免疫原性组合物和相关的方法技术

本公开涉及用于在免疫原性组合物中使用的佐剂，所述组合物包含至少一种抗原和已用磷酸盐、羧酸盐、碳酸盐、硫酸盐、二膦酸盐或者这些化合物中两种或更多种的混合物处理的含有氢氧基的铝化合物，亦提供使用这些组合物用于预防和治疗疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫原性组合物和相关的方法相关申请的交叉引用本申请要求2009年12月22日提交的美国序号61/289,077、2009年12月22日提交的美国序号61/289,236和2010年4月19号提交的美国序号61/325,615的优先权，其通过引用以其整体结合到本文中。专利
本专利技术涉及免疫学领域，特别地，涉及佐剂及其在免疫中的用途。
技术介绍
佐剂是掺入疫苗制剂中以增强疫苗抗原免疫原性的物质。铝盐(例如磷酸铝和氢氧化铝)是现今在人和兽用疫苗中使用的最常用佐剂。虽然许多包含铝的佐剂是可得的，但是对于任何一种特定的疫苗制剂，由其提供的佐剂/抗原效果可能不是最优的。两种方法已一般被用于制备具有铝化合物的疫苗和类毒素-在存在抗原下原位沉淀铝化合物和将抗原吸附到预形成的铝凝胶上。在铝佐剂的原位沉淀或到预形成的铝凝胶上期间，在铝佐剂上吸附抗原取决于抗原的物理和化学特性、使用的铝佐剂类型和吸附条件。可影响抗原在铝佐剂上的吸附的因素包括静电力、疏水相互作用、范德瓦尔斯力、氢结合、pH、温度、凝胶颗粒尺寸和反应混合物的离子强度。通常，抗原通过静电吸引(即，佐剂和抗原具有相反的电荷)和/或配体交换(例如，抗原上的磷酸基置换佐剂表面上的氢氧基)吸附于铝佐剂(SeeberSJ,等Vaccine1991；9:201-3；IyerS.等,Vaccine2004；29:1475-9)。氢氧化铝在其脱氢、结晶形式化学上是偏氢氧化铝[AlO(OH)]，但在其水相通过获得另外的水分子，它变成氢氧化铝[Al(OH)3](HemS.L.等2007Vaccine25:4985-4986)。偏氢氧化铝具有11的零电荷点(PZC)，因此它在pH7.4下带正电荷。该正电荷使得偏氢氧化铝对于带负电荷的抗原(例如酸性蛋白)是好的吸附剂。在一个研究中，发现用磷酸阴离子预处理氢氧化铝佐剂改变佐剂的表面电荷特性，使得碱性蛋白(溶菌酶，即p.+11.1)可被吸附。发现磷酸阴离子降低佐剂的正ζ电位(mV)，且佐剂表面电荷的该改变将佐剂和溶菌酶之间的静电力从排斥变化为吸引，使得蛋白被佐剂吸附(RinellaJr.J.V.,等,Vaccine1996；14(第4期):298-300)。可以单层吸附于佐剂的抗原最大量被称为“吸附能力”和吸附力的强度被称为“吸附系数”(Jendrick等,Vaccine2003；21:3011-8)。吸附能力对疫苗免疫原性的影响研究表明吸附的抗原剂量百分比与制剂的免疫原性不相关(ChangM-F.等,Vaccine2001；19:2884-9；RomeroMendezIZ等Vaccine2007；25(5):825-33)。与此相反，一个研究显示抗原与包含铝的佐剂的吸附系数与由制剂引起的免疫反应之间相关(Hansen等,Vaccine2007；25:6618-6624)。吸附可影响蛋白的结构和稳定性。来自关于吸附于包含铝的佐剂的影响的研究结果不完全一致：在一个研究中，吸附到Alhydrogel®或Adju-Phos®上后，去稳定化三种蛋白(牛血清白蛋白(BSA)、溶菌酶和卵白蛋白)；在另一研究中，通过吸附到氢氧化铝上，稳定化BSA和Î2-乳球蛋白(BLG)的结构(JonesL.S.