本发明专利技术公开了一种饲用多功能微生物活菌制剂的制备方法。该制剂由酿酒酵母、产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和干酪乳酸菌的两种或两种以上组成的混合菌在特定培养基中培养，发酵过程采取添加亚硒酸钠，发酵温度28℃-35℃，发酵36-48h小时，获得富含有机硒和谷胱甘肽的微生物活菌制剂。该制剂一方面具有常规微生物活菌制剂的功能，如能调节动物肠道微生态平衡，增强机体免疫机能和抗应激能力，另一方面富含有机硒和谷胱甘肽，具有硒利用率高、毒性低、增强动物免疫能力等优点，能够有效提高畜禽养殖效益。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术的应用范围涉及畜牧养殖业领域，具体涉及一种饲用多功能微生物活菌制齐U。它一方面具有常规微生物活菌制剂的功能，如调节动物肠道微生态平衡，增强机体免疫机能和抗应激等能力；另一方面富含有机硒，养殖过程中具有硒利用率高、毒性低、对环境污染小等优点；同时该制剂还富含谷胱甘肽和L-乳酸，可有效提高畜禽养殖效益。
技术介绍
畜禽饲料中添加抗生素可提高养殖效益。但抗生素的过量使用会带来药物残留、细菌耐药性等问题，极大地威胁人体健康。2006年I月，欧盟已全面禁止使用抗生素促生长饲料添加剂。日本对畜牧业中使用抗生素也有严格的规定。美国FDA和CDC(疾病控制中 心)也号召重新评估抗生素饲料添加剂的继续使用。目前，我国对绿色安全、无抗生素残留的畜禽产品的需求日趋旺盛，抗生素饲用替代品成为应用推广的热点。饲用微生物活菌制剂是采用包括干酪乳杆菌、嗜乳酸杆菌、乳链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母、产朊假丝酵母、沼泽红假单胞菌等在内的多种我国农业部允许使用的有益微生物制成的含有活菌制剂，属于营养保健类饲料添加剂，具有无毒、无残留、无抗药性等优点，应用前景广阔。当前动物日粮主要的补硒方式是添加亚硒酸钠。由于亚硒酸离子生物有效性低、毒性大、且易污染环境，瑞典已限制其在乳猪料中使用，日本则全面禁止其在动物饲料添力口。富硒酵母作为一种有机硒饲料添加剂，具有硒利用率高、毒性低、环境污染小等优点，其添加效果大大优于亚硒酸盐。谷胱甘肽具有清除自由基和解毒，促进氨基酸转运，保护胃肠粘膜，提高免疫力，参与蛋白质合成与降解，调节基因的复制、转录，调节细胞生长等多种生物学功能。近年来，谷胱甘肽作为饲料添加剂、免疫增强剂或某些畜禽疾病的治疗药物，在畜禽养殖业中展示了良好的应用前景。基于上述背景，开发出一种兼有常规微生态功能，同时又富含生物有机硒与谷胱甘肽的微生物活菌制剂，应用于畜牧养殖业，对减少抗生素和化学药物的使用，生产安全的富硒畜禽产品，提高养殖效益具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有微生物活菌制剂功能单一，提供一种饲用多功能微生物活菌制剂，该制剂除具有常规微生态制剂的功能外，同时还富含有机硒蛋白与谷胱甘肽。有机硒蛋白能有效补充动物日粮中的硒元素，具有低毒，快速吸收，环境污染小等优点。谷胱甘肽具有清除自由基和解毒，促进氨基酸转运，保护胃肠粘膜，提高免疫力，参与蛋白质合成与降解，调节基因的复制、转录，调节细胞生长等功能。本专利技术的目的通过以下技术方案实现本专利技术的饲用多功能微生物活菌制剂是呈红棕色液态，含有多种混合菌株，以酿酒酵母{Saccharomyces cerevisiae)、产I元假丝酵母{Candida tails)、枯草芽抱杆菌{Bacillus 5^ii7i5·)、地衣芽抱杆菌(Bacillus 7icA<9/7i/br i5·)、干酪乳酸菌{Lactobacillus easei)等五种有益微生物及日粮必须的微量元素有机硒蛋白和免疫增强剂谷胱甘肽为特征组分，采用添加亚硒酸钠，通过发酵罐混合培养多种微生物，按照特定发酵工艺直接发酵制成。该饲用多功能微生物活菌制剂是由酿酒酵母、产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、干酪乳酸菌五种益生菌组成，其中富含有机硒蛋白和谷胱甘肽；制剂中活菌总数分别为酿酒酵母彡lX108CFU/ml，产朊假丝酵母彡I X 108CFU/ml，枯草芽孢杆菌彡lX109CFU/ml，地衣芽孢杆菌彡I X 109CFU/ml，干酪乳酸菌彡I X 109CFU/ml，制剂中含有功能性营养物分别为有机硒含量10mg/L-50mg/L，谷胱甘肽含量O. 