流苏花总黄酮类化合物及其制备方法和应用，涉及中药有效成分提取分离及应用技术，包括以下步骤：乙醇溶液提取：大孔吸附树脂柱色谱分离：硅胶柱色谱分离：凝胶柱色谱分离：半制备高效液相色谱纯化：高效液相色谱检测：最后将纯化后的样品采用高效液相色谱检测，精确测定了流苏花中总黄酮类化合物的具体组成及含量，并系统研究了其抗氧化的效果。本发明专利技术所使用的方法提取纯度高，易于工业化，提取得到的总黄酮类化合物具有优异的抗氧化活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药有效成分提取分离及应用技术，尤其涉及流苏花总黄酮类化合物及其制备方法和应用。
技术介绍
流苏为木犀科流苏树属植物，为国家二级保护植物，又名花木、萝卜丝花、油根子、牛荆子、四月雪。流苏主要分布于黄河中下游及其以南地区[杨玉梅，胡江.流苏树的繁殖栽培与园林应用[J].山东林业科技，2005(1):56]。流苏为药食两用植物，《中国经济植物志》中记载，木犀科植物流苏树的芽、叶具有消暑止渴功效，主治中暑。民间有在春天采流苏的嫩叶和花，制作茶饮用的历史，用流苏花制作的茶称为“糯米花茶”，清香爽口，别具一番风味[胡世才.优良饮料植物-流苏树及其枝叶泡制法[J].林业科技开发，1991,3:16 ；房绍坤，杜庆志，郑冬.流苏树的繁育与应用[J].国土绿化，2005，9:45-46]。流苏“糯米花茶”根据史籍记载已有一千多年历史，陆羽在《茶经》曰:“上者生烂石，中者生栎壤，下者生黄土。野者上，园者次”。“糯米花茶”天然生长，内含对人体健康有益物丰富，维生素、氨基酸、儿茶多酚、咖啡碱、茶丹宁含量均较高，饮用此茶可消积食、清内火、杀菌治痢、顺气通络、消暑利尿、去腻降压、消除疲劳、减肥护肤。茶渣可治胃病和小儿腹泻，具有药用价值。流苏花作为一种珍贵的民间茶原料正因其特殊的风味及功能受到越来越多的关注。已有研究中明确了流苏花中含有较多的黄酮类化合物，并证明这些物质具有较好的抗氧化作用。但仅仅提取并测定了其中总黄酮类化合物的含量，提取的纯度不高，对于如何测定其中具体所含物质及组成比例并不明确，总黄酮类化合物的抗衰老和抗氧化作用的效果如何也不明确；且在总黄酮类化合物的制备方法中使用较多的成本较高的有毒溶剂，不仅不利于工业化生产而且对人体的健康有危害。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，提供成分明确的流苏花总黄酮类化合物及其制备方法和应用，使制备方法经济简便，易于工业化生产，提取得到的流苏花总黄酮类化合物产品纯度高，具体的物质组成比例明确，总黄酮类化合物的抗氧化作用效果明确。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是:一种流苏花总黄酮类化合物的制备方法，包括以下步骤: (1)乙醇溶液提取: 将流苏花药材干燥、粉碎，加入质量浓度为60-80%乙醇浸泡后，加热回流提取3-5小时，过滤得到滤液和残渣，再将残渣以质量浓度为6(Γ80%乙醇加热回流提取2次，每次3-5小时，合并滤液，将滤液减压蒸发浓缩得浸膏； (2)大孔吸附树脂柱色谱分离: 将得到的浸膏用质量浓度为1 0-30%乙醇溶解，过滤，将滤液用大孔吸附树脂进行充分吸附，装柱，依次用体积浓度为10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇-水体系洗脱液进行梯度洗脱，收集乙醇体积浓度为50-60%乙醇-水洗脱馏分，减压浓缩至浸膏状物，将浸膏在50-60°C下真空减压干燥，即得流苏花总黄酮类化合物粗品； (3)硅胶柱色谱分离: 将流苏花总黄酮类化合物粗品采用硅胶柱色谱上样分离，依次以CHCl3 =CH3OH体积比为1: 9,1: 7,1: 5,1: 3为流动相梯度洗脱，采用芦丁作为对照，用紫外光谱测定流苏花总黄酮类化合物的含量，收集含有流苏花总黄酮类化合物大于60%的馏分段； (4)凝胶柱色谱分离: 将硅胶柱色谱分离后的样品采用凝胶柱色谱分离，采用CHCl3 =CH3OH体积比为2:1等度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥； (5)半制备高效液相色谱纯化: 将凝胶柱色谱分离后的样品采用半制备高效液相色谱纯化，收集洗出液，减压浓缩，干燥得流苏花总黄酮类化合物，色谱条件为色谱柱0DS-A，20 X 250mm,流动相为CH3OH =H2O,体积比为7:3 ； (6)高效液相色谱检测: 最后将纯化后的样品采用高效液相色谱检测，色谱条件为: 色谱仪=AgilentllOO高效液相色谱仪，色谱柱:Agilent Zorbax SB C18 色谱柱，4.6 X 250 mm, 5 μ m, 流动相:甲醇-乙腈-0.4%冰醋酸，体积比为30: 10: 60， 流速:1.0 mL/min, 柱温:25°C， 检测波长:350 nm。