等,J.BiolChem2005；280(14):13406-13414；ZhengY.等,Spectroscopy2007；21(5-6):257-268)。用于稳定化具有铝盐佐剂的疫苗组合物液体制剂储存的方法包括冻干、冷冻和冷冻干燥，但经常引起佐剂团聚、免疫原浓度降低和免疫原性损失(例如，Maa等,(2003)J.Pharm.Sci.92:319-332；Diminsky等(1999)Vaccine18:3-17；Alving等(1993)Ann.NYAcad.Sci.690:265-275；和Warren等(1986)AnnRevImmunol.4:369-388，所有的这些通过引用结合)。甚至对于在冷藏条件(例如2℃-8℃)下保持的那些制剂，吸附的抗原可能化学上不稳定，因此，随时间推移可经历水解和破碎。因此，需要一种用于解决这些问题(例如，化学不稳定性、抗原浓度降低)的生产包含铝盐佐剂的疫苗组合物的方法。专利技术概述本专利技术涉及制备抗原稳定性增加的包含至少一种抗原和含有氢氧基的铝化合物的免疫原性组合物的方法。该方法包括：(a)将含有氢氧基的铝化合物用选自以下的化合物处理：(i)磷酸盐、(ii)羧酸盐、(iii)碳酸盐、(iv)硫酸盐、(v)二膦酸盐和(vi)(i)-(v)中两种或更多种的混合物；和(b)将步骤(a)中的制备物与至少一种抗原混合。可将铝化合物备选地用氟化物处理。相对于其中抗原与未处理的含有氢氧基的铝化合物混合的组合物，将抗原与处理的含有氢氧基的铝化合物混合增加抗原的稳定性。亦提供包含至少一种抗原和已用磷酸盐、羧酸盐、碳酸盐、硫酸盐、二膦酸盐、氟化物或者这些化合物中两种或更多种的混合物处理的含有氢氧基的铝化合物的免疫原性组合物以及使用这些组合物用于预防和治疗疾病的方法。在一个实例中，根据公开的方法，制备包含肺炎链球菌蛋白PcpA和已用选择的化合物之一(例如，磷酸盐)处理的含有氢氧基的铝化合物的组合物。组合物亦可包含来自多组氨酸三联体家族的肺炎链球菌蛋白(PhtX：PhtA、PhtB、PhtD、PhtE)和/或解毒的肺炎链球菌溶血素。本专利技术提供数个优势。例如，本专利技术的组合物是免疫原性的并具有改善的稳定性。本专利技术的其他特征和优势从下述详述、附图和权利要求中将显而易见。附图概述参考附图，从下述描述将进一步理解本专利技术。图1a-f.多价制剂(用AlO(OH)或磷酸盐处理的AlO(OH)(PTH)配制)中的PcpA和PhtD的稳定性。使用AlO(OH)或具有终浓度为2mM磷酸盐的PTH制备制剂，然后在各种温度(即5℃、25℃、37℃或45℃)下孵育30周。然后通过RP-HPLC评估完整的抗原浓度。图2.通过ELISA评价的PhtD和PcpA在应激条件下的稳定性。将100μg/mL的二价制剂在37℃孵育12周，并通过ELSIA评价抗原性。图3是关于本专利技术抗原(Prt1、Prt2和Prt3)和铝化合物的配制过程概况的图示。图4a，4b，4c.将Balb/c小鼠用于评估由用几种不同佐剂之一配制的二价疫苗组合物引起的免疫反应(实施例4)。使用纯化的重组PhtD和PcpA蛋白制备制剂(如在实施例1中所述)。通过终点稀释ELISA测量总抗原-特异性IgG效价(图4a)并计算各组的几何平均效价(+/-SD)。计算抗原-特异性IgG1(图4b)和IgG2效价(图4c)以评估IgG1/2a亚类。结果的概述描绘在该图中。图5.描绘通过终点稀释ELISA测量的总抗原-特异性IgG效价和各组的几何平均效价(+/-SD)。