获得大豆转基因愈伤组织的方法及其培养基技术

本发明专利技术公开了获得大豆转基因愈伤组织的方法及其培养基。本发明专利技术所提供的获得大豆转基因愈伤组织的方法，包括以下步骤：以大豆转基因发状根为外植体I，用诱导大豆愈伤组织的培养基诱导培养所述外植体I，即得到大豆转基因愈伤组织。利用本发明专利技术所提供的获得大豆转基因愈伤组织的方法，能快速、简单、高效的获得大豆转基因愈伤组织。在大豆生物技术相关领域尤其在根系相关基因和耐逆基因的功能验证中具有广泛的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及获得大豆转基因愈伤组织的方法及其培养基。
技术介绍
大豆遗传转化方法有许多，其中以根癌农杆菌介导法和基因枪介导法为主。但是，不管是根癌农杆菌介导法还是基因枪介导法，其遗传转化效率依旧低下，且转化周期长。另一方面，随着大豆EST序列等相关数据的不断丰富以及基因组测序的完成，从大豆中克隆基因会变得更加容易，而对于基因功能验证的需求会更加迫切。低效、费时的大豆遗传转化技术难以满足大豆基因功能验证日益增长的需要。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种获得大豆转基因愈伤组织的方法。本专利技术所提供的获得大豆转基因愈伤组织的方法，包括以下步骤以大豆转基因发状根为外植体I，用下述诱导大豆愈伤组织的培养基诱导培养所述外植体I，即得到大豆转基因愈伤组织。所述方法还包括用下述成套培养基中的继代培养基培养大豆转基因愈伤组织的步骤。所述大豆转基因发状根是通过包括如下步骤的方法制备得到( I)以大豆子叶节为外植体II，用含有外源目的DNA的发根农杆菌浸染所述外植体II，得到经过所述发根农杆菌浸染后的外植体II ；(2)将上述步骤⑴得到的经过所述发根农杆菌浸染后的外植体II用共培养基进行共培养，得到共培养后的外植体II ;(3)将上述步骤(2)得到的所述共培养后的外植体II用根诱导培养基进行培养，即得到大豆转基因发状根。所述步骤(2)中所述共培养基由以下成分组成NH4N03>KN03>KH2PO4,CaCl2 ·2H20,MgSO4 ·7Η20,KI,Na2MoO4 ·2Η20、H3BO3'CuSO4 ·5Η20、MnSO4 · Η20、CoCl2 · 6Η20、ZnSO4 · 7Η20、Na2EDTA · 2Η20、FeSO4 · 7Η20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、甘氨酸、乙酰丁香酮、赤霉素、L-半胱氨酸、二硫苏糖醇、蔗糖、琼脂和水；以上成分在所述共培养基中浓度分别为NH4NO3O. 825g/L、KNO3O. 95g/L、KH2PO4O. 085g/L、CaCl2 · 2H20 0. 22g/L、MgSO4 · 7H200. 185g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3B036 . 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 ·Η20 16. 9mg/L、CoCl2 ·6Η20 0. 025mg/L、ZnS04 ·7Η20 8. 6mg/L,Na2EDTA ·2Η20 27. 8mg/L、FeSO4 · 7H20 37. 3mg/L、烟酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸 2. Omg/L、乙酰丁香酮 40mg/L、赤霉素 O. 25mg/L、L-半胱氨酸 400mg/L、二硫苏糖醇154mg/L、鹿糖30mg/L和琼脂7g/L ；所述共培养基的pH值为5. 4 ;所述步骤(3)中所述根诱导培养基由包括以下成分的物质组成NH4N03>KN03>KH2PO4,CaCl2 .2H20、MgS04.7H20、K1、Na2Mo04 .2H20、H3BO3XuSO4 .5H20、MnSO4 H20、CoCl2 6H20、ZnSO4 7H20、Na2EDTA 2H20、FeSO4 7H20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、甘氨酸、特美汀、头孢噻肟、羧苄青霉素、蔗糖和水；以上成分在所述根诱导培养基中浓度分别为NH4NO3O. 825g/L、KNO3O. 95g/L、KH2PO4O. 085g/L、CaCl2 2H20 0. 22g/L、MgSO4 7H200. 185g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 2H20 0. 