本发明专利技术公开了一种提高白及组培苗移栽成活率的方法，所用专用培养基由种子萌发培养基1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L、增殖培养基MS+6-BA1.0mg/L+KT3.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L、生根培养基MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L组成，按以下步骤进行：A.白及种子无菌萌发；B、增殖培养；C、生根培养和抗逆诱导；D、炼苗移栽。本发明专利技术在生根阶段加入SA0.3g/L+CTS2g/L的自制诱抗剂10ml/L，使其在生根培养的同时诱导组培苗的抗逆性，增强苗对外界环境的适应能力，以提高苗的移栽成活率。?
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于组培育苗
，具体说涉及。
技术介绍
mkQBletilla striata (Thunb. )Rchb. f.)为兰科白及属多年生草本植物，以干燥假伤出血、疮疡肿毒、肺结核咳血、溃疡病出血等病症，在我国民间作为药用已有上千年的历史，为多种中成药的原料。另外工业上用作染布的粘合剂、在卷烟生产中用白及作粘合剂卷制烟条，在美容上用作护肤化妆品的原料，此外，白及花色艳丽，是一种很好的景观植物。近年来，由于白及的药用价值和观赏价值引起人们的关注，野生白及遭到过度采挖，导致野生资源越来越少，目前已被《中国植物红皮书一稀有濒危植物》第I册收录，同时也被写入了《濒危野生动植物国际贸易公约》保护种类。白及的种子非常细小且无胚乳，自然条件下极难萌发和生长，实生苗的栽培较为困难，传统栽培主要靠分株繁殖，但分株繁殖周期长，繁殖效率低，而且耗种量大，很难满足大量栽培的需要。组织培养技术可以快速繁殖大量种苗，远较分株繁殖快捷高效。近年来，一些地区开展了白及组培快繁的研究，但实验证明白及组培苗移栽成活率非常低，未能使组培快繁技术应用于生产实践。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，该方法在生根阶段加入自制诱抗剂，使其在生根培养的同时诱导组培苗的抗逆性，增强苗对外界环境的适应能力，以提闻苗的移栽成活率。 本专利技术的技术方案是，为组织培养方法，所用专用培养基由种子萌发培养基、增殖培养基、生根培养基组成，其中 种子萌发培养基的配方配比为l/2MS+6-BA I. Omg/L+NAA 0. 75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L ； 增殖培养基的配方配比为MS+6-BA I. Omg/L + KT 3. Omg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L ； 生根培养基的配方配比为MS+NAA0. 5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L ； ，按以下步骤进行 A.白及种子无菌萌发将采摘来的未开裂蒴果用自来水冲洗30min，然后用洗衣粉浸泡20min，再用自来水冲洗30min，然后在超净工作台上用75%酒精浸泡30秒，无菌水冲洗2-3次，再置于次氯酸钠溶液中12分钟，期间不断搅拌，无菌水冲洗3-5次，然后浸泡在无菌水中待用；用无菌的解剖刀将已消毒的白及蒴果切开，将白及种子接种在上述的种子萌发培养基中，培养于光照12小时/天，光照强度3000 lx，温度21 士 2°C的培养室；接种一星期后，种子萌发为肉眼可见的白色原球茎，两星期后白色原球茎膨大变绿，萌发率可达到99%以上；B、增殖培养培养45天待种子苗长到2-3cm左右，在超净工作台上，将种子苗取出，采用直立插入的方法转接到上述的增殖培养基中，培养于光照12小时/天，光照强度3000lx，温度21 士 2°C的培养室。两个月后，增殖倍率达到5 ； C、生根培养和抗逆诱导在超净工作台上，将白及无根苗取出，采用直立插入的方式接种到上述的生根培养基中，生根培养基中同时加有自制诱抗剂10ml/L，培养于光照12小时/天，光照强度为30001X，温度为21 士 2°C的培养室；两个月后，平均每株生根数可达到2-4条；所述自制诱抗剂的配方配比为SA 0.3 g/L + CTS 2 g/L ； D、炼苗移栽从培养室取出培养瓶，置于炼苗室常温适应3d，旋松盖子2d，然后开盖适应3d ;炼苗完成后，洗干净白及根部的琼脂，移栽到盛有松针土的花盆中；花盆周围摆上装满水的盆或敞口瓶以保持周围环境的湿度，移栽后精心管理，每天早晚叶面喷水；2周后可观察到叶片返青，继续培养35天后可见到新叶开始生长，表明移栽的苗已经成活。 与现有技术相比，常规培养的白及组培苗移栽成活率非常低，仅为20%，本专利技术在生根阶段加入自制诱抗剂，使其在生根培养的同时诱导组培苗的抗逆性，增强苗对外界环境的适应能力，以提高苗的移栽成活率，这是本专利技术的关键点。通过本专利技术培养的组培苗，其移栽成活率可达63%，提高了 43个百分点，是原成活率的3. 15倍，说明本专利技术的处理确实有效。附图说明图I是处理A苗和处理B苗在PEG胁迫下的相对含水量； 图2是处理A苗和处理B苗在PEG胁迫下的相对电导率。具体实施例方式 下面根据附图和实施例对本专利技术的作进一步的说明。，为组织培养方法，所用专用培养基由种子萌发培养基、增殖培养基、生根培养基组成。培养基筛选 首先，种子萌发培养基的选择 选择基本培养基、6-BA、NAA、椰子汁四个因素，分别设定3个水平(见表1)，采用L9(34)正交表(见表2)进行正交试验以考察白及种子萌发的适宜培养基。