一种增强大肠杆菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法技术

本发明专利技术公开一种增强大肠杆菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，是将可同时过量表达酪氨酸转氨酶TyrB、甲基紫罗碱外转运蛋白YddG、3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶AroG、分支酸变位酶和预苯酸脱水酶PheA、莽草酸激酶AroK以及莽草酸脱氢酶YdiB的重组质粒转化宿主大肠杆菌，并通过液体发酵生产L-苯丙氨酸，所述重组质粒是将大肠杆菌来源的TyrB、YddG、AroG、PheA、AroK以及YdiB编码基因进行人工修饰以解除其所受代谢调控，并插入载体构建而成。本发明专利技术可明显增强大肠杆菌L-苯丙氨酸胞外分泌水平，L-苯丙氨酸产量高，有害副产物乙酸浓度低，发酵成本低廉，工艺简单，适宜产业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种通过基因工程技术和发酵的手段增强大肠杆菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法。
技术介绍
L-苯丙氨酸(L-phenylalanine)是一种人体必需但自身无法合成的具有生理活性的芳香族氨基酸，也是一种重要的医药和食用化学品中间体，在医药行业主要用于生产抗肿瘤药物和氨基酸输液制剂，在食品行业主要用于合成二肽甜味剂阿斯巴甜，具有良好的应用前景。生产L-苯丙氨酸的方法主要有水解抽提法、化学合成法、酶法和发酵法四种，其中，微生物发酵法所利用原料廉价易得，又可在常温常压下进行，是目前国内外生产L-苯丙氨酸的主流方法。L-苯丙氨酸在大肠杆菌细胞内通过芳香族氨基酸合成代谢途径合成:葡萄糖进入细胞后经过糖酵解途径和磷酸戊糖途径合成磷酸烯醇式丙酮酸和4-磷酸-赤藓糖，在3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶(AroG)的作用下进入莽草酸途径，在莽草酸激酶(AroK)、莽草酸脱氢酶(YdiB)等酶类的作用下合成分支酸，之后经分支酸变位元酶和预苯酸脱水酶(PheA)等酶作用生成芳香族氨基酸前体物，再经过酪氨酸转氨酶(TyrB)的作用合成L-苯丙氨酸。从自然界中筛本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种增强大肠杆菌L?苯丙氨酸胞外分泌的方法，其特征在于：将可同时过量表达酪氨酸转氨酶TyrB、甲基紫罗碱外转运蛋白YddG、3?脱氧?D?阿拉伯庚酮糖酸?7?磷酸合成酶AroG、分支酸变位酶和预苯酸脱水酶PheA、莽草酸激酶AroK以及莽草酸脱氢酶YdiB的重组质粒转化宿主大肠杆菌，并通过液体发酵生产L?苯丙氨酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘双平，石贵阳，张梁，丁重阳，何冬旭，李赢，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：