所述步骤(I)中乙醇浸泡的时间为8-12小时。所述步骤(I)中第I次加热回流时，乙醇的添加量为流苏花药材质量的10-12倍，第2次和第3次加热回流时，乙醇的添加量是流苏花药材质量的8-10倍。所述步骤(2)中的大孔吸附树脂为DlOl或AB-8型大孔吸附树脂。流苏花总黄酮类化合物，由槲皮素-3-甲氧基-7-0- a -L-阿拉伯(1_6) _ β -D-葡萄糖苷、北美圣草素-7-0-β-D-葡萄糖苷、杨梅素-3-0-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖苷和山奈酚-3-0-β -D-葡萄糖苷5种黄酮化合物组成，质量百分含量分别为 5-8%、8-12%、3-6%、30-50% 和 20-30%。流苏花总黄酮类化合物的用途，所述的流苏花总黄酮类化合物具有抗氧化活性，具有清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基、羟基自由基和抗脂质体过氧化的用途。本专利技术带来的有益效果为: 1、本专利技术将乙醇提取、大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和半制备高效液相色谱联用的方式来提取分离纯化流苏花中的总黄酮类化合物，提取纯度高，杂质含量少，分离纯化后总黄酮类化合物的含量大于90% ； 2、纯化后的样品使用高效液相色谱检测，精确地确定了流苏花中总黄酮类化合物具体的物质成分和组成比例，所得到的总黄酮类化合物成分明确，质量可控，测得其中的有效成分及质量百分含量为(I):槲皮素-3-甲氧基-7-0-a-L-阿拉伯(1-6)-β-D-葡萄糖苷(5-8 %)、(2):北美圣草素-7-0-β-D-葡萄糖苷(8-12%)、(3):杨梅素-3-0-β-D-葡萄糖苷(3-6 %)、(4):木犀草素-7-0-β- -葡萄糖苷(30-50%)和(5):山奈酚-3-0-β- -葡萄糖苷(20-30%)； 3、使用的大孔吸附树脂可以反复再生利用，采用有机溶剂乙醇提取具有提取量大、工艺简单的特点，用水和乙醇作为溶剂洗脱，经济简便、易于工业化，对人体危害作用很小； 4、提取得到的流苏花总黄酮类化合物具有优异的抗氧化活性，具有显著的清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基、羟基自由基能力和抗脂质体过氧化能力。附图说明图1为槲皮素-3-甲氧基-7-0-a -L-阿拉伯(1_6)_β -D-葡萄糖苷的化学结构式； 图2为北美圣草素-7-0-β -D-葡萄糖苷的化学结构式； 图3为杨梅素-3-0-β -D-葡萄糖苷的化学结构式； 图4为木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖苷的化学结构式； 图5为山奈酚-3-0-β-D-葡萄糖苷的化学结构式； 图6为总黄酮类化合物对照品的HPLC谱 图7为本专利技术实施例1所得流苏花总黄酮类化合物的HPLC谱 图8为本专利技术实施例2所得流苏花总黄酮类化合物的HPLC谱 图9为本专利技术实施例3所得流苏花总黄酮类化合物的HPLC谱图。