本发明专利技术涉及磷酸化途径相关因子在调控调节性T细胞功能中的应用。具体而言，本发明专利技术涉及磷酸化途径相关因子、其激动剂或拮抗剂在制备调控调节性T细胞的免疫调节功能的组合物中的用途，其中所述磷酸化途径相关因子选自：原癌基因表达蛋白PIM1和/或其编码序列，且其中所述调控是通过调节选自下组的调节性T细胞调节因子的活性进行的：FOXP3、IL-2、GITR、CTLA4或它们的组合。本发明专利技术还提供了相应的组合物及调控调节性T细胞的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物和生物医药领域。更具体而言，本专利技术涉及磷酸化途径相关因子、其激动剂或抑制剂通过调节F0XP3、IL-2、GITR和CTLA4的活性来调控调节性T细胞功能的用途。本专利技术尤其涉及调节F0XP3活性的负调节因子及其通过调控调节性T细胞产生的免疫抑制功能。
技术介绍
Fox转录因子家族是一个以具有叉头螺旋结构(forkhead/winged helix,FKH)为特征，功能各异的转录因子大家族。这个家族成员在细胞发育的各个进程中起着不同的作用(参见参考文献I和2)。F0XP3是调节性T细胞(Treg,regulatory T cells)特异性转录因子,对Treg的发育和功能起着重要的调节作用，具有下调免疫应答的功能。F0XP3介导的Treg的免疫调节功能是通过F0XP3与若干转录共调节蛋白(例如转录因子、共抑制因子、共激活因子、组蛋白以及染色质重建因子)形成蛋白复合体以动态调控基因的特异性转录(参见参考文献3和4)。在不同刺激条件下，F0XP3蛋白复合体的不同状态及其转录活性对Treg及免疫系统调节都有不同的效果(参见参考文献3和4)。F0XP3+调节性T细胞(F0XP3+Tregs)属于T淋巴细胞中表达⑶4、⑶25及转录因子F0XP3的一类T细胞亚型(即⑶4+⑶25+Treg)，其正常功能对于人体免疫稳态的动态调节必不可少。调节性T细胞的发育及功能失调，与多种重大免疫相关性疾病，包括自身免疫性疾病、炎症反应、急性及慢性传染性疾病、肿瘤免疫耐受、移植排斥以及过敏性疾病的生理病变进程密切相关(参见参考文献I和参考文献2)。尽管本研究领域近年来进展很快，但许多重大及根本性的问题仍然尚待回答，例如在细胞水平上调节性T细胞如何调节其它免疫细胞活性，以及在分子水平上F0XP3采用何种机制使得调节性T细胞获得免疫抑制活性。不断积累的实验证据显示，F0XP3基因表达的水平及持续状态对于天然调节性T细胞的发育成熟及功能至关重要。此外，F0XP3结合多重转录因子以及具有酶学活性的组蛋白乙酰转移酶/脱乙酰基酶复合体，这对于抑制T细胞中促炎症类细胞因子的转录激活是必需的。并且，F0XP3蛋白翻译后修饰、转录复合体装配及其修饰酶类的活性受到T细胞受体及炎症细胞因子受体信号的动态调节。先前的研究发现F0XP3是一个赖氨酸乙酰化蛋白，并且F0XP3富含脯氨酸的N端可以直接招募组氨酸乙酰转移酶TIP60 (Tat interactionprotein, 60kDa)，从而介导F0XP3的转录抑制活性(参见参考文献6)。原癌基因PMl是一种组成性激活的Ser/Thr激酶，首先在淋巴瘤中作为原癌基因MYC的协同癌基因被发现。随后，在多种人癌组织中发现该原癌基因的表达，其中包括胰腺癌、急性骨髓性白血病及其它恶性肝癌。PMl普遍表达于脾、胸腺、骨髓、胰腺、口腔内皮细胞等组织或细胞中，且高表达于肿瘤细胞中。PIMl具有许多重要作用，包括影响细胞程序性死亡、基因转译激活及细胞信号 传导等。IL-2是一种淋巴细胞因子，通常由凝集素或抗原激活的T淋巴细胞产生。可使细胞毒性T细胞、自然杀伤细胞和淋巴因子活化的杀伤细胞增殖，并使其杀伤活性增强，还可以促进淋巴细胞分泌抗体和干扰素，具有抗病毒、抗肿瘤和增强机体免疫功能等作用。人重组IL-2在肿瘤、炎症反应、急性传染性疾病或慢性传染性疾病的治疗中已有相应应用。GITR是肿瘤坏死因子受体蛋白家族成员，又名TNFRSF18，通常在激活的T细胞中表达增加，同时也是调节性T细胞中重要的细胞因子，并在固有免疫中也起重要作用。小鼠体内基因敲除该基因表明GITR调控⑶3驱动的T细胞激活(⑶3-driven T-cellactivation)及调控细胞程序性死亡，其它的研究表明用激活GITR抗体可抑制调节性T细胞功能或刺激调节性T细胞或效应性T细胞增殖。CTLA4是免疫球蛋白家族成员。通常在辅助性T细胞表面表达并转导抑制信号到T细胞。CTLA4是T细胞共刺激因子⑶28的类似物，可结合抗原呈递细胞表面的⑶80和⑶86。CTLA4也是调节性T细胞中重要的细胞因子，对调节性T细胞功能有重要作用。因此，深入研究调节性T细胞及转录因子F0XP3、IL-2、GITR和CTLA4中的生化活性、生理功能及其调控的分子机理，对于治疗性控制人体内调节性T细胞的免疫活性以及基于调节性T细胞的免疫治疗皆至关重要。这为将基础免疫研究转化为临床研究，以及理解人类特有的重大传染性疾病提供了新的研究命题与挑战。
技术实现思路
