突变噬菌体E基因、含该基因的打孔质粒载体及其在制备疫苗中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物基因工程领域，公开了一种经基因突变后获得的PhiX174噬菌体E基因的DNA，其序列号如SEQIDNO：1所示，还公开了上述DNA的制备方法以及含该DNA的打孔质粒载体及其在制备疫苗中的应用。本发明专利技术的突变噬菌体E基因在禽沙门氏菌中的表达量大大高于现有噬菌体E基因在禽沙门氏菌中的表达量；其相对于现有噬菌体E基因对禽少门氏菌的裂解率提高了30－70%，增加了禽沙门氏菌的菌脱可作为候选疫苗的可能性。

【技术实现步骤摘要】

本发是明涉及一种经基因突变后获得的PhiX174噬菌体E基因的DNA及其制备方法,还涉及含有该DNA的打孔质粒载体,还进一步涉及该打孔质粒载体在制备疫苗菌脱中的应用，属于生物基因工程领域。
技术介绍
在细菌中表达PhiX174噬菌体E裂解基因，能够通过渗透压的作用使细菌的细胞膜破裂，造成细菌细胞内的胞浆和核酸成分流出，而形成一种空的细菌外壳，即为“bacterial ghost”(菌脱)。由于菌脱和活菌具有一样的细菌膜结构担保和相关抗原蛋白，与通过甲醛等化学方法灭活的细菌比较其刺激机体产生免疫反应的抗原物质未发生变性，因此菌脱是良好的候选疫苗。目前E蛋白介导的溶解已经成功地应用于各种大肠杆菌菌株、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎少门氏菌、肺炎克雷伯杆菌、支气管败血博德特氏杆菌等。但是，如果菌脱作为疫苗使用，尤其是对于强致病性细菌时，此时就需要菌脱中不含活菌，否则在使用菌脱免疫动物时，容易造成动物因感染强致病性活菌而发病。虽然菌脱已经广泛应用于革兰氏阴性菌中，对于ToplO、DH5a等基因工程大肠杆菌的裂解效果较好，而对于野生型大肠杆菌或者其革兰氏阴性菌的裂解效果一般。因此，有必要提高E基因的裂本文档来自技高网...

【技术保护点】
突变噬菌体E基因，其特征在于：其核苷酸序列为SEQ?ID?NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.突变噬菌体E基因，其特征在于其核苷酸序列为SEQID NO 1所示。2.—种权利要求1所述的突变噬菌体E基因的制备方法，其特征在于顺次包括以下步骤 1)通过序列为SEQID NO :3所示的引物I和序列为SEQ ID NO :4所示的引物2进行PCR扩增获得PhiX174噬菌体E基因并测序，其序列为SEQ ID NO 2所示； 2)对序列为SEQID NO :2所示的E基因进行点突变，E基因点突变后的序列为SEQ IDNO 1所示。3.含权利要求1所述的突变噬菌体E基因的打孔载体。4.如权利要求3所述的打孔载体，其特征在于该打孔载体是将权利要求1的突变噬菌体E基因与pMD18-T载体可操作性相连接得到的。5.一种构建权利要求4所述的含突变噬菌体E基因的打孔载体的方法，其特征在于使用序列为SEQ ID NO 5所示的引物3和序列为SEQ ID NO 6所示的引物4将权利要求1的突变噬菌体E基因与pMD18-T载体相连接。6.一种制备禽沙门氏菌菌脱疫苗的方法，其特征在于包括以下步骤 I)在含氨苄青霉素的LB中接种含权利要求3的打孔载体的基因工程大肠杆菌，培养后提取表达载体质粒； 2 )使用电极仪或者氯化钙转化法表达载体质粒转入禽沙门氏菌中，在含氨苄青霉素的LB固体培养板中培养，通过PCR鉴定并挑取含表达载体质粒的阳性禽沙门氏菌； ...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐家华，陈瑞爱，张东霞，汤钦，黄妙容，
申请(专利权)人：肇庆大华农生物药品有限公司，广东大华农动物保健品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：