用于确定心血管疾病的风险的手段和方法技术

本发明专利技术涉及医学，具体涉及内科医学和/或心脏病学。本发明专利技术通过测量存在于患者的样品中的miRNA，提供用于给样品分型及鉴别和/或治疗患有心血管疾病或处于患心血管疾病的风险中的患者的手段和方法。本发明专利技术还提供用于鉴别新的心血管疾病治疗的手段和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本发 明涉及医学，具体涉及内科医学和/或心脏病学。心血管疾病技术上包括影响心血管系统的任何疾病。然而，其通常用于指与动脉粥样硬化相关的那些疾病。在美国和大多数的欧洲国家中，心血管疾病是死亡和残疾的第一起因。检测到心脏问题的时候，潜在的起因(动脉粥样硬化)通常是相当晚期了，已经进展了数十年。因此，不断增强的重点在于通过改进风险因素诸如健康饮食、运动和避免吸烟来预防动脉粥样硬化。冠心病(或冠状动脉疾病(CAD))是指冠状循环不能为心肌和周围组织提供充足的循环。CAD是复杂的疾病，其被认为是由很多遗传因素、环境因素及这些因素中的相互作用引起的。事实上，已经鉴定了 CAD的很多风险因素，包括吸烟、高龄、男性性别、糖尿病、高收缩压、心绞痛的个人史、高脂肪饮食、传染原(infectious agent)、肥胖、增加的血楽；总胆固醇和低密度脂蛋白(LDL)胆固醇、增加的血浆甘油三酯及降低的血浆高密度脂蛋白(HDL)胆固醇。然而，家族史是CAD最重要的独立风险因素之一，且孪生子研究还表明遗传因素有助于CAD的发展。CAD的高死亡率、迟发性及家族中的拟表型造成的复杂化也在这个重要疾病的遗传解剖中呈现出大的挑战。CAD的主要起因由缓慢发展的动脉粥样硬化斑块的形成和急性血栓性闭塞事件组成,导致了缺血性的并发症。由于CAD代表了人的发病率和死亡率的主要起因，存在对创新的诊断策略和治疗策略的需要。目前，很难准确地预测受试者在将来是否会发展成CAD。现在，这是通过风险计算器来完成的，其并非非常准确。而且，本领域已知的风险计算器不能预测受试者是否已经缓慢地发展成斑块形成，或是否处于急性闭塞性事件的风险中。一些临床测试可用来评估个体是否患有心血管疾病，比如冠状动脉或外周动脉的变窄。例如，心电图、压力测试(运动心电图)、超声心动图、验血(用于测试某些脂肪、胆固醇、糖和蛋白质的反常水平)被用于诊断的目的。然而，这些测试中没有一个能可靠地预测个体患心血管疾病诸如冠状或外周动脉疾病的风险。因此,存在对新的生物标志物(biomarker)的需要，所述生物标志物能够更可靠地预测心血管疾病的风险。本专利技术的目的是提供用于给处于患心血管疾病的风险中的受试者的样品分型及用于鉴别和/或治疗患有心血管疾病或处于患心血管疾病的风险中的受试者的手段和方法。本专利技术的又一目的是提供用于鉴别在心血管疾病治疗中有用的药物及用于监测这样的治疗的方法。本专利技术通过测量存在于所述患者的样品中的miRNA，提供用于给样品分型及鉴别和/或治疗患有心血管疾病或处于患心血管疾病的风险中的患者的手段和方法。本专利技术还提供用于鉴别新的心血管疾病治疗的手段和方法。本专利技术首次显示出miRNA在血小板中的表达水平的改变与心血管疾病相关。很多人寻找心血管疾病的遗传生物标志物，但是从未有人用血小板来完成。例如，已经显示，循环的miRNA是对于AMI的诊断有用的生物标志物2_4。据报道，心肌损伤后，miR-1和miR-208两者在血浆中是升高的。然而，可能的是，这些miRNA是自受损的心肌细胞释放到血流中，例如因为在出院的AMI患者中，miR-1的水平恢复正常。与在心血管疾病的急性期中考察循环的miRNA的这些研究相反，本专利技术人是在心血管疾病的稳定期中考察存在于血小板中的miRNA，其中释放自例如受损的心肌细胞的miRNA不再起作用。而且，由本专利技术人所发现的miRNA在之前的研究中并未被发现，因为在本专利技术之前，寻找与心血管疾病相关的miRNA的其它人并未寻求miRNA在血小板纯化样品(例如，富含血小板的血浆)中的水平。