25mg/L、H3B036 . 2mg/L、CuSO4 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 *H20 16. 9mg/L、CoCl2 *6H20 0. 025mg/L、ZnS04 *7H20 8. 6mg/L,Na2EDTA *2H20 27. 8mg/L、FeSO4 7H20 37. 3mg/L、烟酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. Omg/L、特美汀50mg/L、头孢噻厢100mg/L、羧节青霉素100mg/L和鹿糖30mg/L ；所述根诱导液体培养基的pH值为5. 7。本专利技术的另一个目的是提供诱导大豆愈伤组织的培养基。本专利技术所提供的诱导大豆愈伤组织的培养基，由下述质量份的营养成分组成大量元素以NH4NO3计825份、微量元素以KI计0. 83份、铁盐以FeSO4 *7H20计37. 3份、有机成分以烟酸计0. 5份、生长素、6-苄氨基嘌呤0. 5份-1. 0份和蔗糖30份；所述生长素为2，4- 二氯苯氧乙酸1. 0份`-3. 0份或萘乙酸1. 0-3. 0份；所述大量元素由下述质量份的物质组成NH4N03825 份、KN03950 份、KH2P0485 份、CaCl2 2H20 220 份和 MgSO4 7H20 185 份；所述微量元素由下述质量份的物质组成KI 0. 83 份、Na2MoO4 2H20 0. 25 份、H3B036. 2 份、CuSO4 5H20 0. 025 份、MnSO4 .H2O16. 9 份、CoCl2 6H20 0. 025 份和 ZnSO4 7H20 8. 6 份;所述铁盐由下述质量份的物质组成Na2EDTA 2H20 27. 8 份和 FeSO4 7H20 37. 3 份；所述有机成分由下述质量份的物质组成烟酸0. 5份、肌醇100份、盐酸硫胺素0.1份、盐酸吡哆醇0. 5份和甘氨酸2. 0份。所述培养基由以下成分组成NH4N03>KN03>KH2PO4,CaCl2 2H20,MgSO4 *7H20,KI,Na2MoO4 *2H20,H3B03>CuS04 .5H20、MnSO4 H20、CoCl2 6H20、ZnSO4 7H20、Na2EDTA 2H20、FeSO4 7H20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、甘氨酸、生长素、6-苄氨基嘌呤、蔗糖和水；所述生长素为2，4_ 二氯苯氧乙酸或萘乙酸；以上成分在所述培养基中浓度分别为NH4NO3O. 825g/L、KNO3O. 95g/L、KH2PO4O. 085g/L、CaCl2 2H20 0. 22g/L、MgSO4 7H200. 185g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 2H20 0. 25mg/L、H3B036 . 2mg/L、CuSO4 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 *H20 16. 9mg/L、CoCl2 *6H20 0. 025mg/L、ZnS04 *7H20 8. 6mg/L,Na2EDTA *2H20 27. 8mg/L、FeSO4 7H20 37. 3mg/L、烟酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇0. 5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种获得大豆转基因愈伤组织的方法，包括以下步骤：以大豆转基因发状根为外植体I，用权利要求5?9中任一所述的培养基诱导培养所述外植体I，即得到大豆转基因愈伤组织。

【技术特征摘要】
1.一种获得大豆转基因愈伤组织的方法，包括以下步骤 以大豆转基因发状根为外植体I，用权利要求5-9中任一所述的培养基诱导培养所述外植体I，即得到大豆转基因愈伤组织。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于 所述方法还包括用权利要求10中所述的成套培养基中的继代培养基培养大豆转基因愈伤组织的步骤。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于 所述大豆转基因发状根是通过包括如下步骤的方法制备得到 (1)以大豆子叶节为外植体II，用含有外源目的DNA的发根农杆菌浸染所述外植体II，得到经过所述发根农杆菌浸染后的外植体II ； (2)将上述步骤(I)得到的经过所述发根农杆菌浸染后的外植体II用共培养基进行共培养，得到共培养后的外植体II ; (3)将上述步骤(2)得到的所述共培养后的外植体II用根诱导培养基进行培养，即得到大豆转基因发状根。