各组培养基均添加30g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为5. 8。表I白及种子萌发正交试验因素与水平表权利要求1. ，其特征是为组织培养方法，所用专用培养基由种子萌发培养基、增殖培养基和生根培养基组成，其中 种子萌发培养基的配方配比为1/2MS+6-BA l.Omg/L+NAA O. 75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L ； 增殖培养基的配方配比为MS+6-BA I. Omg/L + KT 3. Omg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L ； 生根培养基的配方配比为MS+NAA O. 5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L ； 按以下步骤进行 A、白及种子无菌萌发将采摘来的未开裂蒴果用自来水冲洗30min，然后用洗衣粉浸泡20min，再用自来水冲洗30min，然后在超净工作台上用75%酒精浸泡30秒，无菌水冲洗2-3次，再置于次氯酸钠溶液中12分钟，期间不断搅拌，无菌水冲洗3-5次，然后浸泡在无菌水中待用；用无菌的解剖刀将已消毒的白及蒴果切开，将白及种子接种在所述的种子萌发培养基中，培养于光照12小时/天，光照强度3000 lx，温度21 士 2°C的培养室；接种一星期后，种子萌发为肉眼可见的白色原球茎，两星期后白色原球茎膨大变绿； B、增殖培养培养45天待种子苗长到2-3cm左右，在超净工作台上，将种子苗取出，采用直立插入的方法转接到所述的增殖培养基中，培养于光照12小时/天，光照强度3000lx，温度21 士 2°C的培养室；两个月后，增殖倍率达到5 ； C、生根培养和抗逆诱导在超净工作台上，将白及无根苗取出，采用直立插入的方式接种到所述的生根培养基中，生根培养基中同时加有自制诱抗剂10ml/L，培养于光照12小时/天，光照强度3000 lx，温度21 士 2°C的培养室；两个月后，生根数可达2-4条/株； 所述自制诱抗剂的配方配比为SA 0.3 g/L + CTS 2 g/L； D、炼苗移栽从培养室取出培养瓶，置于炼苗室常温适应3d，旋松盖子2d，然后开盖适应3d ;炼苗完成后，洗干净白及根部的琼脂，移栽到盛有松针土的花盆中；花盆周围摆上装满水的盆或敞口瓶以保持周围环境的湿度，移栽后精心管理，每天早晚叶面喷水；2周后可观察到叶片返青，继续培养35天后可见到新叶开始生长，表明移栽的苗已经成活。全文摘要本专利技术公开了，所用专用培养基由种子萌发培养基1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L、增殖培养基MS+6-BA1.0mg/L+KT3.0mg/本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种提高白及组培苗移栽成活率的方法，其特征是：为组织培养方法，所用专用培养基由种子萌发培养基、增殖培养基和生根培养基组成，其中：种子萌发培养基的配方配比为：?1/2MS+6?BA?1.0mg/L+NAA?0.75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L；增殖培养基的配方配比为：MS+6?BA?1.0mg/L?+?KT?3.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L；生根培养基的配方配比为：MS+NAA?0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L；按以下步骤进行：A.?白及种子无菌萌发：?将采摘来的未开裂蒴果用自来水冲洗30min，然后用洗衣粉浸泡20min，再用自来水冲洗30min，然后在超净工作台上用75%酒精浸泡30秒，无菌水冲洗2?3次，再置于次氯酸钠溶液中12分钟，期间不断搅拌，无菌水冲洗3?5次，然后浸泡在无菌水中待用；用无菌的解剖刀将已消毒的白及蒴果切开，将白及种子接种在所述的种子萌发培养基中，培养于光照12小时/天，光照强度3000?1x，温度21士2oC的培养室；接种一星期后，种子萌发为肉眼可见的白色原球茎，两星期后白色原球茎膨大变绿；B、增殖培养：培养45天待种子苗长到2?3cm左右，在超净工作台上，将种子苗取出，采用直立插入的方法转接到所述的增殖培养基中，培养于光照12小时/天，光照强度3000?1x，温度21士2oC的培养室；两个月后，增殖倍率达到5；C、生根培养和抗逆诱导：在超净工作台上，将白及无根苗取出，采用直立插入的方式接种到所述的生根培养基中，生根培养基中同时加有自制诱抗剂10ml/L，培养于光照12小时/天，光照强度3000?1x，温度21士2oC的培养室；两个月后，生根数可达2?4条/株；所述自制诱抗剂的配方配比为：SA?0.3?g/L?+?CTS?2?g/L；D、炼苗移栽：从培养室取出培养瓶，置于炼苗室常温适应3d，旋松盖子2d，然后开盖适应3d；炼苗完成后，洗干净白及根部的琼脂，移栽到盛有松针土的花盆中；花盆周围摆上装满水的盆或敞口瓶以保持周围环境的湿度，移栽后精心管理，每天早晚叶面喷水；2周后可观察到叶片返青，继续培养35天后可见到新叶开始生长，表明移栽的苗已经成活。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：龚宁，王定景，张明生，
申请(专利权)人：贵州师范大学，
类型：发明
国别省市：
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