本发明专利技术是从枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂，其提取方法为：枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣经甲醇超声提取3次，合并提取液，减压干燥得甲醇总提取物，将甲醇总提取物加水溶解后，分别用等体积的正己烷、乙酸乙酯萃取3次，减压回收溶剂，得正己烷提取物、乙酸乙酯提取物；剩下的水层经大孔树脂柱处理，甲醇洗脱，得甲醇洗脱物、水洗脱物，采取α-葡萄糖苷酶活性体系追踪，发现正己烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇洗脱物均表现出一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性，将上述三种提取物经硅胶柱色谱，ODS柱色谱以及高效液相制备色谱分离得到14个化合物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种药物的提取分离方法及应用，特别是一种从枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法及其应用。
技术介绍
α -葡萄糖苷酶(a -glucosidase)是一类能够从含有α -葡萄糖苷键底物的非还原端催化水解α-葡萄糖基的酶的总称，其广泛分布于生物体中，参与食物消化、糖蛋白的生物合成，多糖及糖复合物的合成与分解代谢等许多生物代谢过程。抑制α-葡萄糖苷酶的活性可调节细胞表面的复合糖质，而糖尿病、肥胖症、高血脂、炎症、癌变、免疫反应和病毒感染等都和细胞表面的复合糖质有密切关系，因此，开发出适当的α -葡萄糖苷酶抑制 剂类药物，可以治疗很多疾病。枸杞(Lycium)是我国传统的中草药，首载于《神农本草经》，之后历代本草对其都有详尽的记载。果实入药称枸杞子，味甘，性平。有滋补肝肾，益精明目功效。主治肝肾阴虚、头晕目眩、腰膝酸痛等证。现代免疫学和临床医学多项试验表明枸杞果实及枸杞多糖可有效提高机体免疫调节功能，治疗糖尿病及其并发症，具有抗突变、抗肿瘤、抗疲劳、延缓衰老、明目养颜保肝降血糖等功效。而对枸杞籽的研究不多，一般主要用于提取具有医疗保健作用的枸杞油，提取后的残渣则视为废物，但枸杞籽和果是包含在一起的，且籽约占干果的四分之一重量，为了开发利用枸杞籽及其提取枸杞油后废弃的残渣，我们对其进行了化学成分及生物活性的研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的制备方法及其应用。本专利技术的目的按照下述方案实现从枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取α -葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法，其步骤为枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣经甲醇超声提取3次，合并提取液，减压干燥得甲醇总提取物，将甲醇总提取物加水溶解后，分别用等体积的正己烷、乙酸乙酯萃取3次，减压回收溶剂，得正己烷提取物、乙酸乙酯提取物；剩下的水层经大孔树脂柱处理，甲醇洗脱，得甲醇洗脱物、水洗脱物，采取α-葡萄糖苷酶活性体系追踪，发现正己烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇洗脱物均表现出一定的α -葡萄糖苷酶抑制活性，将上述三种提取物经硅胶柱色谱，ODS柱色谱以及高效液相制备色谱分离得到14个化合物，结构和名称见附图Io所述抑制剂的用途，是将其用作临床治疗II型糖尿病治疗的首选药和I型糖尿病的胰岛素治疗的辅助药物；所述抑制剂的用途，是将其用作预防艾滋病的辅助药物；所述抑制剂的用途，是将其用作阻止肿瘤血管生长的抗肿瘤药物。α -葡萄糖苷酶抑制活性的测定本专利技术以4-硝基酚-2-D-吡喃葡萄糖苷(缩写PNPG)为反应底物，具体的反应体系为25 μ L PNPG，加入25 μ L各种浓度的样品溶液后，加入25 μ L α-葡萄糖苷酶，再加Λ 175 μ L磷酸盐缓冲液，在混合器上混合10分钟后。在37°C反应15分钟，加入IM Na2CO350 μ L终止反应，在405nm波长处测定吸收值。通过不加样品测定样品空白，不加α -葡萄糖苷酶测定阴性对照。样品的抑制率通 过以下公式计算抑制率) = (0DNegative control-0DB1ank) (0Dsampie ODganlP^e blank) I ^^Negative controlIank^附图说明附图I是本专利技术从枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取得到的14个化合物的名称及结构示意图。附图2是本专利技术枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣提取工艺流程图，图中，LB代表枸杞；M为甲醇；N为乙腈汀为O. 06%三氟乙酸；HAc为3%的醋酸；例如12% NT是12%的乙腈溶液(包含O. 06%三氟乙酸);IC50为半数致死率；HPLC为制备高效液相色谱法。单体化合物的IC50 (半数致死率)单位Mm具体实施例方式下面通过具体实施例对本专利技术进行描述。但本专利技术的范围并不仅限于此。I、提取与分离枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣各I. OOkg经甲醇超声提取3次，合并提取液，减压干燥得甲醇总提取物8. 97g，该提取物具有抗α-葡萄糖苷酶活性，IC50为2. 