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于 所述步骤(2)中所述共培养基由以下成分组成 NH4NO3' KNO3> KH2PO4' CaCl2 · 2H20、MgSO4 · 7H20、K1、Na2MoO4 · 2H20、H3BO3> CuSO4 · 5Η20、MnSO4 · Η20、CoCl2 · 6Η20、ZnSO4 · 7Η20、Na2EDTA · 2Η20、FeSO4 · 7Η20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、甘氨酸、乙酰丁香酮、赤霉素、L-半胱氨酸、二硫苏糖醇、蔗糖、琼脂和水； 以上成分在所述共培养基中浓度分别为NH4NO3O. 825g/L、KNO3O. 95g/L、KH2PO4O. 085g/L、CaCl2 · 2H20 0. 22g/L、MgSO4 · 7H20·0. 185g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3B036 . 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 ·Η20 16. 9mg/L、CoCl2 ·6Η20 0. 025mg/L、ZnS04 ·7Η20 8. 6mg/L,Na2EDTA ·2Η20 27. 8mg/L、FeSO4 · 7H20 37. 3mg/L、烟酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇·0.5mg/L、甘氨酸 2. Omg/L、乙酰丁香酮 40mg/L、赤霉素 O. 25mg/L、L-半胱氨酸 400mg/L、二硫苏糖醇154mg/L、鹿糖30mg/L和琼脂7g/L ； 所述共培养基的pH值为5.4; 所述步骤(3)中所述根诱导培养基由包括以下成分的物质组成 NH4NO3' KNO3> KH2PO4' CaCl2 · 2H20、MgSO4 · 7H20、K1、Na2MoO4 · 2H20、H3BO3> CuSO4 · 5Η20、MnSO4 · Η20、CoCl2 · 6Η20、ZnSO4 · 7Η20、Na2EDTA · 2Η20、FeSO4 · 7Η20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、甘氨酸、特美汀、头孢噻肟、羧苄青霉素、蔗糖和水； 以上成分在所述根诱导培养基中浓度分别为NH4NO3O. 825g/L、KNO3O. 95g/L、KH2PO4O. 085g/L、CaCl2 · 2H20 0. 22g/L、MgSO4 · 7H20·0. 185g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3B036 . 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 ·Η20 16. 9mg/L、CoCl2 ·6Η20 0. 025mg/L、ZnS04 ·7Η20 8. 6mg/L,Na2EDTA ·2Η20 27. 8mg/L、FeSO4 · 7H20 37. 3mg/L、烟酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇·0.5mg/L、甘氨酸2. 0mg/L、特美汀50mg/L、头孢噻厢100mg/L、羧节青霉素100mg/L和鹿糖·30mg/L ； 所述根诱导液体培养基的PH值为5. 7。5.诱导大豆愈伤组织的培养基，由下述质量份的营养成分组成 大量元素以NH4NO3计825份、微量元素以KI计O. 83份、铁盐以FeSO4 ·7Η20计37. 3份、有机成分以烟酸计O. 5份、生长素、6-苄氨基嘌呤O. 5份-1. O份和蔗糖30份；所述生长素为2，4- 二氯苯氧乙酸1. O份-3. O份或萘乙酸1. O份-3. O份； 所述大量元素由下述质量份的物质组成ΝΗ4Ν038 2 5 份、ΚΝ03950 份、ΚΗ2Ρ0485 份、CaCl2 · ...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩天富，曹东，侯文胜，吴存祥，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：