一种活性发酵液及其应用制造技术

一种发酵液及其应用，属生物农药技术领域。该活性发酵液经如下步骤得到：a.?将保藏号：CGMCC?No.?6358的无色杆菌（Achromobacter?sp.）CD-253保存在酵母提取物胰蛋白胨（LB）培养基（酵母提取物：5.0g，胰蛋白胨：10.0g，氯化钠：10.0g，水1000ml，pH：7.0）中，使用时在同样的液体培养基中活化24小时；b.将活化后菌种100μl接种于装有50ml-250ml液体LB培养基三角瓶中，在温度为28℃-37℃，转速为120-180rpm的条件下培养96小时，得培养液。将培养液8000rpm离心10分钟后，取上清放入4℃的冰箱中备用，得到活性发酵液。该活性发酵液在制备毒杀南方根结线虫（M.?incognita）、秀丽隐杆线虫（C.?elegans）、及全齿复合线虫（P.?redivivus）生物制剂中的应用。本发明专利技术的活性物，具有成本低，制备方法简便，高效低毒的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种活性发酵液及其应用，属生物农药

技术介绍
线虫是农业生产中重要的传染性病原之一，使作物减产从而给农业生产带来重大损失。目前对线虫的防治有多种方法，但主要以化学杀线剂为主。由于化学杀线剂的高毒、高残留对人类健康及环境造成潜在威胁，因此生物杀线剂成为线虫防治的一个研究方向。微生物由于易培养，生长周期短，因此利用微生物及其代谢产物防治线虫受到人们的关注。秀_ 隐杆线虫(Caenorhabditis eIegans)和全齿复合线虫(Panagrellusredivivus)易培养和观察,体形大，对环境条件敏感，在室内研究中常用其作为指示线虫。南方根结线虫(Meloidogyne incognita)是危害最为严重的植物病原线虫之一,所引起的 病害是一种极难防治的土传性病害。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种活性发酵液及其应用。本专利技术是这样实现的1、活性发酵液的制备本专利技术使用的细菌菌株为无色杆菌(Achromobacter sp. ) 0)-253,该菌株已于2012年7月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号=CGMCC No. 6358。无色杆菌(Achromobacter sp. ) 0)-253保存在酵母提取物胰蛋白胨(LB)培养基(酵母提取物5. O g,胰蛋白胨10. O g,氯化钠10. O g,水1000 ml, pH :7. O)中，使用时在LB液体培养基中活化24小时。将活化后菌种100 μ I接种于装有50 ml-250 ml液体LB培养基三角瓶中，在温度为28°C -37°C，转速为120-180 rpm的条件下培养96小时，即可得到培养液。将培养液8000 rpm离心10分钟后，取上清放入4°C的冰箱中备用。这样就得到本专利技术的活性发酵液。2、制备试验用的秀_隐杆线虫(C. elegans)、全齿复合线虫(P. redivivus)和南方根结线虫(M.1ncognita)燕麦培养基用于秀丽隐杆线虫(C. elegans)和全齿复合线虫(P. redivivus)培养；燕麦片10 g，水10 ml浸润燕麦片，混匀后加入到50 ml三角瓶中，120°C高温灭菌20min。在超菌工作台中按无菌操作在燕麦片培养基中接入线虫，接种后的三角瓶放置于28°C的培养箱中培养7-10天后，置于4°C冰箱中保存备用。使用时将载有线虫的培养基在无菌条件下，挑取适量已培养好的含线虫的燕麦于擦镜纸上，用简易贝曼漏斗法洗出线虫，用无菌水制成线虫悬液备用(每毫升1000条左右)。番爺根系用于南方根结线虫(M.1ncognita)的制备。取发病严重的番爺根系,洗净后统计根结数量，放入水中浸泡过夜，收集浸泡液；同法再泡洗3次，弃去根系。残液和泥土经2000 rpm离心2 min,弃去上清液,加入494 g/L鹿糖,混勻后2000 rpm离心2 min,将上清液用800目的分离筛清洗，收集分离筛上的幼虫和虫卵。洗液再用100、200和500目的分离筛反复漂洗，收集500目分离筛上的收集物-大部分为虫卵；500目分离筛上的滤过液再经800目的分离筛清洗，收集分离筛上的虫体-2龄幼虫。所分离的虫和虫卵储于4°C的冰箱中备。3实验方法液体浸泡法取5 ml测试样品溶液、200 μ 约含有200条线虫的悬液于直径为6cm的培养皿中，轻轻混匀后将培养皿室温放置。在解剖镜下随机选择10个视野定时(I小时、3小时、6小时、24小时)进行观察，计数病虫数(以线虫不动作为标准)和总线虫数。每个测试样品设三个重复，并以未接种菌株的培养基为对照，得到测试样品对线虫的致死率，以致死率高低评定样品对线虫的毒力。本专利技术的活性发酵液在制备毒杀南方根结线虫(M.1ncognita)、秀丽隐杆线虫 (C. elegans)、及全齿复合线虫(P. redivivus)生物制剂中的应用。本专利技术具有制备方法简单，高效低毒的优点，能够作为制备生物农药杀线剂的应用。具体实施例方式下面用实施例来进一步详述本专利技术，但本专利技术的内容并不局限于此。实施例一将活化后的无色杆菌(Achromobacter sp. ) Q)_253 100 μ I接种于液体LB培养基中(250 ml三角瓶装50 ml培养基)，于30°C，180 rpm条件下培养96小时。将培养液8000 rpm离心10分钟后，取上清作为测试样品，稀释十倍后用液体浸泡法测试活性。结果见表I。表I无色杆菌(Achromobacter sp. ) 0)-253发酵液对南方根结线虫(M.1ncognita)液体浸泡法测定的活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种活性发酵液，其特征在于该活性发酵液经如下步骤得到：a.?将保藏号为CGMCC?No.?6358的无色杆菌（Achromobacter?sp.）CD?253保存在酵母提取物胰蛋白胨（LB）培养基（酵母提取物：5.0?g,?胰蛋白胨：10.0?g,?氯化钠：10.0?g,?水1000?ml,?pH：7.0）中，使用时在同样的液体培养基中活化24小时；b.将活化后菌种100?μl接种于装有50?ml?250?ml液体LB培养基三角瓶中，在温度为28℃?37℃，转速为120?180?rpm的条件下培养96小时，即可得到培养液。将培养液8000?rpm离心10分钟后，取上清放入4℃的冰箱中备用，得到活性发酵液。

【技术特征摘要】
1.一种活性发酵液，其特征在于该活性发酵液经如下步骤得到 a.将保藏号为CGMCCNo. 6358的无色杆菌(Achromobacter sp. )Q)_253保存在酵母提取物胰蛋白胨(LB)培养基(酵母提取物5.0 g，胰蛋白胨10.0 g，氯化钠10.0 g，水1000 ml, pH 7. 0)中，使用时在同样的液体培养基中活化24小时； b.将活化后菌种100u I接种于装有50 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：李国红，卢皓，张克勤，王芯，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：