本发明专利技术公开了粗毛韧革菌菌丝体多糖的制备方法及其应用，涉及生物发酵及医药领域，具体的说本发明专利技术涉及通过粗毛韧革菌液体培养获取菌丝体、提取菌丝体多糖生产工艺流程，以及该多糖的降血糖降血脂功效。本发明专利技术申请人经反复试验研究发现应用该生产工艺生产的菌丝体多糖，经腹腔注射途径或口服途径给药，可显著降低高血糖小鼠的血糖和血脂水平，因此证实粗毛韧革菌菌丝体多糖具有作为制备降低血糖和血脂药物的用途。本发明专利技术不仅为深度开发利用粗毛韧革菌打开了一条崭新的途径，而且可以为降低血糖和降低血脂提供新的理想中药。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物发酵及医药领域，具体的说本专利技术涉及通过粗毛韧革菌培养生产粗毛韧革菌菌丝体多糖的方法，由该方法获得的粗毛韧革菌菌丝体多糖，以及含有该多糖的药物组合物和/或保健品。所述的粗毛韧革菌菌丝体多糖具有预防和/或治疗糖尿病的药物，特别是其具有降低血糖和血脂功效，使其为降低血糖和血脂提供理想药物。
技术介绍
糖尿病是目前中老年人的常见病和多发病，由糖尿病引起的并发症严重危及人类的生命健康。现有西药类降糖药物难免有副作用，而天然中药类降糖药物大多数降糖不明显，同时受物种资源的限制。而以药用真菌液体培养生产降糖药物则没有上述缺点。粗毛韧革菌，是金耳的寄生菌，与金耳菌种共同形成金耳子实体，生长于海拔1900-3300米的栎树和桦树树干上。民间对金耳的认识和药用有着非常悠久的历史，早在明朝时期，著名的药物学家李时珍在他的《本草纲目》中详细记载金耳。如“其金色者(当指金耳)治癖饮积聚，服痛金苍”。另外，《中国药用真菌》、《中国中药大典宗旨》、《云南食用菌》对金耳的药用价值均有详细介绍。金耳性温寒，味甘，能化痰，止咳，定喘，调气，平阴阳；临床上治神经衰弱，肺热，哮喘，慢性支气管炎，高血压，肝炎等疾病。近代科学研究证明金耳子实体用水煮成粘稠状后加白糖，制成的制剂可以治疗“肺热”、感冒、咳嗽、哮喘和高血压。近年来对金耳的研究表明其能产生多种生物活性物质。Kiho等发现腹腔注射金耳子实体水溶性多糖和醇溶多糖对正常小鼠，链脲霉素诱导的糖尿病小鼠以及基因缺陷型糖尿病小鼠均具降血糖作用。毛述永等发现口服云南金耳子实体水溶性多糖对四氧嘧啶糖尿病模型大鼠具有显著降血糖作用。目前由于对金耳野生资源的过度利用已经对该资源形成了 很大的威胁。而传统人工栽培方式周期长，需要数月才能形成一代子实体。长期的栽培过程造成了子实体成分特别是那些生物活性物质不稳定，使得从子实体中提取活性成分缺少商业可行性。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供了一种以粗毛韧革菌为出发菌株，经过液体深层培养、提取等步骤，制备粗毛韧革菌菌丝体多糖。本专利技术所使用的粗毛韧革菌为市售的任意一种粗毛韧革菌菌种。该菌属于真菌门，伞菌纲，非裙菌目(也叫多孔菌目)，革菌科，学名Stereum hirsutum (Willd) Pers,又叫粗皮硬革菌、粗毛硬革菌。不形成或很难形成子实体，菌丝体遇氢氧化钾溶液变暗或变黑。生殖菌丝疏松地交织在一起，分枝，有锁状联合，近无色。本专利技术所述的粗毛韧革菌菌丝体多糖的制备方法，包括以粗毛韧革菌为黑发菌株，进行液体摇瓶培养、一级或多级种子培养和发酵培养，离心、水洗和烘干，得到粗毛韧革菌菌丝体，菌丝体通过水解、中和、超滤、浓缩和结晶步骤获得菌丝体多糖；具体的，在本专利技术所述的摇瓶培养中，其摇瓶培养基组成为(单位为克/升):葡萄糖5 40,玉米粉5 25,蛋白胨I 20, KH2PO4I 6, MgSO4I 4,加水至适当体积,起始PH值为5.0 8.0，培养条件是:装液量为60 150mL/250mL，培养温度22 30°C，转速120 160转/分钟，培养时间24 