相反是在急性心血管疾病过程中测定例如血浆样品中的miRNA水平。然而，在急性心血管疾病的过程中，几种miRNA在全血或血浆样品中是被上调和/或下调的(即，异常调节的)。这些异常调节的miRNA包括释放自受损的心脏细胞的miRNA，而且包括例如释放自对心脏损伤起作用的活化白细胞的miRNA。同时，通常伴随急性心血管疾病的缺血性损伤已经对血或血浆中的几种miRNA的表达水平产生影响。之前的任何研究没有鉴别在本专利技术中被鉴别为心血管疾病的预测性风险因素的miRNA，因为这些miRNA没有以允许通过由专利技术人所使用的筛选法(微阵列)来测定CAD患者和健康对照之间的I. 5-2倍的差异的高水平存在于心血管疾病的急性期的全血中微阵列，这种筛选方法是测试大量的总miRNA所需要的。 通过使用在血小板方面相对纯的样品即富含血小板的血浆样品，专利技术人能够鉴别存在于血小板中且在处于风险中但还未患有急性心血管疾病的受试者中被异常调节的miRNA。这些miRNA充当处于患心血管疾病的风险中的受试者的生物标志物，且因此可以用作预测性的生物标志物。miRNA是通过抑制mRNA的翻译或促进mRNA的降解来抑制蛋白质合成的小的核酸分子。继成为正常发育和生理学的重要调节器之后，已经将miRNA的异常调节的表达与许多人类疾病相关联。结果，认为人的miRNA作为生物标志物是非常有用的。最近，已经发现了微RNA通路在无核血小板中的存在1O现在，本专利技术提供这样的见解血小板miRNA的表达特征(expression profile)在确定受试者是否患有心血管疾病或是否处于患心血管疾病的风险中是有用的。例如，本专利技术表明，在与健康对照的血小板相比时，特定的miRNA在患有CAD的患者的血小板中被差异表达。在第一个实施方式中，本专利技术提供用于测定受试者是否处于患心血管疾病的风险中的方法，该方法包括用所述受试者的样品来测定至少一种miRNA的(相对)表达水平，所述 miRNA 选自由 miR-545 :9. I、miR-624* 和 miR-454*、hsaiiR-340*、hsa-miR-615-5p、hsa-miR-451、hsa-miR-1280及这些miRNA中的任一个的同源物和直系同源物(orthologue)组成的组，且将所述至少一种miRNA的表达水平与参考值进行比较，其中所述比较的结果指示所述个体是否患有心血管疾病或处于患心血管疾病的风险中。优选地，所述方法为体外方法。所述参考值优选地是通过使用参考样品来测定所述至少一种miRNA的表达水平而得到的，参考样品优选地来自未患有心血管疾病或未处于患心血管疾病的风险中的受试者。在优选的实施方式中，所述miRNA选自由hsa-miR-340*、miR-624*、miR-454及这些miRNA中的任一个的同源物和直系同源物组成的组。在更优选的实施方式中，所述miRNA为hsa-miR-340*或hsa-miR-340*的同源物或直系同源物。在另一个更优选的实施方式中，所述miRNA为miR-624*或miR-624*的同源物或直系同源物。没有必要同时测定参考值和测试值两者。例如，可能的是，优选地使用来自未患有心血管疾病或未处于患心血管疾病的风险中的受试者的样品来测定参考值且反复使用所述参考值以测定测试样品中的所述至少一种miRNA的相对表达是否是患心血管疾病的个体风险的指示。可能的是，将已经表明是患心血管疾病的低风险的指示的表达水平用作参考值，例如来自健康个体的许多样品中的miRNA的平均水平。另一方面，还可能能够的是，将已经表明是心血管疾病或患心血管疾病的高风险的指示表达水本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·E·J·M·克里莫斯，莎拉·约翰娜·平托希茨马，
申请(专利权)人：阿姆斯特丹大学学术医学中心，
类型：
国别省市：