一种甘氨酸修饰的量子点探针标记活细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种甘氨酸修饰的量子点探针标记活细胞的方法。包括甘氨酸与量子点偶联制备探针、甘氨酸修饰的量子点探针标记活细胞、活细胞成像和示踪等步骤。量子点难透过细胞膜，用于活细胞成像探针必须与其他分子偶联以便进入细胞，现比较常用的偶联分子是穿膜肽。用水溶性量子点与甘氨酸偶联，可以增加量子点的透膜能力，使其进入细胞发挥标记和示踪活细胞的作用。甘氨酸修饰的量子点均匀分布在胞浆中，发光分散均匀，而未修饰的量子点主要附着于细胞膜上，颗粒相对粗大，且不均匀。与穿膜肽修饰的量子点比较，甘氨酸修饰的量子点探针具有成本低、制作快速、性质稳定、使用方便、胞内分布均匀等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
活细胞成像技术可以在一段时间内实时观察细胞内部结构和细胞生理过程的动态变化，而小动物活体成像系统则可以实时监控细胞在活生物体内的活动和基因行为，这两项技术对生物学研究具有至关重要的作用。采用理想的突光探针来标记感兴趣的分子或细胞是活细胞成像技术和小动物活体成像系统顺利运行的必要前提。常用的荧光探针有荧光蛋白、小分子有机荧光染料和量子点等。荧光蛋白分子比较大，对于一些研究来说并不合适；小分子荧光染料和量子点无机纳米晶颗粒(小于IOnm)对于兴趣分子自然行为的影响更小。其中量子点荧光探针具有光稳定性好，荧光强度高，可以长时间实时监控等多种优点1_3。量子点探针在荧光成像应用中多与抗体、蛋白质或者糖类偶联使用；用于标记细胞时由于透膜性差，不能直接标记细胞。现阶段用于标记活细胞的量子点探针通常与穿膜肽(具有细胞膜穿透能力的小分子多肽)偶联后，借助穿膜肽的作用被导入细胞。例如Invitrogen公司的Qtracker CellLabeling Kits系列探针。穿膜肽修饰的量子点探针不仅制作成本高,而且由于穿膜肽的原因，量子点探针进入细胞后以囊泡的形式分散在胞浆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘氨酸修饰的量子点探针标记活细胞的方法，包括如下步骤：1）甘氨酸与量子点偶联制备探针将羧基水溶性量子点和甘氨酸分散在50mM硼酸盐缓冲液中，加入N?（3?二甲基氨基丙基）?N?乙基碳二亚胺盐酸盐，使水溶性量子点和甘氨酸进行偶联，得到量子点?甘氨酸偶合物；截留分子量为50kDa的超滤管纯化浓缩量子点?甘氨酸偶合物，即得量子点?甘氨酸探针；2）细胞培养采用胰酶组织消化法制取乳鼠组织细胞悬液，将乳鼠组织细胞悬液接种至细胞培养板或细胞培养瓶，置入细胞培养箱培养2～3d；3）量子点?甘氨酸探针标记细胞弃去步骤2）中的细胞培养板或细胞培养瓶中的培养基，用磷酸盐缓冲液轻柔漂洗2～3次后，加入含有0.5?...

【技术特征摘要】
1.一种甘氨酸修饰的量子点探针标记活细胞的方法，包括如下步骤 1)甘氨酸与量子点偶联制备探针 将羧基水溶性量子点和甘氨酸分散在50mM硼酸盐缓冲液中，加入N- (3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐，使水溶性量子点和甘氨酸进行偶联，得到量子点-甘氨酸偶合物；截留分子量为50kDa的超滤管纯化浓缩量子点-甘氨酸偶合物，即得量子点-甘氨酸探针； 2)细胞培养 采用胰酶组织消化法制取乳鼠组织细胞悬液，将乳鼠组织细胞悬液接种至细胞培养板或细胞培养瓶，置入细胞培养箱培养2 3d ; 3)量子点-甘氨酸探针标记细胞 弃去步骤2)中的细胞培养板或细胞培养瓶中的培养基，用磷酸盐缓冲液轻柔漂洗2 3次后，加入含有0. 5 ii M量子点-甘氨酸探针或0. 5 ii M水溶性量子...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡炯宇，韩健，黄跃生，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：