本发明专利技术提供了一种制备山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，该方法采用二维液相色谱－质谱联用技术，以甲醇－水或乙腈－水为流动相，以反相C18色谱柱为一维制备色谱柱，对银杏叶提取物进行组分切割，收集目标组分为山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品。再以反相C18色谱柱为二维制备色谱柱，在质谱选择离子峰指导下，对山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品进行组分切割，收集，旋转蒸发浓缩，得到高纯度的山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷，纯度可以达到70%以上。本发明专利技术制备过程重复性高，可操作性好，同时银杏叶资源丰富，容易获取，适合大规模生产的要求，可用于舒血宁注射液原料制备。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，具体地说，涉及一种制备山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法。
技术介绍
山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷属于黄酮类化合物，黄酮类化合物具有很好的药学效果，能降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血细胞凝聚，清除自由基，在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用。同时，研究表明山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷还具有抗肿瘤作用。山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷存在于珍珠菜、碟豆花、长春花、乔皮、海芒果、长叶胡颓子、银杏叶等植物中。目前对于山奈酚-3-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷提取分离，主要是植物经过醇提，然后经大孔树脂或葡聚糖凝胶等多次柱层析步骤进行分离纯化，操作步骤繁琐，过程复杂，同时需要消耗大量的有机溶剂，耗时费力。用二维液相色谱一质谱技术制备山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷的方法还未见报道。二维液相色谱技术是通过用两根性质相同或不同的色谱柱对复杂样品进行分离。作为一种分析复杂样品的 理想工具，它已被广泛应用于医药卫生、食品科学、环境和农业科学等各个领域。与单维制备色谱相比，二维液相色谱不但具有更高的峰容量，而且两维具有不同的选择性。经过第一维简化的组分可以在第二维上根据不同的选择性而实现互补分离，结构相似的化合物可能在第二维可到有效分离，从而提高制备的效率和化合物纯度。银杏叶为银杏科植物银杏(Ginkgo biloba)的干燥叶，其提取物具有活血化瘀通络的功效。现在药理研究表明，银杏叶中富含大量黄酮和银杏内酯。我国是银杏资源的古国和大国，全国有20多个省市区大面积种植银杏树，银杏资源占全世界的70%，银杏叶的总产量每年在2 X 107kg以上，资源极大丰富。
技术实现思路
针对上述缺陷，本专利技术提供一种以银杏叶提取物为原料，采用二维液相色谱一质谱技术制备山奈酚-3-0-2 ”，6 ” - 二鼠李糖基葡萄糖苷的方法。为解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案是:一种制备山奈酚-3-0-2”，6”_ 二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于:步骤如下:I)、从中药提取物中制备高纯度山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷；2)、将中药提取物溶于甲醇一水溶液，制得中药提取物溶液；3)、采用分离纯化技术从中药提取物中制备山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷。2、根据权利要求1所述制备山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于:所述中药提取物为银杏叶提取物，银杏叶提取物溶于25% - 75%的甲醇一水溶液，制得银杏叶提取物溶液，银杏叶提取物浓度为10 - 1000mg/mL。3、根据权利要求1所述制备山奈酚-3-0-2”，6”_ 二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于:所述分离纯化技术为二维液相色谱一质谱联用进行银杏叶提取物制备山奈酚-3-0-2 ”，6 ” - 二鼠李糖基葡萄糖苷；液相色谱进行一维制备的色谱柱为反相C18，反相C8，Click OEG0采用液相色谱进行二维制备的色谱柱为反相C18，反相C8，Click OEG ；一维液相色谱制备采用的流动相为有机相与水相混合，洗脱条件按照有机相5 - 65%等度或O — 50分钟有机相由5%提高到70%梯度进行；有机相为甲醇或乙腈，水相为水；对保留时间5 - 25分钟主成分为山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷的组分进行收集，旋转蒸发至干，作为一维制备山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷粗品；将一维制备山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷粗品用25% - 75%的甲醇一水溶液溶解，至浓度为20 - 200mg/mL ；对一维收集浓缩后的样品，进行二维液相色谱制备。采用的流动相为有机相与水相混合，洗脱条件按照有机相5 - 15%等度或经O — 30分钟有机相由5%提高到30%梯度进行，二维制备根据质谱选择离子指导组分收集；有机相为甲醇或乙腈，水相为水；制备时流动相流速为60 - 120mL/min，制备时柱温为室温或25 — 40°C，制备时进样量为200 - 3000 μ L/针，检测器为DAD紫外检测器和质谱检测器；制备时流动相最佳流速为80 - lOOmL/min,制备时柱温为室温，制备时进样量为2000 — 2500 μ L/针，紫外检测器为360nm ；·二维液相色谱制备收集到的山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷馏分进行旋转蒸发浓缩至干，得到山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷化合物。