5_5g/L，L-乳酸的含量10g/L-60g/L。本专利技术所述饲用多功能微生物活菌制剂的制备工艺步骤为 I、种子纯培养 (1)酿酒酵母、产朊假丝酵母的纯种培养 (a)菌种活化 无菌条件下取酿酒酵母或产朊假丝酵母的冻干菌种，划线接种于试管麦芽汁琼脂斜面，30°C培养18 36小时，至斜面上肉眼可见菌落时，即可准备移种； (b)—级种子培养 无菌条件下用接种环挑取单菌落，接入装有种子培养液的三角瓶中，30°C培养If 48小时，至菌体600nm吸光值为1_5左右时,可移种至二级种子。种子培养基组成为12Brix.麦芽汁； (c)二级种子培养 无菌条件下，二级种子液以体积比10%的接种量接入50 L发酵罐，装量系数为60%(v/V)，二级种子培养基为葡萄糖30 g/L,酵母浸膏5 g/L,蛋白胨5 g/L, (NH4)2SO4 3g/L,MgSO4 · 7H20 O. 2 g/L, NaCl 0. I g/L, KH2PO4 2 g/L,自来水定容，调 pH6. 0，30°C培养 24 小时，搅拌150r/min，通气量0. 5 m3/h。当种子液600nm吸光值为5_10左右时，可作为二级种子液接入发酵培养基中； (2)枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的纯种培养 (a)菌种活化 无菌条件下取枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的冻干菌种，划线接种于试管营养肉汤琼脂斜面，37°C培养18 24小时，然后划线转接于营养肉汤琼脂茄子瓶斜面，37°C培养2(Γ24小时，镜检当90%以上菌体形成芽孢时，即可准备移种； (b)—级种子培养 用无菌水将茄子瓶斜面上的菌泥刮洗下来，装入内有玻璃珠的无菌三角瓶中，振荡分散，获得均匀的菌悬液。将菌悬液在85°C水浴中加热5分钟，以体积比5%的接种量接入5L三角瓶中，三角瓶装量系数为40%(v/v)。种子培养基组成为葡糖糖10 g/L，蛋白胨5 g/L，酵母膏3 g/L,NaCl 5 g/L，自来水定容，调ρΗ7· 0-7. 5，37°C培养18_24h，搅拌转速150r/min，通气量为O. 5m3/h。当种子液600nm吸光值为2_5时，即可移种； (c)二级种子培养无菌条件下，将一级种子液按体积10%的接种量接入50 L发酵罐，装量系数为60%(v/V)，二级种子培养基为葡糖糖30 g/L,蛋白胨10 g/L,酵母膏5 g/L, NaCl 5 g/L,自来水定容，调pH7. 0-7. 5，37°C培养18-24h，搅拌转速150r/min，通气量为O. 5m3/h。当种子液600nm吸光值为5-10时，即可移种； (3)干酪乳酸菌的纯种培养 (a)菌种活化 无菌条件下取干酪乳酸菌的冻干菌种，接入装有活化培养基的试管中，进行静置厌氧培养。活化培养基组成为葡萄糖20 g/L，蛋白胨10 g/L,牛肉浸膏10 g/L，酵母浸膏5g/L, K2HP042 g/L，柠檬酸二胺 2 g/L, NaAc 5 g/L，吐温-80 I g/L, MgSO4 · 7H20 0. 2 g/L,MnSO4 · H2O 0. 05 g/L，CaCO3 20 g/L，pH6. 5，37°C培养 30_36h，然后以体积比 10% 的接种量转接于新鲜活化培养基中，37°C静置厌氧培养24-36h ； (b)—级种子培养 活化菌液以体积比10%接种量接入5L三角瓶中，三角瓶的装量系数为60% (v/v)，种子培养基组成为葡萄糖30 g/L，蛋白胨10 g/L,牛肉浸膏10 g/L，酵母浸膏5 g/L, K2H本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种饲用多功能微生物活菌制剂的制备方法，其特征是：A、种子纯培养：（1）酿酒酵母、产朊假丝酵母的纯种培养(a)菌种活化无菌条件下取酿酒酵母或产朊假丝酵母的冻干菌种，划线接种于试管麦芽汁琼脂斜面，30℃培养18~36小时，至斜面上肉眼可见菌落时，即可准备移种；(b)一级种子培养无菌条件下用接种环挑取单菌落，接入装有种子培养液的三角瓶中，？30℃培养18~48小时，至菌体600nm吸光值为1？5左右时，可移种至二级种子；种子培养基组成为12Brix.麦芽汁；(c)二级种子培养无菌条件下、二级种子液以体积比10%的接种量接入50？