本发明专利技术涉及用于区分原发性肺癌与癌旁组织的microRNA标志物。具体地，本发明专利技术涉及38个可用于区分原发性肺癌癌组织及癌旁组织的microRNA标志物。经检验证明，这些特异性的microRNA标志物可非常有效地区分原发性肺癌癌组织及癌旁组织。本发明专利技术还涉及检测所述microRNA标志物的芯片和试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，更具体地，本专利技术涉及ー类可用于区分原发性肺癌与癌旁组织的microRNA标志物及其用途。本专利技术还涉及检测所述microRNA标志物的芯片和试剂盒。
技术介绍
肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，发展迅速，治疗困难，病死率高。因此，肺癌的尽早诊断就愈发显得迫切。任何事物的发生发展都处于内外因共同作用之下，内因为主，外因为辅。基因作为生命的遗传介质，在生物体的生、老、病、死中处于基础的内因地位。绝大部分基因通过转录 生成核糖核酸，再翻译生成蛋白质而发挥生物学功能。microRNA (miR或miRNA，微小RNA)是ー类在较高等的真核生物体内广泛存在的，长度约18-26个碱基的单链RNA分子。它可以通过碱基配对原则特异性地与ー些mRNA上的靶位点相结合，引起靶mRNA降解或翻译抑制，进而在转录后水平对靶基因进行调控。microRNA来源于长度约IOOObp的长链RNA初始转录产物(Pri-miRNA)，Pri-miRNA分子在细胞核中经Drosha酶剪切形成长度约60_80nt的具有茎环结构的miRNA前体(PreniRNA)。PreniRNA转运至胞质后，被Dicer酶进ー步切割成长约22nt的双链miRNA。双链miRNA解开后，成熟的miRNA进入RNA诱导基因沉默复合物(RNA-inducedsilencing complex, RISC),与互补mRNA完全或不完全配对，降解祀mRNA或阻遏其表达。尽管microRNA在细胞总RNA中所占的比重很小，但由于它可以高效地对所有具有靶位点的mRNA产生调控作用，microRNA在生物体的发育乃至肿瘤的发生、发展过程所起的作用仍不可小视。然而，迄今为止，本领域对于与肿瘤(如肺癌)相关的microRNA 了解甚少，因此本领域迫切需要进ー步地分离各种microRNA，尤其是与肿瘤的发生、转移、复发或检测有关的microRNAο
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供ー类新的、可用于区分原发性肺癌癌组织及癌旁组织的microRNA标志物及其用途。本专利技术的另ー目的是提供检测所述microRNA标志物的芯片和试剂盒。在本专利技术的第一方面，提供了一种分离的miRNA，所述的miRNA选自⑴序列如SEQ ID NO 38所示的miRNA，其中η为选自ト38的正整数；或(ii)与 SEQ ID NO n 所示序列互补的 miRNA。在另ー优选例中，所述的miRNA分离自人。在本专利技术的第二方面,提供了ー种miRNA集(set)或组合(combination),所述的集或组合由序列如SEQ ID NO 1-38所示的38种miRNA所构成。在本专利技术的第三方面，提供了一种分离的或人工构建的前体miRNA，所述的前体miRNA能在人细胞内剪切并表达成本专利技术第一方面中所述的miRNA。在本专利技术的第四方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述的多核苷酸能被人细胞转录成前体miRNA，所述的前体miRNA能在人细胞内被剪切且表达成本专利技术第一方面中所述的miRNA。在另ー优选例中，所述的多核苷酸具有式I所示的结构Seq正向-X-Seq反向式 I,式I 中，能在人细胞中表达成所述的miRNA的核苷酸序列；与Seq1^1基本上互补或完全互补的核苷酸序列； X为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq正向和Seq反向不互补；并且式I所示的结构在转入人细胞后，形成式II所示的ニ级结构 Seq 正向—,~ NX Seq反向式II，式II中，Seq正向、Seq反向和X的定义如上述，I I表示在Seqtt和Seqfi^1之间形成的碱基互补配对关系。在本专利技术的第五方面，提供了ー种载体，它含有本专利技术第一方面中所述的miRNA，或第四方面中所述的多核苷酸。在本专利技术的第六方面，提供了本专利技术第一方面中所述的miRNA的用途，用于制备区分原发性肺癌癌组织及癌旁组织的芯片或试剂盒。在本专利技术的第七方面，提供了ー种miRNA芯片，所述的miRNA芯片包括固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针特异性地对应于 SEQ ID NO :1-38 所示的部分或全部序列(如 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38 种)。在另ー优选例中，所述的寡核苷酸探针含有互补结合区；和/或与固相载体相连的连接区。在本专利技术的第八方面，提供了上述miRNA芯片的用途，用于制备区分原发性肺癌癌组织及癌旁组织的试剂盒。在本专利技术的第九方面，提供了ー种试剂盒，所述的试剂盒中含有本专利技术上述所述的miRNA芯片。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图I显示以MDS算法转换后的有癌样本(浅色)和癌旁样本(深色)在三维空间内的散点图。具体实施方式 本专利技术人经过长期而广泛的研究，通过检测原发性肺癌的癌组织样本和癌旁组织样本的microRNA表达谱水平,用统计学方法,首次从中筛选出38个特异性的microRNA。经检验证明，这些特异性的microRNA标志物可非常有效地区分原发性肺癌癌组织及癌旁组织。在此基础上完成了本专利技术。具体地，本专利技术人采用芯片杂交的方法得到原发肺癌的癌组织样本和癌旁组织样本的microRNA表达谱，通过比较两种组织的表达谱，得到癌组织样本和癌旁组织这两种样本间差异表达的microRNA。以这些差异microRNA作为候选,使用贝叶斯网络(BayesNet)、支持向量机(IibSVM)、前馈神经网络(RBFnetwork)和支持向量回归模型(SMO)筛选得到分类准确度为93. 42%的一组分类器(含38个microRNA)。由这38个microRNA组成的分类器，可预测样本是来自癌组织还是癌旁组织，其预测准确度达到93. 42%。基于本专利技术的这38个microRNA,可以开发成小型microRNA芯片或RT-PCR试剂盒用于区分肺癌组织和癌旁组织。miRNA及其前体本专利技术提供了ー类新的从人中发现的miRNA。如本文所用，所述的“miRNA”是指ー种RNA分子，从可形成miRNA前体的转录物加工而来。成熟的miRNA通常具有18-26个核苷酸(nt)(更特别的约19-22nt)，也不排除具有其它数目核苷酸的miRNA分子。miRNA通常可被Northern印迹检测到。人来源的miRNA可被从人细胞中分离。如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。miRNA 可从前体 miRNA (Precursor miRNA, Pre-miRNA)加工而来，所述的前体miRNA可折叠成ー种稳定本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的miRNA，其特征在于，所述的miRNA选自：(i)序列如SEQ？ID？NO：n所示的miRNA，其中n为选自1？38的正整数；或(ii)与SEQ？ID？NO：n所示序列互补的miRNA。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何祥火，梁琳慧，陆舜，陈智伟，虞永峰，
申请(专利权)人：上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：
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