48小时；在本专利技术所述的一级或多级种子培养中，其种子罐培养的培养基组成为(单位为克/升):葡萄糖5 40，玉米粉5 25，蛋白胨I 10，KH2PO4I 6，MgSO4I 4，消泡剂0.1 0.8，加水至适当体积，起始pH值为5.0 8.0 ;培养条件是:按种量5 10% (体积百分比)，培养温度22 30°C，搅拌速率90 150转/分钟，通风量1: 0.3 lv/v/m，培养时间80 90小时；在本专利技术所述的发酵培养中，所述发酵培养的培养基组成为(单位为克/升):葡萄糖20 80，玉米粉10 40，麸皮5 30，蛋白胨3 10，KH2PO4I 6，MgSO4I 4，CaCO3O 10，消泡剂0.2 5，加水至适当体积，起始pH值为5.0 8.0 ;培养条件是:接种量5 10% (体积百分比)，培养温度22 30°C，搅拌速率90 150转/分钟，通风量I: 0.3 lv/v/m，培养时间120 180小时。 按照该发酵工艺，其中在进行摇瓶发酵培养之前，首先将粗毛韧革菌的斜面菌种接入新配制的土豆培养基中进行培养，培养温度22 30°C，培养时间24 248小时；其中所述的土豆培养基的组成可参见诸葛健和王正祥，工业微生物实验技术手册，1994:P367。由本专利技术的方法获得的粗毛韧革菌菌丝体得率为2 30g/L发酵液。所述的菌丝体通过水解、中和、超滤、浓缩和结晶步骤制备菌丝体多糖的方法包括以下步骤:A.水解-在菌丝体中加入5 50倍I 4% NaOH溶液，80°C水解I 6小时，2500 4000rpm离心5 20分钟，菌丝体用水洗涤2 3次，洗涤液并入水解液中；B.中和-合并后的水解液用盐酸中和至pH6.0 8.5, 2500 4000rpm离心,取滤液；C超滤-用0.1微米的膜微滤，再用分子量5000 30000的膜超滤；D.浓缩-用酒精浓缩超滤液，使之沉淀；E.结晶-滤出浓缩沉淀物，用浓酒精洗涤后烘干，得到粗毛韧革菌菌丝体多糖。按此工艺菌丝体多糖的得率为5 15g/100g菌丝体。本专利技术的又一目的是提供了所述粗皮韧革菌菌丝体多糖在药物和保健品制备中的应用。其中所述的药品和保健品具有降低血糖血脂的功能。本专利技术的又一目的是提供了用本专利技术的方法制备得到的粗皮韧革菌菌丝体多糖在制备预防和/或治疗糖尿病的药物和/或保健品中的应用。本专利技术的方法所制备的粗皮韧革菌菌丝体多糖的降血糖降脂功能，可通过下面的药剂实验证明:选取空腹小鼠，以无菌的pH4.6柠檬酸缓冲液配制4%的四氧嘧啶(alloxan)注射液，按体重160mg/kg剂量一次性腹腔注射造型，120小时后，选择空腹血糖值大于13mmol/L的小鼠随机分为5组，每组12只，组间差异小于0.5mmol/L,设阳性对照(I，生理盐水);阳性药物组(II，二甲双胍，剂量120mg/kg体重)；给药组(III，粗毛韧革菌菌丝体多糖，剂量100mg/kg体重)均采用口服给药,每隔10天测定空腹血糖一次,实验时间30天,最后一天分析血浆总胆固醇机三磷酸甘油酯含量。上述试验给药IOd后，粗皮韧革菌菌丝体多糖组与对照组相比，血糖指标均显著降低(pH< 0.05)，给药30天后，粗皮韧革菌菌丝体多糖组与对照组相比，血清总胆固醇、三磷酸甘油酯指标均显著降低(pH < 0.05)可见粗皮韧革菌菌丝体多糖IOd即能显著降低高血糖小鼠血糖和30天即能降低血脂指标。因此证实了粗皮韧革菌菌丝体多糖具有制备降血糖和血脂功能的保健品和/或药品的用途。应用本专利技术的粗毛韧革菌培养方法，可以大规模或工业化生产粗皮韧革菌菌丝体多糖和含有该混合物的药物组合物。由于该药物组合物中所含有的粗皮韧革菌菌丝体多糖来源于天然菌种的培养，因此没有任何毒副作用，从而为糖尿病患者提供了理想的药物，并为粗毛韧革菌的应用开创了广阔的前景，具体实施例方式为了进一步阐述本专利技术的技术方案所涉及的材料及工艺，给出了下述的实施例。