本发明专利技术涉及一种防治植物真菌病害、促进植物生长的高效枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。本发明专利技术所述枯草芽孢杆菌保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.6788。本发明专利技术涉及的枯草芽孢杆菌具有较高的抑制植物病原真菌生长的能力，且具有较高的遗传稳定性，不污染环境，生态安全，能够广泛应用到植物病原致病真菌，特别是腐霉病菌(Pythiumaphanidermatum)、镰刀菌(Fusarium)、核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)和灰霉病菌(Botrytiscinerea)的防治。该高效枯草芽孢杆菌单独使用或与其它植物生长所需要的有机、无机营养成分一起使用,制备成生物复合肥料具有显著的抗重茬，抗早衰，防治死苗烂根，色正果大，增加提高产量和改良品质量的作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物和生物肥料领域，特别是涉及枯草芽孢杆菌，具体而言，本专利技术涉及一种防治植物真菌病害的枯草芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
植物病害是影响农业生产的主要因素之一，一直以来化学农药防治病虫害对农业生产起了十分重要的作用。但由于化学农药的大量使用，带来很多负面作用，如污染生态环境、危害人畜、产生抗药性，伤害非靶标生物，农药残留等问题，严重影响了人类健康和生态平衡等一系列问题，这促使人们探寻对人类和环境无害并具良好防治效果的新型植物病虫害防治策略。随着全球范围内研制开发高效低毒生防制剂的兴起，开发微生物制剂来控制有害生物，已经成为替代或减少化学农药使用的新型防治措施之一，受到世界各国学者、 企业和消费者的重视。利用有益微生物防治植物病害始于1921年的Hartely利用真菌防治猝倒病(王晓宇，中国农业科学，2011)。到目前植物病害生防微生物已涉及真菌、放线菌、细菌乃至病毒(噬菌体)等种群，而利用拮抗微生物来防治植物病害成为生物防治的一个主策略，并已显示出良好的应用前景。目前，应用较多的生防细菌是促进植物生长的根际细菌(plantgrowthpromoting rhizobacteria, PGPR),其对植物的有益作用主要表现在防病和刺激生长两个方面。对病害的防治机制包括拮抗、寄生、竞争、捕食等多种方式，产生的抗生素是拮抗作用的重要作用方式之一。植物促生细菌通过植于根系和优先占领根系或抑制根上有害细菌或真菌的生长从而达到防控作用。其中枯草芽孢杆菌是一种嗜温性的好氧产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂的内生孢子，其抑制植物病原菌的范围很广，包括根部病害、枝干病害、叶、花部病害和收获后果品病害，在土壤和植物的表面普遍存在，对人畜无毒无害，不污染环境，是一种理想的生防微生物。枯草芽孢杆菌通过成功定殖至植物根际、体表或体内，与病原菌竞争植物周围的营养，分泌抗菌物质以抑制病原菌生长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，从而达到生防的目的。由于它生长速度快、营养需求简单，在植物的表面易于存活、定殖与繁殖，而且生产枯草芽孢杆菌制剂的工艺简单，制剂稳定，施用方便，储存期长，因此是一种理想的生防微生物。据报道，枯草芽孢杆菌对多种由丝状植物病原真菌所引起的植物病害具有良好的防治作用，在粮食作物中，由立枯丝核菌solani )引起的纹枯病、由稻梨孢(.Magnaporthe grisea)引起的稻痕病、由禾白粉菌iErysiphe raminis)弓丨起的禾谷类白粉病等；蔬菜中由灰葡萄孢cinerea)引起的爺科和葫芦科灰霉病、由尖镰孢菌(.Fusarium引起的黄瓜枯萎病、由瓜果腐霉aphanidermatum^Y^M]根腐病以及由疫霉属{Phytophthora')引起的疫病和核盘菌{Sclerotinia sclerotiorum)等引起的蔬菜病害；枯草芽孢杆菌还可以控制采后水果的多种疫病如草莓灰霉病iBotrytis cinerea)和白粉病 iErysiphe raminis),香蕉枯萎病 iFusarium oxysporum)等；此外，枯草芽孢杆菌防治林果病害也有较好的效果，如由聚生小穴壳菌iDothiorellagrearia)弓丨起的杨树溃瘍病，以及由胶孢炭疽gloespor ioofes)引起的炭疽病、由苹果柱盘孢霉(^Wi/ <*-o577oriw 引起的黑点病等。