图6-9中的1、2、3、4和5分别代表槲皮素_3_甲氧基-7_0_ a -L-阿拉伯(1-6) - β -D-葡萄糖苷、北美圣草素-7-0- β -D-葡萄糖苷、杨梅素-本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种流苏花总黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）乙醇溶液提取：将流苏花药材干燥、粉碎，加入质量浓度为60?80％乙醇浸泡后，加热回流提取3?5小时，过滤得到滤液和残渣，再将残渣以质量浓度为60~80％乙醇加热回流提取2次，每次3?5小时，合并滤液，将滤液减压蒸发浓缩得浸膏；（2）大孔吸附树脂柱色谱分离：将得到的浸膏用质量浓度为10?30%乙醇溶解，过滤，将滤液用大孔吸附树脂进行充分吸附，装柱，依次用体积浓度为10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇?水体系洗脱液进行梯度洗脱，收集乙醇体积浓度为50?60%乙醇?水洗脱馏分，减压浓缩至浸膏状物，将浸膏在50?60℃下真空减压干燥，即得流苏花总黄酮类化合物粗品；?（3）硅胶柱色谱分离：将流苏花总黄酮类化合物粗品采用硅胶柱色谱上样分离，依次以CHCl3：CH3OH体积比为1:?9，1:?7，1:?5，1:?3为流动相梯度洗脱，采用芦丁作为对照，用紫外光谱测定流苏花总黄酮类化合物的含量，收集含有流苏花总黄酮类化合物大于60%的馏分段；（4）凝胶柱色谱分离：将硅胶柱色谱分离后的样品采用凝胶柱色谱分离，采用CHCl3：CH3OH体积比为2:?1等度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥；（5）半制备高效液相色谱纯化：将凝胶柱色谱分离后的样品采用半制备高效液相色谱纯化，收集洗出液，减压浓缩，干燥得流苏花总黄酮类化合物，色谱条件为色谱柱ODS?A，20×250mm，流动相为CH3OH：H2O，体积比为7:3；（6）高效液相色谱检测：最后将纯化后的样品采用高效液相色谱检测，色谱条件为：色谱仪：Agilent1100高效液相色谱仪，色谱柱：Agilent?Zorbax?SB?C18色谱柱，4.6×250?mm，5?μm，流动相：甲醇?乙腈?0.4%冰醋酸，体积比为30:?10:?60，流速：1.0?mL/min，柱温：25℃，检测波长：350?nm。...
【技术特征摘要】
1.一种流苏花总黄酮类化合物的制备方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)乙醇溶液提取: 将流苏花药材干燥、粉碎，加入质量浓度为60-80%乙醇浸泡后，加热回流提取3-5小时，过滤得到滤液和残渣，再将残渣以质量浓度为6(Γ80%乙醇加热回流提取2次，每次3-5小时，合并滤液，将滤液减压蒸发浓缩得浸膏； (2)大孔吸附树脂柱色谱分离: 将得到的浸膏用质量浓度为10-30%乙醇溶解，过滤，将滤液用大孔吸附树脂进行充分吸附，装柱，依次用体积浓度为10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇-水体系洗脱液进行梯度洗脱，收集乙醇体积浓度为50-60%乙醇-水洗脱馏分，减压浓缩至浸膏状物，将浸膏在50-60°C下真空减压干燥，即得流苏花总黄酮类化合物粗品； (3)硅胶柱色谱分 离: 将流苏花总黄酮类化合物粗品采用硅胶柱色谱上样分离，依次以CHCl3 =CH3OH体积比为1: 9,1: 7,1: 5,1: 3为流动相梯度洗脱，采用芦丁作为对照，用紫外光谱测定流苏花总黄酮类化合物的含量，收集含有流苏花总黄酮类化合物大于60%的馏分段； (4)凝胶柱色谱分离: 将硅胶柱色谱分离后的样品采用凝胶柱色谱分离，采用CHCl3 =CH3OH体积比为2:1等度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥； (5)半制备高效液相色谱纯化: 将凝胶柱色谱分离后的样品采用半制备高效液相色谱纯化，收集洗出液，减压浓缩，干燥得流苏花总黄酮类化合物，色谱条件为色谱柱0DS-A，20 X 250mm,流动相为CH3OH =H2O,体积比为7:3 ； (6)高效液相色谱检测: 最后将纯...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓瑞雪，刘普，尹卫平，卢宗元，王怡冉，牛亚琪，柴元武，时清亮，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：
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