33mg/mL。将甲醇总提取物加水溶解后，分别用等体积的正己烷、乙酸乙酯萃取3次，减压回收溶剂，得正己烷提取物I. 90g、乙酸乙酯提取物I. 30g。剩下的水层经大孔树脂柱处理，甲醇洗脱，得甲醇洗脱物0.52g、水洗脱物4.61g。采取α-葡萄糖苷酶活性体系追踪，发现正己烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇洗脱物均表现出一定的α -葡萄糖苷酶抑制活性，IC50分别为2. llmg/mL, I. 57mg/mL, I. 89mg/mL。因此将上述三部分经硅胶柱色谱，ODS柱色谱以及高效液相制备色谱等方法，分离得到14个化合物，其分离流程图如附图2所示。2、14种化合物化学成分的结构鉴定化合物I :白色固体(甲醇)，在254nm下有暗斑，分子式为C17H17NO3。氢谱的低场区给出两组AA' BB'偶合系统的芳香质子信号δ7. 39(1H，d，J=8.6Hz，H-2，6)，6.72(lH，d，J=8.6Hz，H-3，5)和 5 7. 05(1H, d,J=8. 6Hz,H-2/，6' ),6. 75(1H, d,J=8. 6Hz,H-3'，5')，推测该化合物中应有两个1，4 二取代的苯基片段；一组反式双键质子信号δ 7. 44 (1Η, d，J=15. 7Ηζ, Η_7)，6·38(1Η，d，J=15. 7，Hz, H_8);高场区给出一组 A2M2 偶合系统的质子信号 δ3. 46(2H，t，J=7. 2Hz，H-8' ),2. 75 (2H, t, J=7. 2Hz, W~T )。碳谱给出17个碳信号，其中包括I个羰基碳信号δ 169. 3 (C=O)，两个孤立的连氧芳香碳信号δ 160.5 (C-4)，157.0 (C-f );两个反式烯碳信号 δ 141. 8 (C-7)，118. 6 (C-8);—个连氮碳信号S42.6(C-8');进一步说明该化合物为对羟基桂皮酸与对羟基苯乙胺酰化脱水而成的酰胺。根据以上数据将该化合物鉴定为N-反式-香豆酰酪胺(N-(p-trans-coumaroyl)tyramine)化合物2 :白色固体(甲醇)，在254nm下有暗斑，分子式为C17H17NO3，氢谱的低场区给出两组AA, BB'偶合系统的芳香质子信号δ 7. 36 (1Η, d, J=8. 6Hz, H-2,6), 6. 69 (1H, d,J=8. 6Hz，H-3，5)和 δ 7. 01(lH，d，J=8. 6Hz，H-2'，6' ) ,6. 72(lH,d, J=8. 6Hz,H-3/ ,5')，推测该化合物中应有两个1，4 二取代的苯基片段；一组顺式双键质子信号δ6.61(1Η，d，J=12. 5Hz, H-7)，5· 79 (1H，d，J=12. 5，Hz, H_8);高场区给出一组A2M2偶合系统的质子信号δ 3. 39 (2H，t，J=8. IHz，H-8' ),2. 69(2H, t, J=8. 1Ηζ,Η-7/ )。化合物 2 与化合物 I 的氢谱和碳谱数据很相似，差别在于化合物2的双键为顺式双键。通过与化合物I比较，将该化合物鉴定为N-顺式-香豆酰酪胺(N-(p-cis-coumaroyl本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣中提取α？葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法，其提取步骤为：枸杞籽及其提取枸杞油后的残渣经甲醇超声提取3次，合并提取液，减压干燥得甲醇总提取物，将甲醇总提取物加水溶解后，分别用等体积的正己烷、乙酸乙酯萃取3次，减压回收溶剂，得正己烷提取物、乙酸乙酯提取物；剩下的水层经大孔树脂柱处理，甲醇洗脱，得甲醇洗脱物、水洗脱物，采取α？葡萄糖苷酶活性体系追踪，发现正己烷提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇洗脱物均表现出一定的α？葡萄糖苷酶抑制活性，将上述三种提取物经硅胶柱色谱，ODS柱色谱以及高效液相制备色谱分离得到14个化合物，分别为N？反式？香豆酰酪胺(N？(p？trans？coumaroyl)tyramine)(1)、N？顺式？香豆酰酪胺(N？(p？cis？coumaroyl)tyramine)(2)、N？反式？对羟基苯乙基阿魏酰胺(N？p？trans？hydroxyphenethyl？ferolamine)(3)、大麻酰胺己(cannabisin？F)(4)、大海米酰胺(grossamide)(5)、芥子醛(sinapaldehyde)(6)、阿魏醛(ferulaldehyde)(7)、对羟基苯甲醛(p？hydroxy？benzaldehyde)(8)、香草酸(vanillic？acid)(9)、对香豆酸(trans？p？hydroxycinnamic？acid)(10)、3？羟基？1？(4？羟基？3？甲氧基苯基)丙？1？酮(3？hydroxy？1？(4？hydroxy？3？methoxyphenyl)propan？1？one)(11)、2，3？二羟基？1？(4？羟基？3？甲氧基苯基)丙？1？酮(2，3？dihydroxy？1？(4？hydroxy？3？methoxyphenyl)propan？1？one)(12)、东莨菪素(scopoletine)(13)，东莨菪苷(scopoloside)(14)。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李巍，王英华，小池一男，付红伟，谢鹏，
申请(专利权)人：宁夏回族自治区药品检验所，李巍，
类型：发明
国别省市：
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