L发酵罐，装量系数为v/v？60%，二级种子培养基为：葡萄糖30？g/L，酵母浸膏5？g/L，蛋白胨5？g/L，(NH4)2SO4？3g/L，MgSO4·7H2O？0.2？g/L，NaCl？0.1？g/L，KH2PO4？2？g/L，自来水定容，调pH6.0，30℃培养24小时，搅拌150r/min，通气量0.5？m3/h；当种子液600nm吸光值为5？10左右时，可作为二级种子液接入发酵培养基中；(2)枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的纯种培养(a)菌种活化无菌条件下取枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的冻干菌种，划线接种于试管营养肉汤琼脂斜面，37℃培养18~24小时，然后划线转接于营养肉汤琼脂茄子瓶斜面，37℃培养20~24小时，镜检当90%以上菌体形成芽孢时，即可准备移种；(b)一级种子培养用无菌水将茄子瓶斜面上的菌泥刮洗下来，装入内有玻璃珠的无菌三角瓶中，振荡分散，获得均匀的菌悬液；将菌悬液在85℃水浴中加热5分钟，以体积比5%的接种量接入5L三角瓶中，三角瓶装量系数为v/v？40%；种子培养基组成为：葡糖糖10？g/L，蛋白胨5？g/L，酵母膏3？g/L，NaCl？5？g/L，自来水定容，调pH7.0？7.5，37℃培养18？24h，搅拌转速150r/min，通气量为0.5m3/h；当种子液600nm吸光值为2？5时，即可移种；(c)二级种子培养无菌条件下、将一级种子液按体积10%的接种量接入50？L发酵罐，装量系数为v/v？60%，二级种子培养基为：葡糖糖30？g/L，蛋白胨10？g/L，酵母膏5？g/L，NaCl？5？g/L，自来水定容，调pH7.0？7.5，37℃培养18？24h，搅拌转速150r/min，通气量为0.5m3/h；当种子液600nm吸光值为5？10时，即可移种；(3)干酪乳酸菌的纯种培养(a)菌种活化无菌条件下取干酪乳酸菌的冻干菌种，接入装有活化培养基的试管中，进行静置厌氧培养；活化培养基组成为：葡萄糖20？g/L，蛋白胨10？g/L,牛肉浸膏10？g/L，酵母浸膏5？g/L，K2HPO42？g/L，柠檬酸二胺2？g/L，NaAc？5？g/L，吐温？80？1？g/L，MgSO4·7H2O？0.2？g/L，MnSO4·H2O？0.05？g/L，CaCO3？20？g/L，pH6.5，37℃培养30？36h，然后以体积比10%的接种量转接于新鲜活化培养基中，37℃静置厌氧培养24？36h；(b)一级种子培养活化菌液以体积比10%接种量接入5L三角瓶中，三角瓶的装量系数为v/v？60%，种子培养基组成为：葡萄糖30？g/L，蛋白胨10？g/L,牛肉浸膏10？g/L，酵母浸膏5？g/L，K2HPO42？g/L，柠檬酸二胺2？g/L，NaAc？5？g/L，吐温？801？g/L，MgSO4·7H2O？0.2？g/L，MnSO4·H2O？0.05？g/L，CaCO310？g/L，pH6.5，37℃静置厌氧培养30？36？h；(c)二级种子培养无菌条件下、一级种子液以体积比10%接种量接入30？L发酵罐中，发酵罐的装量系数为v/v？80%，种子培养基组成为：葡萄糖30g/L，蛋白胨10g/L,牛肉浸膏10g/L，酵母浸膏5g/L，K2HPO4？2g/L，柠檬酸二胺2g/L，NaAc？5g/L，吐温？801？g/L，MgSO4·7H2O？0.2？g/L，MnSO4·H2O？0.05g/L，CaCO3？10g/L，pH6.5，37℃静置厌氧培养30？36h；B、酵母菌、芽孢菌和乳酸菌的混合培养？(1)？混合发酵培养基的制备按质量将红糖60？100g、玉米浆10？40g、硫酸铵5？20g、硫酸镁2？10g、磷酸二氢钾5？20g、磷酸氢二钾5？20g、柠檬酸二胺0.5？2g、氯化锌0.05？0.1g、氯化钙0.1？0.2g混合均匀，加入蒸馏水定容1升，充分搅拌溶解完全后密封加热至80？90℃灭菌0.5？2小时，冷却至室...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱建航，张帆，邹晓阳，谢莉，胡波平，
申请(专利权)人：江西昌丰由由生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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