。2.小剂量casein皮下注射:每日或隔日背部皮下注射5 10%casein溶液0.3 0.8ml,以刺激产生慢性持续微炎症反应。实施例1模型组步骤1、挑选8周龄雄性db/db小鼠20只，体重为30 40g。饲养环境温度为20 ± 2°C，分笼饲养，普通颗粒饲料喂养，自由摄水，12小时交替照明，适应性喂养一周。动物实验符合国家《实验动物管理条例》和《江苏省实验动物管理实施办法》要求。步骤2、步骤I选择的每只小鼠隔日背部皮下注射质量浓度为10%的casein溶液0.5ml，持续8周，以刺激产生慢性持续微炎症反应。步骤3、将步骤2得到的小鼠进行临床生化指标和组织病理学分析，即可获得糖尿病肾病微炎症小鼠模型，其中临床生化指标和组织病理学分析包括采取ELISA法检测炎症指标，Lowery法测24小时尿蛋白，免疫组化检查肾脏组织炎症因子的表达，光镜检查肾脏组织病理变化。对照组隔日注射的是蒸馏水0.5ml,其他试验步骤和条件与模型组一致。模型组和对照组临床生化指标·和组织病理学分析方法和结果如下:一、实验方法1、血尿标本的检测小鼠处死前，剪尾取血，自动血糖仪(德国Bayer)检测随机血糖。经10%水合氯醛麻醉后，予心脏采血，血标本置于含有抗凝剂EDTA的离心管中，1000rpm/min离心5min,取上清液放置于-2(TC冰箱待用。血甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(totalcholesterol, TC)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)、低密度脂蛋白(lowdensity lipopr本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种糖尿病肾病微炎症小鼠模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、挑选6?8周龄雄性db/db小鼠，饲养备用；步骤2、将步骤1选择的每只小鼠每日或隔日背部皮下注射质量浓度为5～10%的casein溶液0.3～0.8ml，持续8?12周,以刺激产生慢性持续微炎症反应；步骤3、将步骤2得到的小鼠进行临床生化指标和组织病理学分析，即获得糖尿病肾病微炎症小鼠模型。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马坤岭，张洋，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：
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