本专利技术的主要目的之一是提供磷酸化途径相关因子及其激动剂或拮抗剂在调节F0XP3活性、IL-2活性、GITR和CTLA4活性中的用途。本专利技术的另一目的在于提供这些调节因子通过调节F0XP3、IL-2、GITR和CTLA4的活性来调控调节性T细胞功能的用途。本专利技术的其它重要目的还包括:提供原癌基因表达蛋白PMl和/或其编码序列、其激动剂或拮抗剂在制备包含调节性T细胞的组合物或调控调节性T细胞活性的组合物中的用途；制备包含调节性T细胞的组合物方法；调控调节性T细胞活性的方法；以及一种用于制备包含调节性T细胞的组合物或调控调节性T细胞活性的组合物的试剂、试剂盒或药盒。在本专利技术的第一方面中，提供了磷酸化途径相关因子、其激动剂或拮抗剂在制备调控调节性T细胞的免疫调节功能的组合物中的用途，其中所述磷酸化途径相关因子选自:原癌基因表达蛋白PMl和/或其编码序列，且其中所述调控是通过调节选自下组的调节性T细胞调节因子 的活性进行的:F0XP3、IL-2、GITR、CTLA4或它们的组合。在本专利技术的一个实施方式中，对F0XP3、IL-2、GITR和CTLA4或它们的组合的活性调节是正调节或负调节，其中，所述磷酸化途径相关因子或其激动剂负调节F0XP3、GITR或CTLA4活性和正调节IL-2活性，所述磷酸化途径相关因子的拮抗剂正调节F0XP3、GITR或CTLA4活性和负调节IL-2活性。在另一个优选例中，所述原癌基因蛋白PIMl或其激动剂促进F0XP3S422位点磷酸化。在本专利技术的另一个实施方式中，所述激动剂选自:诱导PIMl表达的信号因子和/或其编码序列；所述拮抗剂选自:抗PMl抗体、shPIMl、针对PMl的反义寡核苷酸、PMl的化学抑制剂，例如见参考文献8-14，优选4- [3- (4-氯苯基)-2，1-苯并异噁唑_5_基]-2-嘧啶胺、3-氰基-4-苯基-6-(3-溴-6-羟基)苯基-2 (IH)-吡啶酮、2-羟基-3-氰基-4-苯基-6-(3-溴-6-羟基苯基)吡啶、吡啶并咔唑-环戊二烯钌聚合物的消旋混合物、或者本领域中已知的或可通过本领域中已知方法筛选的其它PMl抑制剂,更优选4-[3-(4-氯苯基)-2，1-苯并异噁唑-5-基]-2-嘧啶胺。在本专利技术的另一个实施方式中，所述激动剂选自炎性细胞因子，更优选IL-4、IL-6、TCR或其编码序列。在本专利技术的另一个实施方式中，所述拮抗剂是山奈酚或其药学上可接受的盐。在一个优选例中，所述抑制剂增强GITR和CTLA4mRNA表达，抑制IL_2mRNA表达。在本专利技术的另一个实施方式中，所述用途是磷酸化途径相关因子或其激动剂在制备负调控调节性T细胞的免疫调节功能的组合物中的本文档来自技高网...
【技术保护点】
磷酸化途径相关因子、其激动剂或拮抗剂在制备包含调节性T细胞的组合物或者调控调节性T细胞活性的组合物中的用途，其中所述磷酸化途径相关因子选自：原癌基因表达蛋白PIM1和/或其编码序列。
【技术特征摘要】
2012.01.19 CN 201210017885.71.磷酸化途径相关因子、其激动剂或拮抗剂在制备包含调节性T细胞的组合物或者调控调节性T细胞活性的组合物中的用途，其中所述磷酸化途径相关因子选自:原癌基因表达蛋白PMl和/或其编码序列。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，其中所述制备是通过用所述磷酸化途径相关因子、其激动剂或拮抗剂调节选自下组的调节性T细胞调节因子的活性进行的:F0XP3、IL-2、GITR、CTLA4或它们的组合。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，对F0XP3、IL-2、GITR、CTLA4或它们的组合的活性调节是正调节或负调节，其中，所述磷酸化途径相关因子或其激动剂负调节F0XP3、GITR或CTLA4活性和正调节IL-2活性，所述磷酸化途径相关因子的拮抗剂正调节F0XP3、GITR或CTLA4活性和负调节IL-2活性。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述激动剂选自:诱导PIMl表达的信号因子和/或其编码序列；所述拮抗剂选自:抗PMl抗体、shPIMl、针对PMl的反义寡核苷酸、PIMl的化学抑制剂，优选4-[3-(4_氯苯基)-2，1-苯并异噁唑-5-基]-2-嘧啶胺、3-氰基-4-苯基-6-(3-溴-6-羟基)苯基-2 (IH)-吡啶酮、2-羟基-3-氰基-4-苯基-6-(3-溴-6-羟基 苯基)吡啶、吡啶并咔唑-环戊二烯钌聚合物的消旋混合物。5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述激动剂选自炎性细胞因子，更优选IL-4、IL-6、TCR或其编码序列。6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述拮抗剂是山奈酚或其药学上可接受的盐。7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，制备所述调节性T细胞的起始物中包含CD4阳性的T细胞，优选⑶4+⑶45RA+天然T细胞。8.如权利要求1-7中任一项所述的用途，其特征在于，所述组合物用于治疗和/或预防与调节性T细胞的免疫调节功能失调相关的疾病或症状。9.如权利要求8所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：李斌，李志远，林芳，高志梅，陈祚珈，安迪·曾，李孔晨，
申请(专利权)人：中国科学院上海巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：
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