可知,枯草芽孢杆菌现已成为一种理想的生防细菌，筛选对病原真菌有高效抑制作用的菌株是防治植物病害的有效方法之一。但是，目前已知对植物真菌病害具有防治作用的枯草芽孢杆菌大多效果不佳、作用对象比较单一、易受自然环境影响、竞争存活能力有限等弊端(程爱丽，唐文华，王益民.植物病理学报，1996)。出乎意外地，本申请专利技术人经过多年悉心研究，从植物根际土壤中分离到一株新的枯草芽孢杆菌菌株，该菌株对多种植物真菌病害具有良好的防治效果，遗传稳定，且不容易产生抗性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的枯草芽孢杆菌的菌株，所述菌株对多种植物病害 的防治有明显效果，且具有较高的遗传稳定性。本专利技术所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is)已经于2012年11月7日保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 6788。进一步地，本专利技术提供上述枯草芽孢杆菌防治植物真菌病害的用途。优选地，导致所述植物真菌病害的植物真菌病原体为腐霉病菌O0FMiyW、镰刀菌(Fusarium)、核盘菌iSclerotinia)和灰霉病菌iBotrytis、。更优选地，所述植物真菌病害为黄瓜腐霉病菌{Pythium aphanidermatum)、热瓜键刀菌(Fusariutn roseum )、油菜核盘菌{Sclerotinia ScJerofior應)、番爺灰霉病菌(Botrytis cinerea)。进一步地，本专利技术的枯草芽孢杆菌可以制成微生物菌剂，即将所述菌株在PDA培养液(培养液组成为马铃薯200g/L，葡萄糖20 g/L，pH为8)中培养，培养温度为27 °C，培养天数为5天，转速为200 rpm，培养液过滤后，将菌液细胞数调节为IO9个/mL，即制得本专利技术的枯草芽孢杆菌微生物菌剂。进一步地，本专利技术的枯草芽孢杆菌可以制成生物肥，即将枯草芽孢杆菌孢子液(孢子浓度为IxlO8CfuAiL)与无机肥料、有机肥料相混合制得，三者的重量比为I :6 13 ;所述无机肥料选自氮肥、磷肥和钾肥，所述氮肥为尿素或硫酸铵，所述磷肥为磷酸铵或磷酸钙，所述钾肥为硫酸钾或氯化钾；所述有机肥料为堆肥或沼气肥。进一步地，本专利技术的枯草芽孢杆菌可以制成如下生物肥，即将枯草芽孢杆菌孢子液(孢子浓度为IxlO8CfuAiL)与微肥、有机肥料相混合制得，三者的重量比为I :3 6 ;所述微肥选自碳酸锰锌、硼镁肥、钥酸钠、螯合态铜或磷酸铵铁中的一种或多种；所述有机肥料为堆肥或沼气肥。上述生物肥的制备是将原料按比例充分搅拌，混合均匀，随后用传送带经粉碎后送入滚筒造粒机，在滚筒内喷射蒸汽使物料加热至20-40°C，通过滚筒不停转动使物料成球状颗粒。将成球颗粒送入烘干滚筒，输入热风烘干。将烘干的成球经冷却、筛分、罐装或袋装成成品。本专利技术所提供的枯草芽孢杆菌是从植物根际土壤中分离得到的，其实验室命名为菌株MSB1201，已经于2012年11月7日保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 6788。菌株MSB1201在LB固体培养基(培养基组成为胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，琼脂15g/L)上菌落呈圆形，边缘不整齐，乳白色，不透明，表面粗糙有褶皱，无光泽。培养至30h，菌体均以休眠体芽孢的形式存在。菌落呈浅黄色。显微观察菌体为单细胞，杆状，单生或双生，有时成链状。革兰氏染色阳性，芽孢椭圆形。利用生理生化指标对其进行鉴定后发现，其淀粉水解、明胶水解、柠檬酸盐利用、6. 5% NaCl、V-P测定等呈阳性；接触酶、卵黄反应、吲哚产生、丙酸盐的利用等呈阴性。然后利用分子生物学手段对采用16S rDNA基因特异引物对16S rDNA进行扩增，将扩增产物回收并测序，将测序本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，保藏编号为CGMCC？No.6788。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵斌，董金皋，赵巍，
申请(专利权)人：赵斌，董金皋，赵巍，
类型：发明
国别省市：
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