4、根据权利要求3所述制备山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于:所述一维制备最佳流动相为乙腈与水，采用梯度方式，乙腈比例由10%经15 -20分钟增加到15% — 25%。5、根据权利要求3所述制备山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于:所述二维制备最佳流动相为乙腈与水，采用等度条件，乙腈浓度为8 - 15%，，二维制备质谱选择离子为m/z = 317和287,收集m/z=287的懼分。6、根据权利要求3所述制备山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于:所述最佳二维色谱柱组合为一维为反相C18，二维为反相C18。7、根据权利要求3所述制备山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于:所述制备时流动相最佳流速为80 — 100mL/min,制备时柱温为室温,制备时进样量为2000 - 2500 μ L/针，紫外检测器为360nm。由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本专利技术与现有技术相比具有以下特占-^ \\\.I)、山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷纯度高。由于本专利技术所用的技术方法，直接针对植物中所含的山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷进行制备，无需经过加热、酸碱的变化，山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷以在药材中本身存在的状态被制备出来，没有水解产物掺杂，因此得到的山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷纯度高，达到70%以上。2)、方法简单易行，操作简便。本专利技术所涉及的制备山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，仪器自动化程度高，操作方便、简单，常温常压下就可进行，适合大规模生产的需要。3)、药材来源广，易获得，价格便宜。银杏是我国特有的珍贵树种，占全世界资源的70%，银杏叶的总产量每年在2 X 107kg以上，资源极大丰富。三九牌舒血宁注射液、银杏叶酊剂作为应用时间久、疗效明确、使用安全的中药注射剂，有着广泛的应用，而本专利技术制得的山奈酚-3-0-2”，6” - 二鼠李糖基葡萄糖苷是三九牌舒血宁注射液、银杏叶酊剂中一种重要的原料。而本专利技术提供的制备方法，过程重复性高，可操作性好，同时银杏叶资源丰富，容易获取，适合大规模生产的要求，可用于舒血宁注射液、银杏叶酊剂原料山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷的制备。具体实施例方式实施例:本专利技术是以银杏叶提取物为原料，采用二维液相色谱一质谱技术制备高纯度芦丁的方法，芦丁的纯度可以达到80%以上。本专利技术为从银杏叶提取物中制备高纯度芦丁的方法，步骤本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备山奈酚?3?O?2”,6”?二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于：步骤如下：1）、从中药提取物中制备高纯度山奈酚?3?O?2”,6”?二鼠李糖基葡萄糖苷；2）、将中药提取物溶于甲醇－水溶液，制得中药提取物溶液；3）、采用分离纯化技术从中药提取物中制备山奈酚?3?O?2”,6”?二鼠李糖基葡萄糖苷。
【技术特征摘要】
1.一种制备山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于:步骤如下: I)、从中药提取物中制备高纯度山奈酚-3-0-2 ”，6 ” - 二鼠李糖基葡萄糖苷； 2 )、将中药提取物溶于甲醇一水溶液，制得中药提取物溶液； 3)、采用分离纯化技术从中药提取物中制备山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷。2.根据权利要求1所述制备山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于:所述中药提取物为银杏叶提取物，银杏叶提取物溶于25% - 75%的甲醇一水溶液，制得银杏叶提取物溶液，银杏叶提取物浓度为10 - 1000mg/mL。3.根据权利要求1所述制备山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷的方法，其特征在于:所述分离纯化技术为二维液相色谱一质谱联用进行银杏叶提取物制备山奈酚-3-0-2 ”，6 ” - 二鼠李糖基葡萄糖苷； 液相色谱进行一维制备的色谱柱为反相C18，反相CS，Click OEG0采用液相色谱进行二维制备的色谱柱为反相C18，反相C8，Click OEG ； 一维液相色谱制备采用的流动相为有机相与水相混合，洗脱条件按照有机相5 - 65%等度或O — 50分钟有机相由5%提高到70%梯度进行；有机相为甲醇或乙腈，水相为水； 对保留时间5 - 25分钟主成分为山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷的组分进行收集，旋转蒸发至干，作为一维制备山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷粗品；将一维制备山奈酚-3—2”，6” - 二鼠李糖基葡萄糖苷粗品用25% - 75%的甲醇一水溶液溶解，至浓度为20 — 200mg/mL ； 对一维收集浓缩后的样品，进行二维液相色谱制备。采用的流动相为有机相与水相...
【专利技术属性】
技术研发人员：丰加涛，付冬梅，王海涛，冯志琼，
申请(专利权)人：北京华润高科天然药物有限公司，
类型：发明
国别省市：
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