在该研究中(实施例6)，将Balb/c小鼠用于评估由新鲜制备的和老化的有佐剂的二价制剂引起的免疫反应。将重组PhtD和PcpA与AlOOH或含有PO4(2mM)的AlOOH配制。该研究中使用的老化的制剂在第一次免疫前已储存大约6个月(约2℃-8℃)。该研究中使用的新鲜制备的制剂在第一次免疫的一周内制备。将多组小鼠用合适的制剂以3周间隔肌内(IM)免疫3次。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.12.22 US 61/289236;2009.12.22 US 61/289077;201.一种包含至少一种抗原的免疫原性组合物，所述至少一种抗原选自肺炎链球菌胆碱结合蛋白APcpA和肺炎链球菌组氨酸三联体蛋白DPhtD，其中所述至少一种抗原吸附于偏氢氧化铝，所述偏氢氧化铝已用磷酸盐处理，其中，相对于其中至少一种抗原吸附于未处理的偏氢氧化铝的组合物，所述处理增加至少一种吸附抗原的稳定性。2.权利要求1的免疫原性组合物，其中元素铝的浓度为0.28mg/ml-1.68mg/ml。3.权利要求1的组合物，其中所述至少一种抗原是蛋白或多糖，或蛋白多糖缀合物。4.权利要求1的组合物，其中元素磷的浓度为2.0mM-80.0mM。5.权利要求1的组合物，其中所述组合物包含缓冲剂。6.权利要求1的组合物，其中所述组合物的pH为6.4-8.4。7.权利要求6的组合物，其中所述组合物的pH为7.4。8.权利要求1的组合物，其中所述组合物包含超过一种抗原。9.权利要求1的组合物，其中超过一种抗原吸附于偏氢氧化铝。10.一种用于制备免疫原性组合物的方法，其包括：(a)将偏氢氧化铝用磷酸盐处理；和(b)将步骤(a)中的制备物与PcpA和PhtD中的至少一种混合，其中，相对于其中至少一种抗原与未处理的偏氢氧化铝混合的组合物，将步骤(a)中的制备物与至少一种抗原混合增加至少一种抗原的稳定性。11.权利要求10的方法，其中所述偏氢氧化铝的浓度为0.28mg/mL-1.68mg/mL。12.权利要求10的方法，其中所述抗原是蛋白或多糖。13.权利要求10的方法，其中磷酸盐的浓度为2.0mM-80.0mM。14.权利要求10的方法，其中所述组合物另外包含缓冲剂。15.权利要求10的方法，其中所述组合物的pH为6.4-8.4。16.权利要求15的方法，其中所述组合物的pH为7.4。17.权利要求10的方法，其中所述组合物包含超过一种抗原。18.权利要求10的方法，其中超过一种抗原吸附于佐剂。19.权利要求17的方法，其中所述至少一种抗原是PcpA或PhtD。20.权利要求19的方法，其中一种抗原是PcpA和第二种抗原是PhtD。21.权利要求20的方法，其中所述组合物另外包含解毒的肺炎链球菌溶血素PlyD1。22.一种包含吸附于偏氢氧化铝的PcpA的免疫原性组合物，所述偏氢氧化铝已用磷酸盐处理，其中，相对于其中PcpA吸附于未处理的偏氢氧化铝的组合物，所述处理增加PcpA的稳定性。23.权利要求22的免疫原性组合物，其中所述组合物另外包含至少一种另外的抗原。24.权利要求22的免疫原性组合物，其中所述组合物另外包含PhtD。25.权利要求24的免疫原性组合物，其中所述组合物另外包含PlyD1。2...

【专利技术属性】
技术研发人员：K哈珀，B朱蒂奇，S加利钱，M奥赫斯奥诺兰汉姆亨，G莫尔菲尔德，F奥萨，MD萨尔哈，
申请(专利权)人：赛诺菲巴斯德有限公司，
类型：
国别省市：