普洱茶免疫佐剂及其在流感疫苗中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种普洱茶免疫佐剂，其特征在于由下列质量比的组分组成：普洱茶提取物0.05～100%，载体0～99.95%。本发明专利技术用普洱茶提取物作为流感疫苗佐剂，具有良好的有效性，能提高抗原的免疫原性，增强免疫效果，解决了目前免疫佐剂单一，副作用难以避免，疫苗生产供应量有限，难以满足疫情爆发时急需提供大量疫苗的要求，以及疫苗起效时间慢等诸多问题，而且疫苗质量容易控制。普洱茶提取物制备方法简便，其材料来源广泛，较为经济、环保。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种普洱茶免疫佐剂，尤其涉及普洱茶提取物在制备免疫佐剂，特别是流感疫苗免疫佐剂中的应用，属于生物

技术介绍
普洱茶原产于我国云南思茅及西双版纳一带，是一种历史名茶，其以云南大叶种茶树的鲜叶为原料进行加工，按发酵方法不同分为生茶和熟茶，即将云南大叶种茶树的鲜茶叶采摘后，经晒青得到毛茶，再经缓慢的自然发酵而成的生茶，或者经人工促成发酵的熟茶。普洱茶有散茶以及压制的成型茶，并具有下列独特的品质特点:熟茶色泽为褐红，汤色褐红、清亮,并有独特的陈香气味,叶底为褐红色；生茶为灰白色,茶汤带褐色,并有清香气味，醇厚回甜，普洱茶迄今已有1700多年的历史。对于普洱茶的功效，历史上也多有记载，如公元1765年，赵学敏《本草纲目拾遗》中说:普洱茶膏，黑如漆，醒酒第一，消食化痰，清胃生津，功力尤大也；《木部》中记载:普洱茶膏能治百病，如肚胀、受寒，用姜汤发散，出汗即可愈，口破喉燥，受热疼痛，用五分噙口过夜即愈。公元1768年，清王昶撰《滇行目录》中有“普洱茶味沉刻，可疗疾”的说法。公元1897年，陈宗海撰《思茅厅采访》记载:普洱茶能帮助消化，驱散寒冷，有解毒作用。长期的饮用实践证明，普洱茶具有消食解毒，理气去胀，清热化痰，驱风醒酒，治痢抑菌等功效。现代医学研究证实:普洱茶确有降血脂、降血糖、降血压、健齿护牙、提高机体免疫力、抗癌及防治心血管疾病的功效。此外，普洱茶减肥瘦身的功效也引起了人们的广泛关注。张冬英等利用高通量筛选法研究发现:普洱茶乙醇提取物有潜在的降血脂、降血糖的可能性。近年来的研究表明，普洱茶提取物表现了很强的生物活性，普洱茶水提物表现出了明显的抗氧化活性，能有效抑制脂质体和非脂质体的氧化损伤。普洱茶提取物还表现出良好的抗基因毒性、抗病毒以及抗菌活性。流感是由流感病毒引起的一种可造成大规模流行的急性呼吸道传染病，它的特点是短期内爆发，然后迅速蔓延，造成不同程度的流行，包括世界大流行、局部暴发流行及散发，发病率高并伴有一定的死亡率，一 旦流感疫情爆发，将会对人类的生命健康带来巨大的威胁。预防流感疫情爆发的最主要也是最有效的手段就是接种流感疫苗。目前被批准的流感疫苗主要有两大类:灭活流感疫苗和减毒流感活疫苗，灭活流感疫苗又分为:全病毒灭活疫苗、灭活病毒裂解产物疫苗和亚单位疫苗，目前被广泛使用的是三价的无佐剂灭活裂解疫苗。由于流感病毒变异很快，通常每年的流行类型都有所不同，生产企业一般都在世界卫生组织(WHO)指导下选择流感病毒毒株进行疫苗生产，每年接种最新的流感疫苗才能达到预防的效果。一旦流感病毒变异造成大规模流行或者是世界性流行，疫苗需求量必将猛增，但目前由于受流感疫苗生产工艺的限制，短时间内难于提供大规模流行所需的足量疫苗，因此，应用免疫佐剂，减少疫苗用量并提高免疫效果，是应对大规模流行期间疫苗量不足的途径之一。佐剂是一种加入疫苗后能显著增强抗原的免疫原性，而本身无免疫原性的物质，将其应用于流感疫苗，能显著增强疫苗的免疫效果，减少抗原的用量，从而有利于流感疫苗的生产效率的提高与生产成本的降低，更好的保护易感人群，以应对突然爆发的流感疫情，佐剂在新型流感疫苗的研究与开发中具有极为重要的作用。目前被批准应用于流感疫苗的佐剂主要有铝佐剂和MF59等。但事实上铝佐剂对蛋白亚单位疫苗诱导抗体产生的能力较弱，不能有效地诱导免疫应答，其不能诱导产生Thl型反应，干扰细胞免疫，并阻断CD8+CTL的激活，使得疫苗的免疫保护作用不全面，不持久，在某些情况下还会产生与过敏反应有关的IgE，使机体产生不良反应。MF59虽然是一种较为有效地流感疫苗佐剂，但是其在增加免疫原性的同时也增加了反应原性，在成年人中出现了局部疼痛、发热、红斑、硬结、肌痛等症状的增加。另外，一些新型佐剂正处于研发中，像多聚脱氧核苷酸类、抗菌肽类、细胞因子类、多糖类佐剂，但进展都比较缓慢。随着禽流感疫情在世界各地的爆发，并产生了较高的死亡率，研究出一种新型的疫苗佐剂，从而有效的提高疫苗的安全性和免疫原性，提高疫苗的生产效率，已成为更好的保护人类生命健康的一种需要。经系统查阅文献和专利，目前未发现关于普洱茶提取物应用于免疫佐剂研究的报道。
