一种提取胡萝卜花粉小孢子的方法技术

本发明专利技术公开了一种提取胡萝卜花粉小孢子的方法。该方法包括如下步骤：1）将经过消毒的胡萝卜花序置于直径为70～90mm的研钵中，加入B5液体培养基，用锤头直径为25～30mm的研锤挤压花蕾释放小孢子，得到悬浮液；2）用400目孔径的滤网过滤步骤1）所得悬浮液，收集滤液；3）对步骤2）所得滤液依次按照如下a）-c）的步骤进行梯度离心，获得小孢子：a）150～155g离心4～6min，弃上清，收集沉淀；b）用所述B5液体培养基悬浮步骤a）所得沉淀，125～130g离心4～6min，弃上清，收集沉淀；c）用所述B5液体培养基悬浮步骤b）所得沉淀，105～110g离心4～6min，弃上清，收集沉淀。本发明专利技术方法可增加小孢子提取数量，提高培养效率，操作简便，同时还能最大程度减少组织碎片等杂质对小孢子离体培养的影响。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术的目的是提供。
技术介绍
游离小孢子培养技术是一项发展较快的细胞工程技术，在多种作物中得到应用，如小麦、甘蓝、大白菜等，该技术能够利用花粉小孢子的离体培养快速获得纯合二倍体，从而创制出用于培育品种的新种质。胡萝卜游离小孢子培养技术已有研究(李金荣，欧承刚，庄飞云等.胡萝卜游离小孢子培养及其发育过程研究，园艺学报，2011，38(8):1539-1546.)，并获得胚状体植株，但数量较少，限制了该技术在胡萝卜生产中的广泛应用。产生这个问题的一个主要原因是胡萝卜花器官小，适宜培养时期的花蕾长约1_，花药直径小于1mm，采用报道中所述方法很难充分挤压到花药并释放小孢子，因此获得的游离小孢子数量及诱导产生的胚状体数量较少，相应的最终获得的胚状体植株数也减少；并且在提取过程中，会产生大量体细胞组织杂质，影响最终的提取质量和培养效果。现有胡萝卜花粉小孢子提取方法存在提取数量少、提取效率低等问题。目前，急需一种能够快速、高效、高质量分离胡萝卜花粉小孢子的提取方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种胡萝卜花粉小孢子的新型提取方法。该方法可以快速、高效分离胡萝卜花粉小孢子，提高单位操作本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取胡萝卜花粉小孢子的方法，包括如下步骤：（1）将经过消毒的胡萝卜花序置于直径为70～90mm的研钵中，加入B5液体培养基，用锤头直径为25～30mm的研锤挤压花蕾释放小孢子，得到悬浮液；（2）用400目孔径的滤网过滤步骤（1）所得的悬浮液，收集滤液；（3）对步骤（2）所得的滤液依次按照如下（a）?（c）的步骤进行梯度离心，获得小孢子：（a）150～155g离心4～6min，弃上清，收集沉淀；（b）用所述B5液体培养基悬浮步骤（a）所得沉淀，125～130g离心4～6min，弃上清，收集沉淀；（c）用所述B5液体培养基悬浮步骤（b）所得沉淀，105～110g离心4～6min，弃上清，收集沉...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：欧承刚，庄飞云，
申请(专利权)人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所，
类型：发明
国别省市：