但这些实施例不以任何方式限制本专利技术的范围。实施例1:粗毛韧革菌发酵液和菌丝体多糖的制备1、用新配置的土豆培养基(葛健，王正祥，工业微生物实验技术手册，1994:P36本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种粗毛韧革菌菌丝体多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以粗毛韧革菌为出发菌株，进行液体摇瓶培养、一级或多级种子培养和发酵培养，离心、水洗和烘干，得到粗毛韧革菌菌丝体，菌丝体通过水解、中和、超滤、浓缩和洁晶步骤获得菌丝体多糖；所述的摇瓶培养中，其摇瓶培养基组成为(单位为克/升)：葡萄糖5～40，玉米粉5～25，蛋白胨1～20，KH2PO41～6，MgSO41～4，加水至适当体积，起始pH值为5.0～8.0，培养条件是：装液量为60～150mL/250mL，培养温度22～30℃，转速120～160转/分钟，培养时间24～48小时；所述的一级或多级种子培养中，其种子罐培养的培养基组成为(单位为克/升)：葡萄糖5～40，玉米粉5～25，蛋白胨1～10，KH2PO41～6，MgSO41～4，消治率0.2～0.8，加水至适当体积，起始pH值为5.0～8.0；培养条件是：接种量5～10％(体积百分比)，培养温度22～30℃，搅拌速率90～150转/分钟，通风量1∶0.3～1v/v/m，培养期间80～90小时；所述的发酵培养中，所述发酵培养的培养基组成为(单位为克/升)：葡萄糖20～80，玉米粉10～40，麸皮5～30，蛋白胨3～10，KH2PO41～6，MgSO41～4，CaCO30～10，消泡剂0.2～5，加水至适当体积，起始pH值为5.0～8.0；培养条件是：接种量5～10％(体积百分比)，培养温度22～30℃，搅拌速率90～150转/分钟，通风量1∶0.3～1v/v/m培养时间120～180小时。...
【技术特征摘要】
1.一种粗毛韧革菌菌丝体多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:以粗毛韧革菌为出发菌株，进行液体摇瓶培养、一级或多级种子培养和发酵培养，离心、水洗和烘干，得到粗毛韧革菌菌丝体，菌丝体通过水解、中和、超滤、浓缩和洁晶步骤获得菌丝体多糖； 所述的摇瓶培养中，其摇瓶培养基组成为(单位为克/升):葡萄糖5 40，玉米粉5 25，蛋白胨I 20，KH2PO4I 6，MgSO4I 4，加水至适当体积，起始pH值为5.0 8.0，培养条件是:装液量为60 150mL/250mL，培养温度22 30°C，转速120 160转/分钟，培养时间24 48小时； 所述的一级或多级种子培养中，其种子罐培养的培养基组成为(单位为克/升):葡萄糖5 40，玉米粉5 25，蛋白胨I 10，KH2PO4I 6，MgSO4I 4，消治率0.2 0.8，加水至适当体积，起始pH值为5.0 8.0 ;培养条件是:接种量5 10 % (体积百分比)，培养温度22 30°C，搅拌速率90 150转/分钟，通风量1: 0.3 lv/v/m，培养期间80 90小时； 所述的发酵培养中，所述发酵培养的培养基组成为(单位为克/升):葡萄糖20 80，玉米粉10 40，麸皮5 30，蛋白胨3 10，KH2PO4I 6，MgSO4I 4，CaCO3O 10，消泡剂0...
【专利技术属性】
技术研发人员：张志才，王永生，
申请(专利权)人：北京绿科天成生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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