技术实现思路
为解决目前免疫佐剂单一，副作用难以避免，疫苗生产供应量有限，难以满足疫情爆发时急需提供大量疫苗的要求，以及疫苗起效时间慢等诸多问题，本专利技术旨在提供一种能有效提高疫苗免疫效果，降低疫苗抗原用量的普洱茶免疫佐剂。本专利技术的另一个目的在于提供普洱茶提取物在制备免疫佐剂中的应用。本专利技术的又一个目的在于提供一种普洱茶免疫佐剂在制备流感疫苗中的应用。 本专利技术提供的一种普洱茶免疫佐剂由下列质量比的组分组成: 普洱茶提取物0.05 100% 载体O 99.95%。所述载体由下列质量比的组分组成: 乳化剂I 50% 助乳化剂I 50%油相I 50% 水相10 97%。所述乳化剂为常规的Tween20或聚氧乙烯蓖麻油中的一种，或者为质量混合比为3: 2 2: 3的常规Tween20与Span80的混合物，或者为质量混合比为3: 2 2: 3的常规聚氧乙烯蓖麻油与Span80的混合物。所述助乳化剂为常规的1，2_丙二醇或聚乙二醇400或无水乙醇中的一种。所述油相为常规的液体石蜡或白油或注射用大豆油中的一种。所述水相为注射用水或者含有药物或疫苗成分的注射用水溶液。本专利技术提供的普洱茶免疫佐剂，优选下列质量比: 普洱茶提取物0.1 100%载体O 99.9%。本专利技术所述的普洱茶免疫佐剂在制备流感疫苗中的应用，其特征在于:普洱茶免疫佐剂与流感疫苗血凝素的质量比为300:1 150000:1，其中，所述普洱茶免疫佐剂由下列质量比的组分组成: 普洱茶提取物0.05 100% 载体O 99.95%。 所述普洱茶提取物为市购产品。所述普洱茶提取物为普洱茶乙醇提取物，或者为普洱茶水提取物，分别经以下方法提取: 普洱茶乙醇提取物的制备:取粉碎的普洱茶粉，置于容器内，用乙醇冷浸或温浸提取，或者加热回流提取，过滤，取滤液，对滤液进行减压回收乙醇，余下滤液经浓缩干燥，得浸膏；其中，每次提取时，乙醇的质量浓度为75 99.7%，乙醇加入量是普洱茶粉质量的5 50倍，冷浸是在室温下浸泡I 10天，温浸是在40 60°C温度下浸泡I 2小时，提取次数为I 3次；加热回流提取是在30 75°C温度下，回流提取I 3次，每次30 150分钟。普洱茶水提取物的制备:取粉碎的普洱茶粉，置于容器内，用蒸馏水冷浸或温浸提取，或用加热煎煮的方法提取，过滤，取滤液，进行常规浓缩干燥，得浸膏。其中，每次提取时，蒸馏水的加入量是普洱茶粉质量的5 100倍，冷浸是在室温下浸泡I 10天，温浸是在40 60°C温度下浸泡I 2小时，提取次数为I 3次；加热煎煮是按常规方法进行，提取次数I 3次，每次煎煮60 300分钟。本专利技术提供 的普洱茶佐剂与传统的氢氧化铝佐剂相比，具有以下一些优点: I)普洱茶是一种日常饮用品，在以往的研究中展现出了多种保健功效，将其作为流感疫苗佐剂应用，安全性高、副作用低。在研究中发现，用含普洱茶提取物的流感疫苗注射小鼠，小鼠未见全身不良反应，活动及饮水进食未见明显影响，而用含氢氧化铝佐剂的流感疫苗注射小鼠，则偶见注射局部出现红斑本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种普洱茶免疫佐剂，其特征在于由下列质量比的组分组成：??????????????普洱茶提取物??????????0.05～100%载体??????????????????0～99.95%。

【技术特征摘要】
1.种普洱茶免疫佐剂，其特征在于由下列质量比的组分组成: 普洱茶提取物0.05 100% 载体O 99.95%。2.权利要求1所述的普洱茶免疫佐剂，其特征在于所述载体由下列质量比的组分组成: 乳化剂I 50% 助乳化剂I 50%油相I 50% 水相10 97%。3.权利要求2所述的普洱茶免疫佐剂，其特征在于所述乳化剂为常规的TWeen20或聚氧乙烯蓖麻油中的一种，或者为质量混合比为3: 2 2: 3的常规Tween20与Span80的混合物，或者为质量混合比为3: 2 2: 3的常规聚氧乙烯蓖麻油与Span80的混合物。4.权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：李映波，刘洪卿，孙笠雯，赵兰华，杨磊，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：